I.

But de tp :
Le but de ce tp de la séparation des constituants d’un mélange colorants par la méthode de
chromatographie par papier
 Introduction :
La chromatographie sous toutes ses formes, est une méthode de séparation des constituants
d’un mélange gazeux, liquide ou solide. C’est une méthode de séparation, donc d’analyse,
basée sur les différences d’affinités que peuvent présenter deux ou plusieurs composés pour
deux phases, l’une fixe ou stationnaire et l’autre mobile.
La chromatographie est essentiellement une technique de séparation physique dont le champ
d’application en analyse quantitative est restreint aux situations où la composition du mélange
à séparer est connue. Pour identifier des composés séparés par chromatographie, lorsqu’on
ignore tout de leur structure chimique, il est fréquent de coupler à la séparation comme telle,
une technique d’analyse complémentaire comme par exemple la spectrométrie de masse ou la
spectroscopie infrarouge.
 Classement des méthodes chromatographiques selon la nature de l’interaction :
Classement selon les techniques opératoires
Chromatographie sur couche mince ou sur papier;
Chromatographie sur colonne;
Chromatographie par perméation de gel ou d’exclusion (polymères);
 Classement selon la méthode d’injection de l’éluât :
Chromatographie pulsée ou d’élution;
Chromatographie frontale
II. Partie théorique :
 Définition CHROMATOGRAPHIE SUR PAPIER
La chromatographie sur papier appartient aux chromatographies de partages. Elle est apparue
vers 1944. La séparation des composés d'un mélange est due aux différences
de solubilité. Tout dépend du coefficient de partage des composés dans 2 solvants, c'est à dire
de leur affinité pour les solvants dont l'un constitue la phase stationnaire et l'autre la phase
mobile. La phase stationnaire est retenue sur un support solide (papier (contenant un solvant
polaire = eau) ou gel). Les composés plus solubles dans la phase aqueuse se déplacent
lentement. Ceux qui sont soluble dans la phase organique migrent relativement plus vite.
Le coefficient de partage (K) d'un composé entre les 2 phases correspond à:
K = (concentration dans la ph. stationnaire)/(concentration dans la ph. mobile).
La séparation des substances peut être aussi exprimée par l'indice Rf (référence front)
correspondant (Rf = distance parcourue par une substance divisée par la distance parcourue
par l'éluant. Le Rf est difficilement reproductible. C'est pour cela il est préférable de

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caractériser chaque substance par son indice Rx (Rx = distance parcourue par la substance
divisée par la distance parcourue par un corps x pris comme référence)

 Le
papier
est le

support du solvant (ou « éluant ») et des espèces chimiques étudiées.

 Le couvercle n'est pas des plus utiles mais il isole l'expérience dans un espace clos et
permet une expérience sans intrus ni perte d'espèce.
 Le front du solvant est la distance maximale parcourue par le solvant sur le support.
 Le solvant (ou « éluant ») est la substance qui permet le déplacement des espèces
chimiques sur le support. Dans le cas de la chromatographie sur papier, le solvant
contient les espèces chimiques, ce qui n'est pas le cas pour la chromatographie sur
couche mince.
Exemple :

III. Partie pratique :

 Matériel utilisé :
Cuve chromatographique
Papier Whatman n◦ 1 de dimension 20x15 cm.
Colorants étalons : jaune soleil, jaune de quinoléine, indigo carmine et rouge ponceau.
Mélange de colorants alimentaires : vert de menthe, orange.
Eluant : mélange de butanol-1, acétone et eau dans le rapport volumique 2 :7 :2.

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  Mode opératoire :
Pour effectuer une telle séparation, une petite quantité des solutions à analyser est déposée sur
le bord d'une bande de papier de chromatographie.
Cet échantillon est adsorbé par le papier ; ce qui signifie que les molécules interagissent avec
ce dernier et qu'elles auront tendance à rester au même endroit.
Le papier est ensuite trempé dans un solvant, dit éluant, comme un mélange eau/éthanol et
placé dans un récipient fermé. Pendant que le solvant monte le long du papier par capillarité,
il rencontre l'échantillon et l'entraîne.
Les différentes substances constituant l'échantillon migrent à différentes vitesses selon
qu'elles interagissent plus ou moins fortement avec le papier.
La chromatographie sur papier demande un certain temps (généralement plusieurs heures).
Une fois l'opération terminée, généralement quand le front de solvant est presque arrivé en
haut du papier, le papier est retiré de la cuve et on laisse évaporer le solvant. Le résultat est
appelé chromatogramme.
Le chromatogramme est utilisé pour comparaison avec d'autres analyses effectuées sur des
substances connues et prises dans des conditions identiques, pour identifier les substances de
l'échantillon.
Les etapes suivants :

- Verser dansle réservoir placé dansla partie supérieure de la cuve, 50ml d'éluant entrefermer la
cuve.

- Découper une feuille de papier whatman de dimension 25x10cm.

- Tracer au crayon des traits et plier le papier

- Déposer respectivement sur les six origines de la ligne de départ, une goutte de chacun des
colorants étalons et mélanges.

-Introduire la feuille de papier dans le réservoir contenant l'éluant.

- Laisser le front du solvant se déplacer d'environ 15 cm de la ligne de départ.

- Retirer le chromatogramme de la cuve, le sécher et tracer au crayon la ligne du front du solvant.