226 L - Intéret de La Recherche Des Agglutinines Chez Les Polytransfusés

REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE
Ministère de la sante de la population et la réforme hospitalière

Institut national de formation superieur paramédical de Biskra
Mémoire professionnel
Laborantin diplômé d’état
Encadreur / Mr : Ben Farha AbdElKader Réalisé par :
*Mr : Ahmed Bazga

*Mr : Soualah Ahmima
BadrEddine
Promotion 2009/2012
Je remercie le bon dieu de m'avoir donné la santé et la force pour
pouvoir effectuer ce travail que je dédie à ceux qui de loin ou de
prés m'ont encouragé et contribué à ma formation durant ces
trois années.
Je remercie : plus particulièrement ma mère et mon père
pour leurs sacrifices, et soutenance psychique, que dieu me les
garde et les protège et leur préserve une longue vie et une
bonne santé
Sans oublier mon encadreur et notre chef d'option et mes

professeurs formateurs tout au long du notre cycle.
Je dédie ce mémoire aussi à l'ensemble de mes collègues
laborantins diplômés d'état promotion 2009/2012 à qui je souhaite
un grand succès dans la vie professionnelle et une langue vie.
Surtout mon copin
B. Ahmed
D'abord je remercie dieu de m'avoir préservé et aidé pour que
je puisse réaliser ce mémoire que je dédie :
• A mes parents qui me sont les plus chers et à qui je dois ce
que je suis, je les remercie pour leur amour, affection,
encouragements, soutenance psychique et sacrifices.
Que dieu les garde et les protége
• A mes chers frères,
• A mon encadreur et chef d'option et à tous mes enseignants
et à tous mes collègues laborantins diplômés l'état promotion
2009/2012.
Surtout mon copin
S. A. Badr Eddine
Remerciements
Nous tenons en premier lieu de présenter nos respects et nos

remerciements à monsieur "Ben Farhe AbdElKader" pour nso
encadrement et sa bienveillance et pour ses efforts tenaces et
efficaces le long de notre cycle.
Nous remercions infiniment :
• L'ensemble de nos enseignants.
• Tous le personnel du CTS, surtout :
• Mr Said Latrache et M r ElHadi et leurs collègues de travaille.
Nos sincères gratitudes à tous ceux qui ont participé de prés ou
de loin pour nous aider à la réalisation de ce travail.
Sommaire
Introduction :
- choix de thème
- problématique
- hypothèse
Approche théorique
Chapitre I :
1- Etude du sang ----------------------------------------------------------------------------------------------------- 01
1-1- définition du sang -------------------------------------------------------------------------------------- 01
1-2- les éléments figurés du sang-------------------------------------------------------------------- 01
1-2-1- les globules rouges------------------------------------------------------------------------- 01
1-2-2- les globules blancs ------------------------------------------------------------------------- 03
1-2-3- les plaquettes------------------------------------------------------------------------------------ 03
1-3- le plasma ------------------------------------------------------------------------------------------------------ 03
1-4- les fonctions du sang -------------------------------------------------------------------------------- 04
2- Immunologie---------------------------------------------------------------------------------------------------------- 04
2-1- les antigènes------------------------------------------------------------------------------------------------ 04
2-2- les anticorps: ---------------------------------------------------------------------------------------------- 04
2-2-1-les anticorps réguliers--------------------------------------------------------------------- 05
2-2-2-les anticorps irréguliers------------------------------------------------------------------ 05
2-3- la réaction antigène – anticorps-------------------------------------------------------------- 05
2-4- la réaction d'agglutination----------------------------------------------------------------------- 06
Chapitre II
1- les groupes sanguins ------------------------------------------------------------------------------------------- 07
1-1-rappel historique------------------------------------------------------------------------------------------ 07
1-2- généralité --------------------------------------------------------------------------------------------------- 08
1-3- le système ABO---------------------------------------------------------------------------------------- 08
1-3-1- les antigènes du système ABO--------------------------------------------------- 09
1-3-2- la substance H -------------------------------------------------------------------------------- 10
1-3-3- les anticorps du système ABO ---------------------------------------------- 13
1-4- le système rhésus-------------------------------------------------------------------------------------- 12
1-4-1- définition------------------------------------------------------------------------------------------ 12
1-4-2- les antigènes du système rhésus------------------------------------------------- 13
1-4-3- les anticorps du système rhésus------------------------------------------------- 14
1-5- les autres systèmes des groupes sanguins------------------------------------------ 14

1-5-1- le système Kell------------------------------------------------------------------------------- 14
1-5-2- le système Duffy---------------------------------------------------------------------------- 16
1-5-3- le système Kidd------------------------------------------------------------------------------ 16
1-5-4- le système MNSs--------------------------------------------------------------------------- 17
Chapitre III
1- Détermination du système ABO---------------------------------------------------------------------- 20
1-1-Introduction------------------------------------------------------------------------------------------------- 20
1-2- prélèvement------------------------------------------------------------------------------------------------ 20
1-3- Epreuve globulaire (Beth-Vincent) -------------------------------------------------- 20
1-3-1- principe--------------------------------------------------------------------------------------------- 20
1-3-2- technique ------------------------------------------------------------------------------------------ 21
1-4- Epreuve sérique (Michon-Simonin) -------------------------------------------------- 22
1-4-1- principe--------------------------------------------------------------------------------------------- 22
1-4-2- technique------------------------------------------------------------------------------------------- 23
1-5- Détermination du système rhésus--------------------------------------------------------- 24
1-5-1- principe--------------------------------------------------------------------------------------------- 24
1-5-2- technique------------------------------------------------------------------------------------------- 25
1-5-3-lecture des résultats ----------------------------------------------------------------------- 26
1-6- Test de coombs----------------------------------------------------------------------------------------- 27
1-6-1- principe--------------------------------------------------------------------------------------------- 27
1-6-2- test de coombs direct-------------------------------------------------------------------- 27
1-6-3- test de coombs indirect----------------------------------------------------------------- 28
1-7- Détermination de l'antigène Du------------------------------------------------------------- 32
1-7-1- principe--------------------------------------------------------------------------------------------- 32
1-7-2- techniques ------------------------------------------------------------------------------------ 32
1-7-3- lecture des résultats----------------------------------------------------------------------- 33
1-8- Détermination du système Kell ---------------------------------------------------------- 33
1-8-1- principe ------------------------------------------------------------------------------------------ 33
1-8-2-technique ---------------------------------------------------------------------------------------- 33
1-8-3- résultats et interprétations ---------------------------------------------------------- 33
1-9- phénotypage et nomenclature du système rhésus -------------------------- 33
1-10- principales indications du phénotypage ------------------------------------------ 34
1-11- la recherche des agglutinines irrégulières---------------------------------------- 34
1-11-1-introduction---------------------------------------------------------------------------------- 34
1-11-2- principe --------------------------------------------------------------------------------------- 35
1-11-3- technique ------------------------------------------------------------------------------------- 35
1-11-4- lecture et résultats -------------------------------------------------------------------- 35
Chapitre IV
1- la transfusion sanguine --------------------------------------------------------------------------------------- 37
1-1- le don du sang------------------------------------------------------------------------------------------- 37
1-2- thérapeutique transfusionnelle------------------------------------------------------------- 37
1-3- les accidents transfusionnels---------------------------------------------------------------- 38
1-4- la sécurité transfusionnelle---------------------------------------------------------------------------- 40
1-4-1 introduction----------------------------------------------------------------------------------------- 40
1-4-2- le système érythrocytaire et transfusion------------------------------------- 41
1-4-3- la prévention de l'allo-immunisation------------------------------------------ 41
1-4-4- recherche des anticorps irréguliers------------------------------------------------ 41
1-4-5- le test d'incompatibilité-------------------------------------------------------------------- 42
1-4-6- contrôle ultime au lit du malade--------------------------------------------------- 43
2- les polytransfusés-------------------------------------------------------------------------------------------------- 44
2-1 définition---------------------------------------------------------------------------------------------------- 44
Approche pratique
I- description du terrain d'expérimentation--------------------------------------------------------- 46
II- matériel et méthodes : ---------------------------------------------------------------------------------------- 47
1-matériel----------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 47
2- méthodes--------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 48
III- résultats----------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 50
IV- analyse des résultats------------------------------------------------------------------------------------------ 60
- conclusion
- bibliographie
- annexe
Introduction :
La transfusion sanguine est une injection intraveineuse du sang ou de
l'un de ses constituants provenant d'un ou plusieurs sujets dits donneurs à
un autre sujet dit receveur.
C'est une thérapie vitale dans le cas d'hémorragie, maladies
hématologiques, insuffisance rénale pendant les interventions
chirurgicales ou lors des accouchements difficiles …
Les polytransfusés sont des personnes qui ont subis plusieurs
transfusions sanguines, au fur et à mesure que ces derniers reçoivent le
sang, certains entre eux vont développer une immunisation vers les
globules rouges administrés et ce ci par la formation des anticorps
spécifiques appelés " les agglutinines irrégulières "qui sont dirigés contre
les phénotypes " Kell, Duffy….", pour cela il faut prévoir à cette
catégorie de polytransfusés du sang phénotypé pour éviter d'éventuelles
allo immunisation .
- Notre choix du thème est fondé sur l'importance de la sécurité
transfusionnelle surtout chez les polytransfusés, cette sécurité repose sur
deux points très importants:
* la séronégativité du sang du donneur
*et l'immuno-compatibilité entre le sang du donneur et celui du
receveur.
Notre thème traite ce dernier point qui est la compatibilité
immunologique entre donneur et receveur ; il s'agit donc d'éviter la
rencontre entre un antigène et son anticorps correspondant car ce sont les
globules rouges du donneur qui seront détruits par les anticorps du
receveur en cas d'une transfusion incompatible cette immuno-
compatibilité est basée sur la recherche des antigènes et anticorps
du système ABO et rhésus que sur la détermination des autres
phénotypes érythrocytaires tel que : le Kell, Duffy, Kidd, MNSs……
chez les polytransfusées, ce ci permet de donner aux receveurs un sang
phénotypé dépourvu d'antigènes correspondant aux anticorps immuns
présents chez eux et donc leurs assurer par la suite un acte transfusionnel
en toute sécurité.
- ce qu'on à comme données théoriques est qu'il est nécessaire d'effectuer
une recherche des agglutinines irrégulières "RAI" par le biais du Coombs
indirect trois mois après la transfusion sanguine, afin de déterminer si le
receveur est immunisé contre les globules rouges du donneurs, ce ci est
également intéressant pour sécuriser une future transfusion.
Mais ce qu'on a remarqué au niveau du centre de la transfusion sanguine
de Batna, c'est qu'ils n'effectuent pas les RAI d’où la question :
" Pourquoi au niveau du CTS on n'effectue pas la RAI qui est un
test très important chez les polytransfusés ? "
- Hypothèse :
- les causes qui font que les laborantins du CTS n'effectuent pas la RAI
sont :
* Le manque de panels d'hématies d'un coté
* de l'autre coté la demande du sang phénotypé pour des
éventuels polytransfusés même lors de la première transfusion.
- Notre travail comporte deux parties :

* Une partie théorique qui comporte l'étude du sang, et les
systèmes érythrocytaires et leur détermination ainsi que la transfusion
sanguine.
* Et une partie pratique où on trouve une description du terrain
d'expérimentation, le matériel et méthodes utilisées, les résultats obtenus,
l’analyse de ces derniers et la conclusion.
CHAPITRE I ETUDE DE SANG
1- Etude de sang :
1-1- Définition du sang :
Le sang et un tissu vital, fluide plus dense que l'eau son PH est légèrement
alcalin (7.2 à 7.5).
C'est aussi l'organe le plus volumineux (5Kg), unique par sa composition
liquide qui le rend d'accès particulièrement facile (prélèvement veineux ou
capillaire), il circule dans le système vasculaire d'une façon contenue et
régulière par le système cardiovasculaire.
Le sang est constitué d'une suspension de cellules dans un liquide complexe
appelé plasma comprenant lui même de l'eau sels minéraux, éléments
organiques (glucides, lipides, protéines).
Les cellules sont appelées les éléments figurés du sang dont la plus part sont des
cellules différenciées et fonctionnelles, sont séparables par centrifugation,
appartenant à trois groupes:
- les globules rouges ou érythrocytes.
- Les globules blancs ou leucocytes.
- Les plaquettes ou thrombocytes.
1-2. Les éléments figurés du sang:
1-2-1- Les globules rouges:
Représentant 99٪ des éléments figures du sang. Ils sont formés dans la moelle
osseuse à partir des érythroblastes qui par divisions successives, puis expulsion
du noyau aboutissent en 5 à 7 jours aux réticulocytes, ces derniers passent dans
la circulation générale ou ils deviennent des globules rouges matures.
Le globule rouge est une cellule anucléé dont le constituant essentiel c'est
l'hémoglobine qu'il maintient à l'état fonctionnel.
L'hémoglobine est un pigment respiratoire qui assure le transport de l'oxygène
et du gaz carbonique.
1
L'hémoglobine est de nature protéique. C'est le constituant essentiel du globule

rouge (33٪ de poids du GR), constitué par l'hème et la globine.
La membrane érythrocytaire est une membrane solide mais souple. Joue un
rôle important dans la déformabilité du globule rouge, et constitue une barrière
sélective en retenant l'hémoglobine dans le cytoplasme et permettant les
échanges des matières avec le milieu ambiant (plasma); elle est le siège
d'activités enzymatiques diverses.
L'érythropoïèse recouvre l'ensemble des phénomènes qui maintiennent le
nombre de globules rouges et le taux d'hémoglobine dans des limites
physiologiques, les facteurs impliqués dans l'érythropoïèse sont:
• Les métaux : fer et cobalt surtout.
• Les vitamines :
- Acide folique et vitamine B12 qui sont nécessaires à la division
cellulaire par synthèse de l'ADN.
- vitamines : E, B6, B1, C.
• Les acides aminés nécessaires à la synthèse de la globine.

• Les hormones : érythropoïétine, androgènes, thyroxine.
L'exploration de l’érythropoïèse comporte :
- le dosage de l'hémoglobine
- la numération des réticulocytes en valeur absolue.
Éventuellement:
- une appréciation de l'érythroblastose médullaire.
- Le dosage de certains facteurs impliqués dans l’érythropoïèse.
La durée de vie du globule rouge est d'environ 120 jours et meurt par
sénescence, chaque jour le 1/120 de la masse globulaire est détruite c'est
l'hémolyse physiologique qui se fait au niveau de la rate, moelle osseuse et le
foie, une partie des globules rouges meurt dans la circulation.
2
1-2-2- les globules blancs :

Représentent 0.2٪ des éléments figurés de sang sont des cellules nucléés
globalement spécialisées dans la défense immunitaire contre les agressions
externes (bactériologiques, chimiques…..), il s'agit en fait d'un groupe
hétérogène de cellules aux caractéristiques fonctions et durée de vie très
différentes.
On sépare les leucocytes en fonction de leur morphologie en :
- polynucléaires : neutrophiles, éosinophiles, basophiles
- mononucléaires : lymphocytes et monocytes.
1-2-3- les plaquettes
Représentent 0.6 à 1٪ des éléments figures du sang, sont des cellules
anucléés, elles ont un rôle essentiel dans la prévention et l'arrêt des
hémorragies.
Elles sont consommées au cours de l'hémostase.
Elles sont formées au niveau de la moelle osseuse à partir d'un
mégacaryoblaste, elles se différencient en mégacaryocytes sous l'influence de la
thrombopoïetine.
Leur durée de vie est d'environ une semaine à 12 jours.
1-3- le plasma
C'est la partie liquide du sang ne contient pas les cellules sanguines.
C'est un liquide jaune clair constitué de 92٪ d'eau, sels minéraux des produits
de métabolisme cellulaire (urée, co2….), les enzymes, les hormones.
- son aspect peut être trouble si le taux de lipides est augmenté et il est
jaune foncé si le taux de bilirubine est augmenté.
Après centrifugation du sang prélevé sur un anticoagulant on obtient une phase
solide constituée de cellules et une phase liquide qui est le plasma.
Par contre si on effectue un prélèvement sans anticoagulant la phase liquide
sera nommée " sérum" qui est différent du plasma car il est dépourvu de
fibrinogène et des protéines de coagulation.
3
1- 4- les fonctions du sang :

Les fonctions du sang sont nombreuses:
- fonction respiratoire assurée essentiellement par les hématies grâces à leur
pigment respiration l'hémoglobine.
- fonction immunitaire et de défense assurée par les globules blancs.
- fonction hémostatique assurée par les plaquettes et certaines protéines
plasmatiques.
- fonction de nutrition et d'épuration.
2- Immunologie:
2-1- les antigènes:
L'antigène est une substance capable d'induire une réaction immunitaire et de
réagir spécifiquement avec le produit de cette réaction cet antigène peut être
particulaire (cellule, bactérie, virus) ou soluble (protéine).
Les antigènes peuvent se groupes en 5 grandes familles : les haptènes, Les Ag
protéiques, les Ag polysaccharidiques, les lipides lorsqu’ils sont couplés avec
les protéines ; et les acides nucléiques. Selon leur origine on distingue : les Ag
naturels, synthétique et artificiels.
Parmi les antigènes naturels on trouve:
Les xéno antigènes, les allo antigènes, les autos antigènes.
Le potentiel immunogène est lié à divers facteurs, une substance est considéré
comme immunogène si elle remplie un certain nombre de conditions: le poids
moléculaire, caractère étranger, nature chimique et la voie pénétration.
2-2- les anticorps
Les anticorps sont des protéines synthétisées dans un organisme vivant en
réponse à une stimulation antigénique, ils sont présents dans le plasma, le sérum
ainsi et dans d'autres liquides et tissus (urines, liquide céphalo rachidien, lait,
ganglions et la rate).
4
Mais en présence des antigènes qui leur ont donné naissance les anticorps ont la
propriété essentielle de réagir spécifiquement avec les antigènes in vivo et in
vitro.
Des procèdes d'analyses immunologiques et physico chimiques ont permet de
reconnaître 5 grands groupes d'anticorps :
IgG, IgA, IgD, IgM, IgE.
Les anticorps sont faits de 4 chaines polypeptidiques : 2 lourdes « H » et 2
légères « L» unies ensemble par des ponts disulfures.
La mise en évidence par immunofluorescence des AC dans les plasmocytes a
permet d'attribuer à ces cellules la fonction de production des AC qui ne leur est
d'ailleurs pas exclusive puisque certains lymphocytes B peuvent aussi
synthétiser les AC.
On distingue 2 types d'anticorps :
2-2-1- les anticorps réguliers
Ils sont toujours présents avec ou sans pré immunisation préalable
apparente par l'antigène correspondant, ce sont des anticorps complets et ils
peuvent être d'origine naturelle (les anticorps du système ABO) ou immune
(après immunisation).
2-2-2- les anticorps irréguliers
Anticorps détectés parfois dans le plasma, ce sont des anticorps incomplets et
sont d'origine immune (les agglutinines irrégulières) ou naturelle (anticorps anti
Lewis, anti P).
2-3- la réaction antigène-anticorps :
La combinaison des anticorps et des antigènes correspondants se révèle par
des réactions immunologiques d'aspect varié, suivant le type d'antigène ou
d'anticorps, mais qui révèle des mêmes principes généraux.
L'étude de la réaction élective entre le déterminant antigénique et le site
anticorps a pu être entreprise grâce à l'emploi de système simple tel que les
haptènes.
5
La réaction Ag-AC est spécifique à chaque déterminant correspond un

anticorps spécifique de ce déterminant ce ci implique une complémentarité
étroite entre les structures réactives antigènes et anticorps.
Cette réaction n'est pas covalente et met en jeu des forces d'interactions
moléculaires relativement faibles comparables à celles existant entre les
acides aminés constituants les chaines protéiques.
La stabilité de la liaison Ag-AC sera donc fonction de l'exacte complémentarité
entre les sites Ag et AC qui réduit au maximum les distances.
2-4- réaction d'agglutination
Elle met en évidence des Ag particulaires qui s'amassent en dépôts
volumineux en présence d'immun sérums qui leurs sont spécifiques.
Lorsque les particules (bactéries, GR, GB, plaquettes), sont en suspension en
tube, leur agglutination les entraîne au font et le surnageant s'éclaircit.
L'agglutinat est provoqué par la neutralisation des forces répulsive portées
par les particules (potentiel zêta) et la formation d'un réseau. La réaction
d'agglutination est particulièrement facile à obtenir avec des AC appartenant à
la classe des IgM, les AC agglutinants furent appelles agglutinines.
Applications :
L'agglutination est dite active lorsque l'Ag reconnu par l'AC agglutinant
appartient en propre à la particule, si l'Ag ne fait pas partie intégrante de la
particule l'agglutination est dite passive.
On appelle agglutination directe une réaction entre un antigène particulaire et
un AC agglutinant, lorsque l'AC est n'est pas agglutinant l'on à recourt à
l'antiglobuline l'agglutination est dite indirecte.
- l'agglutination active et utilisée lors de la détermination des groupes sanguins,
lors du diagnostic des maladies infectieuses (salmonelloses).
- l'agglutination passive est utilisée lors du diagnostic des maladies auto
immunes, diagnostic sérologique de la poly arthrite rhumatoïde dans le cas du
test au latex et l'hémagglutination dans le Waaler-rose.
- l'agglutination indirecte est représentée par le test à l'antiglobuline encore
appelé le test du coombs.
6
CHAPITRE II LES GROUPES SANGUINS
1- Les groupes sanguins:

1-1- Rappel historique:
L'homme à eu recours à des transfusions de sang animal pour les
vertus reconnus à certains animaux : force, bravoure, jeunesse et à des
transfusions de sang humain après l'échec des premières, pour le
traitement du choc hémorragique responsable de la mort de nombreuses
jeunes femmes lors de la délivrance.
Mais n'a jamais compris la physiopathologie des accidents
transfusionnels observés.
La découverte en 1900 des groupes A, B et O par LANDSTEINER
et du groupe AB par DE CASTELLO et STURLI 1902, constituant le
système ABO va permettre le développement de l'immunologie
transfusionnelle qui constitue la base rationnelle des transfusions
sanguines.
En 1927, LANDSTEINER et LEVINE découvrent deux autres
systèmes de groupes sanguins: M N et P, en immunisant des animaux
avec hématies humaines.
En 1939-40, LANDSTEINER et WIENER découvrent le système
RhD, en immunisant des lapins avec du sang de singe macaccus rhésus.
L'observation à cette époque par LEVINE dans le sérum d'une femme
venant d'accoucher d'un enfant atteint d'érythroblastose fœtale, maladie
jusqu'alors mystérieuse, d'un anticorps réagissant avec des hématies du
père et aussi avec celles de l'enfant, allait offrir des clés de
compréhension de la physiopathologie de la maladie hémolytique du
nouveau-né, ainsi est montée la possibilité d'immunisation entre
individus d'une même espèce: l'allo- immunisation.
La mise au point à cette époque de la réaction à l'anti-globuline par
COOMBS, MOOURANT, et RACE, appliquée à l'étude des sérums de
malades polytransfusés ou de femmes ayant fait des grossesses a permis
7
la recherche d'anticorps définissant des antigènes nouveaux appartenant

à des systèmes de groupes sanguins différents Rh, kell, Duffy, Kidd,
MNSS…
Durant les années 1955-60, les antigènes des leucocytes et des
plaquettes furent reconnus, les plus importants étant ceux du système
HLA.
En 1956, GRUBB et OUDIN découvrent les marqueurs antigéniques
allotropiques des immunoglobulines.
1-2- Généralité:
Les groupes sanguins des globules rouges sont représentés par un
ensemble d'antigènes allo typiques exprimé à la surface de la membrane
de globules rouges, qui sont génétiquement induit par une unité
génétique mono factorielle et génétiquement indépendants les uns des
autres.
Les groupes sanguins érythrocytaires sont très nombreux, mais deux
systèmes sont particulièrement importants :
Le système ABO et le système rhésus.
1-3- le système ABO :

Définition :
Le plus anciennement connus et le plus important en immunologie
transfusionnelle, il est défini par la présence sur le globule rouge de deux
substances A et B qui peuvent être présente séparément ou ensemble ou
être absente toutes les deux.
Dans les sérums on trouve des anticorps anti A et anti B qui ont la
propriété d'agglutiner les hématies (agglutinines), s'ils fixent le
complément les hémolysés (hémolysine) ils sont présents à chaque fois
8
que le facteur correspondant est absent du globule rouge on obtient ainsi

le tableau des quatre groupes sanguins :
groupe AG globulaire AC naturels sériques

O ni A ni B anti A et anti B
A A anti B
B B anti A
AB A et B ni anti A ni anti B
1-3-1- les antigènes du système ABO:

Les systèmes ABO comprend deux antigènes A et B qui sont présents
sur la membrane des globules rouges et décrivent les quatre groupes
érythrocytaires :
Groupe A ou B possèdent sur leurs globules rouges (et sur leurs
autres tissus) les antigènes A ou B.
Les individus du groupe AB possèdent à la fois les antigènes A et B.
Ceux du groupe 0 (zéro) n'en possèdent aucun.
Il est à noter que le groupe A est hétérogène et peut être divisé en
deux sous groupes portant les Ag, un peut différents qui sont A1 et A2.
En fonction de cette différence le système ABO peut être divisé en six
groupes qui sont :
A1, A2, B, A1B, A2B et O, ils sont aussi présents dans certains liquides de
sécrétion comme la salive.
Leurs natures chimiques sont complexes. Ils sont des protéines
formées de chaînes polypeptidiques auxquelles sont accolés des
oligosaccharides.
9
1-3-2- la substance H :
L'Ag H existe chez la plupart des individus, les antigènes A et B
s'élaborent chimiquement à partir de ce précurseur; la quantité d'antigène
H sera plus importante sur les hématies A et B que sur les hématies AB,
elle sera élevée sur les hématies O.
Il existe de très rares sujets ne possédant pas d'antigène H, ils sont
définis par le phénotype «Bombay ».
Ces sujets peuvent se confondre avec les sujets «O» car leurs globules
rouges ne sont pas agglutinés par l’anti A et anti B et leurs sérums
agglutinent, les globules rouges A et B ils posent un problème lors de la
transfusion.
Le phénotype Bombay :
Le système génétique Hh est responsable de la détermination des
antigènes A et/ou B.
Une très faible minorité des sujets sont h h dont les antigènes A et/ou
B ne sont pas exprimés sur les hématies et leur détermination se fait sur
la salive et le système de sécrétion responsable de la présence ou non des
antigènes A, B, H dans la salive :
- 80% sont dits sécréteurs donc Se Se, Se se
- 20% sont dits non sécréteurs se se.
Sujet O Sujet Bombay hh
Substance A - -
Substance B - -
Substance H +++ -
Anti-H - +++
10
1-3-3- les anticorps du système ABO :

Il y a 3 classes principales :
Anticorps dits naturels réguliers :
Le système ABO est très particulier en raison de l'existence de ces
anticorps naturels réguliers. Naturellement et constamment présents en
dehors de toute immunisation :
Un sujet pourvu d'un antigène A, par exemple, possédera un
anticorps anti-B.
Le nouveau-né possède souvent des anticorps naturels acquis par
vois transplacentaire et ses immunoglobulines seront à un titre faible,
d’où des difficultés de groupage.
Les anticorps naturels sont des IgM, agglutinants en milieu salin à
4°c.
- anti-B de sujet A.
- anti-A de sujet B.
- anti-A + B de sujet O.
Anticorps dits naturels irréguliers :
Il existe parfois chez certaine personnes (ils sont alors dits irréguliers,
car inconstant), exemple : anti-A1 chez des sujets A2 ou A2B, anti-H.
Anticorps immuns « irréguliers »:
Il sont au contraire généralement acquis survenant à la suite d'une
transfusion incompatible soit d'une grossesse à la faveur d'un passage
dans la circulation naturelle d'hématies fœtales.
11
Les propriétés des anticorps naturels et immuns

anticorps naturels anticorps immuns
1- retrouvés spontanément 1-retrouvés après stimulation
2-toujours présents : réguliers antigénique
3- agglutination en salin 2-apparition inconstante et irrégulière
4- non hémolysants 3-agglutination indirect (coombs-
5-optimum d'activité de 4°c à 18°c enzyme)
6- de classe IgM 4- hémolysants
7- ne traversent pas le placenta 5-optimum d'activité à 37°c
8- apparaissent après 3 mois chez 6- de classe IgG
le N-Né 7- traversent la barrière placentaire
1-4- le système rhésus :

1-4-1- Définition :
Le système rhésus est parmi les systèmes immunogènes dont les Ag
sont le plus souvent responsables d'allo-immunisation transfusionnelles
ou foeto-maternelles.
Il est caractérisé par l'absence d'iso agglutinines naturels dans le
sérum et l'existence sur les hématies d'une mosaïque d'Ag, parmi
lesquels l'antigène D qui est le plus important dont les sujets possédants
cet Ag (85%) sont dits rhésus (+) et ceux qui ne possèdent pas (15%)
sont dits rhésus (-).
12
1-4-2- les antigènes du système rhésus :

L'approche du système RH est complexe pour plusieurs raisons :
Il existe actuellement 35 déterminants antigéniques connus, mais en
transfusion sanguine l'importance est donnée pour seulement cinq
antigènes qui sont : D, C, E, e, c correspondant à 6 gènes qui
apparaissent en 3 couples d'allèles : Dd, Ee, Ce.
L'antigène D est le plus important car il possède le plus fort pouvoir
immunisant mais dans certains cas, malgré que la compatibilité par le
système ABO et l'Ag D est parfaitement respectée. Il arrive des accidents
qui sont dus à une incompatibilité pour les autres antigènes, parmi
lesquels il y'a l'antigène LW qui est associé à l'Ag D est responsable des
cas suivants :
• Les hématies RH(+) sont agglutinées par l'anti-LW et
peuvent l'absorber.
• Les hématies RH(-) sont faiblement agglutinées par
l'anti-LW mais l'absorbent bien.
• Les hématies RH nul n'expriment pas l'antigène LW, pas
plus qu'elles n'expriment les antigènes RH.
Anti Anti Anti Anti Anti Type Anti Anti Anti Anti Anti Type
D C c E e selon D C c E c selon
mourant mourant
+ - + - + ccDee - - + - + Ccddee
+ + - - + CCDee - + - - + Ccddee
+ + + - + CcDee - + + - + Ccddee
+ - + + - eeDEE - - + + - ccddEE
+ - + + + ccDEe - - + + + ccddEe
+ + + + + CcDEe - + + + + CcddEe
+ + - + + CCDEe
+ + + + - CcDEE
13
1-4-3- les anticorps du système rhésus :

Les anticorps anti RH sont les plus fréquents des immuns irréguliers,
pratiquement toujours des lgG (essentiellement IgG1, et/ou IgG3), et font
du système RH le système le plus important en clinique avec le système
ABO.
Les AC anti RH résultent tous d'une allo-immunisation foeto-
maternelle ou transfusionnelle, ils sont soit complets qui agglutineront
les globules rouge en suspension saline ou incomplets n'agissant sur ces
derniers sauf s’ils sont combinés à une enzyme qui permet la fixation
(papaïne, trypsine, bromiline, ou la fascine).
Ces AC fixés sont révélés par un sérum à l'antiglobuline humaine.
1-5- les autres systèmes des groupes sanguins :

En dehors des systèmes ABO et RH, il existe de nombreux antigènes
constituants une trentaine de groupes érythrocytaires et si leur étude
approfondie ne se justifie pas ici, il est néanmoins nécessaire d'en
connaître les plus importants
1-5-1- le système Kell :

L'importance du système Kell est due à l'antigène K, qui lui a donné
son nom et qui possède un très fort pouvoir immunogène.
Il figure parmi les systèmes de groupes sanguins les plus
immunogènes aussitôt après le système RH, d’où la fréquence des allo-
immunisation par transfusion ou par grossesse due aux anticorps anti-K.
L'antigène Kell est le produit de l'allèle K mais son antigène
antithétique appelé cellano K est beaucoup plus fréquent.
14
L'expression des Ag du système Kell liée à un autre antigène appelé Kx,

produit par un gène localisé sur le chromosome X.
L'Ag Kx est nécessaire à l'intégrité morphologique et fonctionnelle de
la membrane du globule rouge.
Le système Kell n'est pas seulement limité aux deux antigènes K et K
en fait, c'est un système très complexe constitué schématiquement de
quatre séries d'allèles étroitement liés: Kk, KPa, KPb, JSa, JSb, K11, K17.
D'autres Ag appelés "para-Kell", sont d'une manière ou d'une autre
associés à ce système.
Les AC du système Kell sont à quelque exception près des AC
immuns et incomplets (lgG), réagissant bien en test de coombs indirect
(mais parfois mieux en sérum AB).
L'anti-K est le seul qui ne soit pas rare et qui soit responsable de
conflits transfusionnels et foeto-maternels relativement communs (91%
des receveurs sont K(-): quand un flacon de sang leur est injecté, ce
flacon a 9 chance sur 100 d'être K(+), et dans cette circonstance, le
risque d'immunisation est d'environ 10%).
SERUM -TEST
Phénotype Génotype
Anti K Anti k
+ - K KK
+ + K Kk
- + k kk
15
1.5.2 Le système Duffy:

Le système Duffy occupe la quatrième place après ABO, RH et
Kell dans l'échelle d'importance clinique des systèmes de groupe.
Il doit cette place à deux Ag: Fya et Fyb produits par deux allèles
qui furent les premiers gènes de groupe a être localisés sur un autosome
déterminé.
Les AC anti-Duffy sont des AC immuns, de nature lgG, qui sont
au mieux détectés par le test de coombs indirect.
Ils peuvent être responsables d'accidents transfusionnels
hémolytiques, parfois mortels, et sont une cause occasionnelle de
maladie hémolytique périnatale.
SERUM -TEST
Anti Fya Anti Fyb
+ - Fy (a+ b-) Fya Fya
+ + Fy (a+ b+) Fya Fyb
- + Fy (a- b+) Fyb Fyb
- - Fy (a- b -) Fy Fy
1.5.3 Le système Kidd:

Le système Kidd est important parce que l'antigène JKa, est très
immunogène.
Le dépistage et l'identification de l'anti-JKa chez des malades
poly-transfusés sont souvent difficiles et pourtant essentiels.
Cet anticorps peut être à l'origine de réactions hémolytiques
sévères.
Le système Kidd est représenté par deux antigènes anti-
thétiques: Jka et JKb produits par deux allèles.
16
Un phénotype silencieux, JK (a - b) est très rare: ces sujets

peuvent produire un anti JK3 qui réagit avec les hématies JK (a+)
et/ou JK (b+).
SERUM -TEST
Anti Jka Anti Jkb
+ - JK (a+ b-) JKa JKa
+ + JK (a+ b+) JKa JKb
- + JK (a- b+) JKb JKb
- - JK (a- b-) JK JK
1.5.4 Le système MNSs:

Le système MNSs est un système complexe, caractérisé par un
nombre toujours croissant de variantes génétiques.
Il se présente alors comme un système à deux couples d'allèles
co-dominants, étroitement liés sur une paire de chromosomes.
Il existe donc 4 chromosomes (NS étant le plus rare), 10
génotypes et 9 phénotypes.
Le système MNSs est fondé sur l'existence de quatre haplotypes
formés par deux paires de pseudo-allèles: M et N d'une part et S et
s d'une part.
Les antigènes M et N sont localisés sur le glycophorine A tandis
que les antigènes S et s sont situés sur la glycophorine B.
17
Les fréquences sont celles de la race blanche.

Phénotype Génotype Fréquence
Ms MS/MS 6%
MSs MS/Ms 14%
Ms Ms/Ms 8%
MNS MS/NS 4%
MS/Ns
MNS 23%
Ms/NS
MNs Ms/Ns 23%
NS NS/NS 0,5%
NSs NS/Ns 6,5%
Ns Ns/Ns 15%
18
Les autres systèmes de groupe sanguin sont démontrés dans le tableau

suivant :
Autres systèmes de groupes érythrocytaires.
SYSTEME GENES ANTIGENES GROUPES PRINCIPAUX OBSERVATIONS
MNSS M ou N MS, MSs, Ms * très rares anti-M ou
NS, NSs, Ns anti-N naturels
S ou s irréguliers.
MNS, MNSs, MNs
M, N, S, s * Anti-S et anti-s
immuns, rares mais
dangereux.
P P1, P2 P1, P P2 80% Anti-P1 naturels
P2 20% irréguliers.
ou P P
Anti-P + P1 très
rares (hémolysine
biphasique).
Lewis Le, Le Le Lea Salive Antigènes solubles
Se, Se Le+Se Lea Le (a+b-) Le (a+b-)
20% secondairement fixés
et Le (a+b-) Le (a-b+) 70% sur les érythrocytes.
Leb Le (a-b-) Le (a-b-) 10% Anti-Lewis naturels
Le rien rares parfois
hémolytiques.
Kell-cellano K, k K, k Kell + (KK ou Kk) 90% Anti-Kell immuns
Kpa, Kpb Kpa, Kpb Kell –(KK) relativement
Fréquents
dangereux.
Duffy Fya Fya, Fyb FY (a+b+) 46% Anti-FYa ou anti-
Fyb ni Fya FY (a-b+) FYb immuns rares
Ou Fy ni Fyb FY (a+b-) mais dangereux
Kidd Jka Jka, Jkb JK (a+b+) 50% Anti-JKa ou anti-
Jkb ni Jka JK (a+b-) JKb immuns rares
Ou Jk ni Jkb JK (a-b+) mais dangereux.
Lutheran Lua LU (a-b+) 90% Anticorps immuns

Lub Lua, Lub LU (a+b+) très rares.
LU (a-b+)
Diego Dia Di (a+b-) Ac immuns très rares
Dib Dia Di (a-b+) mais dangereux,
Dib localisés chez les
amérindiens et les
mongoloïdes.
Li I+i adultes Ati-I agglutinines
I+i+ nouveau-nés froides
Anti-i dans M.N.I
Xg Xg, Xg (a+) Variation de fréquence
a
Xga Xg Xg (a-) avec le sexe:
- homme 60% Xga+
- Femme 88% Xga+
19
CHAPITRE III DETERMINATION DU SYSTEME ABO
1-Détermination du système ABO :

1-1-Introduction :
Cette détermination comporte obligatoirement deux épreuves qui
sont réalisées au laboratoire.
La première est l'épreuve globulaire de Beth-Vincent qui consiste à
l'aide de sérum-test à mettre en évidence les antigènes présents sur
les hématies d'un sujet.
La seconde est l’épreuve sérique de Simonin qui à l'aide de globules
rouges test permet de déceler et reconnaître les anticorps naturels
Anti-A et/ou anti-B du sérum de ce sujet.
1-2-Prélèvement:
Il doit être recueilli sur un anticoagulant (EDTA. citrate de soude,
oxalate), 4 à 5 ml de sang sont nécessaires, le tube doit comporter
I’ identification Complète du sujet à grouper: nom, prénom, date de
naissance, service demandeur ou adresse du sujet.
1-3-Épreuve globulaire (Beth-Vincent) :
1-3-1- Principe :
C'est la recherche d’antigènes érythrocytaires présents sur la
membrane du globule rouge à l’aide de réactifs de spécificité : Anti-
A, Anti-B, Anti-AB, Anti A1, Anti-H.
Réactifs et matériels :
- Sérum-tests :
* D'origine humaine anti-A. anti-B, anti AB.
*D'origine végétale : anti-A1, anti-H.
Ils doivent être conservés à (+ 4°c). Toute contamination par
des érythrocytes doit être soigneusement évitée.
- Soluté physiologique.
- Baguette de verre rodé.
20
- Tubes à hémolyse
- Centrifugeuse
- Portoir
1-3-2- Technique :
Le groupage sanguin s'effectue sur plaque ou en tube.
- Sur plaque :
-S'assurer de la propreté de la plaque avant la détermination.

-Déposer sur la plaque d'opaline de haut en bas ou côte à côte :
* Une goutte de sérum test anti A
* Une goutte de sérum test anti B.
* Lire goutte ce sérum test anti AB
* Une goutte de sérum test anti A1.
* Une goutte de sérum test anti H.
Déposer à côté de chacune de ces gouttes de globules rouges de
l’échantillon à tester.
- À l'aide d'un agitateur ou d'un fond d'un tube de verre, on
mélange soigneusement chaque couple : sérum-hématie.
- L'agitateur est soigneusement essuyé entre chaque mélange. Le
diamètre du cercle d'étalement doit être de 2 à 2,5cm, on
imprime à la plaque un mouvement d'osculation circulaire de
faible amplitude.
* lecture de résultats :
Quand l'agglutination se produit, il apparait des amas
globulaires de plus en plus nettement définies nageant dans un
liquide limpide. Au contraire en l'absence d'agglutination le
mélange restant en suspension uniforme.
21
- En tube :
Il faut utiliser des tubes à hémolyse.

-Déposer respectivement les antisérums Anti-A. Anti-B. Anti-AB, Anti-
A1, Anti-H.
-Ajouter successivement dans chaque tube les hématies à tester
préalablement lavées en eau physiologique, et suspendues dans celle- ci à
la concentration de 3 à 5%.
-Bien mélanger et centrifuger tout les tubes pendant 15 minutes à 3400
tours/minute, ou laisser reposer les tubes à la température du laboratoire
pendant 15 à 60 minutes.
-Agiter légèrement les tubes pour remettre les hématies en suspension,
puis rechercher la présence d'agglutination des globules rouges
*lecture des résultats :
La lecture s'effectue on secouant légèrement les tubes et en
observant simultanément le comportement des globules rouges
S’ils se remettent aisément en suspension : il ya absence
d’agglutination, s’ils se présentent sous forme d’un culot se
décollant difficilement en un ou plusieurs blocs : il y a présence
d’agglutination.
1-4- Épreuve sérique (Michon-Simonin) :
1-4-1-Principe :
C'est la recherche d'anticorps naturels plasmatiques à l'aide de
globules tests : A1, A2, B et O,
- Réactifs et matériels :
-Les globules tests: spécificité A1. A2, B, O, doivent être préparé
quotidiennement à partir du sang fraichement prélevé.
-Baguettes de verre rodé.
-Tubes à hémolyse.
22
-Centrifugeuse
-Portoirs.
-Pipettes pasteur.
1-4-2-Technique :
- Sur plaque :
- Déposer sur la plaque d'opaline de haut en bas ou côte à côte :
quatre gouttes, de plasma échantillon, à côte de chacune de ces
gouttes déposé respectivement :
* Une goutte de globules –tests A1.
* Une goutte de globules –tests A2.
* Une goutte de globules –tests B.
* Une goutte de globules –tests O.
A l’aide d'un agitateur (baguette de verre) On mélange
soigneusement chaque couple plasma-hématie
L'agitateur est soigneusement essuyé entre chaque mélange, on
imprime à la plaque un mouvement d'osculation circulaire de faible
amplitude.
* lecture des résultats :

- Présence d'agglutination se traduit car l'apparition des amas globulaires
nageant dans un liquide limpide.
- L'absence d'agglutination se traduit par une suspension uniforme.
- En tube :
- Déposer et repérer au marqueur quatre tubes.
- Déposer dans chaque tube une goutte de plasma échantillon.
- Ajouter au premier tube une goutte de suspension de globules-
tests A1 au second tube une goutte de suspension de globules-
tests A2, au troisième tube une goutte de suspension de
23
globules-tests B et dans le dernier tube une goutte de

suspension de globules-test O.
*Lecture des résultats :
La lecture s'effectue en secouant légèrement les tubes et en
observant l'absence ou la présence d'agglutination.
*Témoins utilisés :
- Témoin auto: sérum du malade + ses propres globules rouges
(GR) : démontre s'il est négatif, l'absence d'auto anticorps actifs
à la température du laboratoire (auto anticorps froids).
- Témoin AB : sérum AB+ GR du malade. garantit l'épreuve
globulaire en démontrant s’il est négatif, l'absence de poly
agglutinabilité.
- Témoin ALLO : sérum du malade + un panel de GR O.
Ces témoins s'ils sont négatifs garantissent l'épreuve sérique en
démontrant qu'il n'y a pas d'allo anticorps (AC irréguliers)
puissants en dehors du système ABO actif à 22°.
1-5-Détermination du système Rhésus :
1-5-1 Principe :
- Le système Rhésus est un système de groupes sanguins
caractérisé par l'existence sur l’hématie d'une mosaïque de
plusieurs antigènes et par l’absence d’iso-agglutinine dans le
sérum.
La détermination du facteur Rhésus standard se fait par
agglutination entre un sérum-test anti-D et les hématies du
sujet, cette réaction doit être effectuée sur plaque à 37°c. la
recherche de facteur Rhésus est effectuée en duplicata par deux
opérateurs différents utilisant chacun un anti-D différent.
24
" Matériels et réactifs :

- Hématies du sujet.
- Sérum-test anti-D.
- Bain-marie à 370 c.
- Centrifugeuse et microscope.
- Rhésuscope.
1-5-2-Technique :
- la réaction se pratique à chaud : 370 à 400c sur plaque

chauffante ou en tube.
- Sur plaque :
Préparer une dilution concentrée à 50% de globules à tester
dans leur propre plasma.
- Amener la plaque à une température voisine de 400c
(Rhésuscope).
- Déposer côte a côte :
* Une goutte de sérum-test anti-D.
* Une goutte d'hématie.
- Étaler les gouttes sur la plaque d'opaline chauffante en les
mélangeant sur une surface ronde de 2 cm de diamètre.
- Attendre 2 à 3 minutes en soumettant la plaque à un lent
mouvement de bascule, autour de son axe jusqu'à ce
qu’apparaisse le premier agglutinat.
-En tube:
-Placer une goutte de sérum-test anti-D dans un tube à hémolyse dans
lequel on ajoute une goutte de globules rouges à tester en suspension
sérique à 5%. (Cette suspension peut être effectuée, soit dans leur propre
plasma. soit après lavage des hématies) Laisser le mélange une à deux
heures à 37C° ou lire après centrifugation à 1000 tours/minute.
25
1-5-3- lecture des résultats :

-Si l'agglutination se produit, le sujet est dit « Rhésus positif »
-Si l'agglutination ne se produit pas, le sujet est dit « Rhésus négatif ».
Témoins utilisés :
Adjoindre à chaque série de groupe deux témoins de l’activité de sérum
test
*Témoin positif : une goutte d'anti-D plus une goutte de
suspension globulaire (50%) de globules rouges Rhésus positif connus.
* Témoin négatif: une goutte d'anti-D plus une goutte de suspension
globulaire (50%) de globules rouges Rhésus négatif connus.
* Un témoin albumine : il est effectué avec chaque détermination pour
éliminer les fausses positivités dues à une auto-agglutination. Il est
effectué en ajoutant une goutte d'hématie à une goutte d’albumine.
Utilité de témoin albumine : point fondamental car toute hématie

sensibilisée par un anticorps (AC) de type IgG ou en milieu hyper
protidique est généralement agglutinable en milieu albumineux. Par
exemple un malade atteint d'une anémie hémolytique avec auto- anticorps
(AC) de type IgG ses GR déjà recouverts d'anticorps (AC) avant la mise
au contrôle sur le réactif anti-Rh.
Donc ils seront agglutinés hors de la réaction même s'ils sont Rh(-) à
cause de l'albumine présente dans le réactif ; on est alors obligé d'utiliser
un anti-Rh agglutinant en milieu salin.
26
1-6- Test de Coombs :

1-6-1- Principe :
Les anticorps incomplets sont capables de se fixer sur les hématies
porteuses de l'antigène homologue sans provoquer une agglutination en
milieu salin.
Quand un anticorps non agglutinant en milieu salin se fixe sur son
antigène à la surface de l'hématie (premier temps) la liaison Ag-AC est
suffisamment solide pour que la globine anticorps ne se détache pas a la
surface de l'hématie même après plusieurs lavages. Au contraire, les
globines ou autres protéines qui peuvent s'absorber de manière non
spécifique à la surface de l’érythrocyte seront pour une grande part
enlevées par ces lavages et se retrouveront dans le surnageant.
Dans un deuxième temps, on provoque l'agglutination des hématies ainsi
sensibiliser, en les mettant en présence d'un réactif antiglobuline,
reconnaissant spécifiquement et donc se fixant sur l'Ac lié aux Ags
globulaires.
Il existe deux variantes de la réaction de Coombs : le test de Coombs
direct ; et le test de Coombs indirect.
1-6-2- Test de Coombs direct :

Ce test s'applique aux cas où les hématies sont sensibilisées in vivo
d'immunoglobulines ou de complément.
C’est le cas des anémies hémolytiques à auto-Ac ou dans la maladie
hémolytique du nouveau-né. (Sensibilisation du N.Né par un Ac
maternel ayant traversé la barrière placentaire durant la grossesse).
Dans ces conditions, la mise en contact des hématies lavées avec
l'anti globuline entraîne l'agglutination en une seule réaction.
27
Technique :
- Pratiquer plusieurs lavages des hématies à tester en solution saline
isotonique.
-Faire une dilution des hématies à 5%.
-Mettre en contact ces hématies avec le sérum de Coombs.
-Noter la présence ou l'absence d'une agglutination.
- La présence de cette dernière désigne une réaction positive d'où une
fixation d’anticorps sur les hématies.
1-6-3 .Test de Coombs indirect :
Principe :
Dans un premier temps, on sensibilise in vitro les hématies à l'aide de
l'anticorps utilisé, dans un deuxième temps après lavage, l'adjonction
d'antiglobuline provoque l'agglutination des hématies sensibilisées.
On peut ainsi ; soit identifier l'anticorps si on utilise un antigène connu
(recherche d'agglutinine irrégulière) soit identifié l'Ag si c'est l'anticorps
qui est connu. (Phénotypage).
Réactifs antiglobuliniques :
Les réactif antiglobuliniques sont obtenu par immunisation d'animaux
(lapin, chèvre, cheval etc..) à laide de sérum humain total,
d’immunoglobulines purifiées de classe déterminée (lgG IgM, IgA. etc..)
de complément.
Il existe ainsi des antiglobulines de différentes sortes:
-Polyvalentes, reconnaissent les immunoglobulines IgG, IgM.
- Spécifique de classe anti-IgG. anti-lgM, anti-lgA.
-Anti complément, reconnaissent la fixation du complément sur un
complexe antigène - anticorps.
28
La technique :
Sensibilisation :
-Déposer successivement dans un tube à hémolyse :
-1 goutte de sérum.
-1 goutte de globules rouges préalablement lavés et remis en
suspension en soluté salé physiologique à 5%
(Les hématies peuvent éventuellement avoir été traitées auparavant par
une enzyme « Coombs - enzyme »).
-Incuber 45 minutes à la température optima d'activité de l'Ac : 370c
pour les anticorps du système Rh (étuve).
-Après incubation, rechercher une hémolyse éventuelle, qui se traduit
par une coloration plus au moins rosée du surnageant.
-Remettre le culot globulaire en suspension dans le petit volume de
liquide restant et noter le cas échéant l'intensité de l'agglutination
apparue.
-Si l'agglutination est totale est (+ +). Il est évidemment inutile de
poursuivre.
Lavage :
-Pratiquer autres lavages en soluté salé physiologique en utilisant 1
volume de globules rouges pour environ 50 volumes de soluté, pour
décanter le surnageant, il est possible d'incliner directement le tube ;
compléter la décantation à laide d'une pipette pasteur, comme après
l'incubation, on notera une agglutination éventuelle après le premier
lavage.
29
-Après chaque lavage, il est important de mettre le culot en suspension

dans le petit volume de liquide restant après adjonction de soluté salé
physiologique, on aura soin d'obtenir une suspension globulaire
homogène.
Adjonction de l'antiglobuline :
Préparer à partir du denier culot de lavage, une suspension en saline è
2% si on doit effectuer le test en tube, à 5% si on doit effectuer le test
sur plaque.
Test en tube :
-Déposer successivement dans un tube à hémolyse
-1 goutte d'antiglobuline à la dilution convenable.
-1 goutte de la suspension à 2% d'hématies sensibilisées et lavée.
-Porter le tube 1 heure à 37°c (ou à 220c selon l'antiglobuline utilisée).
-Lire au microscope après étalement du culot sur lame.
Test sur plaque :
-Déposer sur plaque d'opaline très propre :
-1 goutte d’antiglobuline à dilution convenable.
-1 goutte de la suspension à 5% d'hématies sensibilisées et lavées.
-Bien mélanger avec un agitateur de manière à étaler sur un cercle de 2
cm de diamètre.
-Continuer le mélange par agitation circulaire de plaque d'opaline.
-laisser reposer la plaque quelques instants. Effectuer à nouveau une
agitation circulaire douce.
30
Lecture :
Les agglutinants apparaissent généralement en moins de 4 minutes
en cas de réaction positive
Comparaison entre le test de Coombs direct et indirect.
Test de
Test de Coombs indirect
Coombs direct
Inn Vivo IN VITRO
Des GR de Des GR à
Sensibilisatio référence par étudier par le
n sérum à tester sérum de
référence
Constituants Anticorps Anticorps Antigène

mis en
évidence
Diagnostic RAI Phénotypage
Application des : AHAI Femme Ex : Du,Kell….
MHNN enceinte avant
et après
transfusion
31
1.7 Détermination de l'antigène Du :

1-7-1- Principe :
La présence de l'antigène Du sur les hématies peut parfois être
suspecté sur la constatation d'agglutinations très fines et d'apparition
tardive avec le sérum anti-D.
Sa recherche doit être effectuée chez tous les individus Rhésus
négatifs et plus particulièrement s’ils possèdent l'antigène C ou
l'antigène E.
La recherche de l'antigène Du est effectuée par réaction de Coombs
indirect.
Réactifs et matériels :
-Hématies du sujet.
-Hématies Rhésus positif servant de témoin positif.
-Anti globuline polyvalente, anti-D.
-Soluté physiologique.
1-7-2-Technique :
- Laver trois fois les globules rouges à tester et les mettant en
suspension à 10% en eau physiologique et décanter
complètement le surnageant après chaque lavage.
- Ajouter à chaque tube (contenant des hématies) : une goutte de
l’anti-D.
- Faire un témoin positif dans les mêmes conditions.
- Incuber une heure à 37°c.
- Laver trois fois.
- Ajouter une goutte d’antiglobuline
- Centrifuger une minute à 1000 tours/minute.
- Rechercher macroscopiquement et microscopiquement la
présence ou l'absence d'agglutination.
32
1-7-3-Lecture des résultats :

L'absence d'agglutination dans le tube inconnu indique que les hématies
ne possèdent pas la variante de l'antigène Du et sont considérées comme
Rhésus négatif.
S'il y a présence d'agglutination dans le tube inconnu, les hématies
possèdent l’antigène Du et sont considérées comme Rhésus positif.
1-8- Détermination du système Kell :

1-8-1- Principe :
La technique utilisée est basée sur le principe de l’agglutination.
-des hématies portants l’antigène Kell s’agglutinent sur plaque en
présence d’un antisérum anti Kell et sont dites alors Kell positifs.
-des GR dépourvus d’Ag Kell ne s’agglutinent pas en présence
d’antisérum anti Kell est sont dites Kell négatifs.
1-8-2- technique :
-sur une plaque d’opaline déposer côte à côte les gouttes de sang à tester.
-juste prés de ces gouttes on met deux gouttes de d’antisérum anti Kell.
-on mélange chaque goutte de sang avec son antisérum tout en effectuant
un cercle de 2 cm de diamètre.
-on agite doucement et circulairement la plaque et on surveille
l’apparition de l’agglutination.
1-8-3- résultats :
La présence d’agglutination avec un anti Kell indique que les GR sont des
Kell positif, et les GR Kell négatif ne sont pas agglutinés par un anti Kell.
1-9- Phénotypage et nomenclature du système Rhésus :
Lorsqu’un antisérum ne provoque pas l’agglutination des hématies
testées, on peut en conclure :
L’absence de l’antigène en cause
La présence de son allèle antigénique à double dose.
33
Exemples :
- Absence d’agglutination avec l’anti E présence de : ee

- Absence d’agglutination avec anti D présence de : dd.
Ainsi grâce aux différents antisérums, on peut déterminer la formule
phénotypique des antigènes rhésus présents sur les hématies de chaque
individu étudié.
1-10- Principales indications du phénotypage :

-chez un malade polytransfusé pour diminué le degré d’allo
immunisation.
-chez les femmes non ménopausées et qui doivent recevoir du sang afin
d’éviter une allo-immunisation fœto-maternelle en cas de grossesse.
-lorsqu’une transplantation est prévue.
1-11 - La recherche des agglutinines irrégulières :
1-11-1- Introduction
Il existe deux types d’Ac irréguliers :
*Les anticorps irréguliers naturels, il s’agit des anti P, anti Lewis ils sont
dépistés en même temps que la détermination du groupe sanguin par la
recherche des agglutinines irréguliers
*Les anticorps irréguliers immuns, les Ac en cause sont l’anti Rhésus,
anti kell, anti E, anti C, anti Duffy, ces anticorps n’apparaissent qu’après
immunisations et sont détecter par le test-coombs indirect.
*la recherche des agglutinines irrégulières est indiquée chez les
polytransfusés et lors de l’allo immunisation Foteo maternelle
34
1-11-2- Principe :
-Les AC incomplets se fixent sur leur Ag correspondant porté sur les GR
sans qu’aucune agglutination n’apparaisse en milieu salin.
-L’adjonction d’une antiglobuline qui se lie et se fixe sur l’AC lié aux Ag
globulaires et par suite l’agglutination des GR sensibilisés, c’est le
coombs indirect
1-11-3-Technique :
-Récupérer le sérum à tester par centrifugation du sang à vitesse de 3000
tours/min pendant 5 minutes.
-laver 3 fois les hématies groupe O portants l’AG Kell ou Duffy ou Kidd
ou MNSs et on prépare une suspension a 5% dans l’eau physiologique
-Dans un tube à hémolyse on dépose une goutte de la suspension et 2
gouttes du plasma à tester.
-Mélanger le tube et incuber à 37C° pendant 45 minutes lavées les
hématies 3 fois en décantant complètement le surnagent après lavage
-Ajouter une goutte de l’antiglobuline polyvalente.
-Mélanger et centrifuger à une vitesse de 1000 tours/min pendant une
minute.
-Observer l’agglutination en décollant doucement la pastille de GR au
fond du tube
-aux tubes donnant des résultats négatifs on ajoute des GR sensibilisés
par IGg pour valider le résultat.
1-11-4- Lecture et résultats :
-Une hémolyse ou une agglutination après incubation à 37C° indique un
test indirect à l’antiglobuline positif
Une hémolyse ou agglutination, après adition de l’antiglobuline montre
que le test est positif.
35
-Test négatif s’observe par l’absence d’hémolyse ou l’agglutination,

après validation des résultats par l’adjonction des GR sensibilisés par les
IGg si non refaire le test.
36
CHAPITRE IV LA TRANSFUSION SANGUINE
1-La transfusion sanguine :
1-1-Le don du sang :

Le don du sang est volontaire, bénévole, anonyme et exclut de tout
commerce, les prélèvements s’effectuent sur des donneurs de 18 à 65 ans
sans aucune autre condition discriminatoire que d’être en bonne santé.
Notre geste est soumis à aucune pression, n’appel aucune rémunération
et n’a aucune valeur marchande.
La gratuité du don, l’anonymat du donneur pour le receveur et du
receveur pour le donneur sont les autres principes éthiques fondamentaux
du don du sang.
L’acte transfusionnel ne peut être pleinement assumé que si le personnel
soignant est bien conscient de la source humaine des produits sanguins
qu’il transfuse.
Le prélèvement se fait sur anticoagulants appropriés (CPD, ACD,
CRPA, SAGM) et le sang est conservé à 4°c pendant 21 jours dans le cas
d’utilisation du CPD et ACD, 35 jours pour CPDA et 45 jours pour le
CPD et (+) SAGM.
1-2-Thérapeutique transfusionnelle
La transfusion sanguine à pour rôle d’assurer la compensation de la
fraction de sang : globules rouges, globules blancs, plaquettes et plasma
qui manque au malade.
La transfusion du sang total est indiquée en cas d’hémorragies aiguës.
Le concentré globulaire est indiqué dans toutes les anémies importantes
(de cause médicale, chirurgicale ou obstétricale), dans les anémies le
volume globulaire est plus ou moins diminué, mais le volume sanguin
total restant pratiquement inchangé.
37
Dans le cas des leucopénies, la transfusion des globules blancs est

pratiquée surtout chez les malades présentant une neutropénie et qui font
des infections.
Pour la transfusion des plaquettes deux cas sont donnés :
Soit des indications préventives avant l’installation d’un traitement
chimiothérapique et les interventions chirurgicales, des maladies
thrombopéniques, soit des indications de correction d’une anomalie déjà
installée comme le cas des aplasies médullaire.
1-3-Les accidents transfusionnels :
Malgré le strict respect des règles de la sécurité transfusionnelle, toute
transfusion comporte des risques qui sont liés le plus souvent à des
erreurs humaines.
Ces risques peuvent être d’ordre immunologique, infectieux ou de la
surcharge, en pratique transfusionnelle, ces accidents peuvent être
distingués suivent leur chronologie :
- Immédiats.
- Secondaires (non immédiats).
- Tardifs.
Accidents transfusionnels immédiats :
Dès l’injection des premiers ml de sang, ou au cours d’une transfusion
massive, le malade peut présenter un syndrome immunologique ou
infectieux gravissime avec choc.
Le plus souvent, l’accident se manifestera par une simple réaction du
type frissons-fièvre ou allergique.
On peut également observer pendant la transfusion des accidents de
surcharge volumique, ou consécutifs à la perfusion d’air, de substances
étrangères, mais le risque préoccupant qui demeure est celui
d’incompatibilité érythrocytaire, dont la conséquence majeur est
l’hémolyse.
38
Si elle est immédiate, totale, quelque soit le volume de globules rouges

impliqués, l’hémolyse peut aboutir, parfois en quelques minutes à un
choc.
Accidents transfusionnels non immédiats :
Au cours des deux semaines qui suivent une transfusion, des
complications secondaires à celle-ci peuvent se manifester :
Soit un purpura par formation d’auto anticorps anti-plaquettaire, soit
une maladie parasitaire ou infectieuse.
Les accidents immunologiques :
L’allo-immunisation :
L’allo-immunisation est l’accident qui à plus d’importance dans cette
catégorie, c’est la conséquence de l’introduction dans un organisme
d’allo-antigènes érythrocytaires, leucocytaires ou sériques.
Cette allo-immunisation peut survenir dans trois circonstances :
1- La grossesse : les femmes enceintes chez lesquelles il y’a
passage dans leur circulation d’hématies fœtal comportant des
Ag que la mère ne possède pas sur ses hématies, cette
immunisation peut constituer un vrai danger pour la grossesse
ultérieure.
2- La transplantation de peau ou d’organe.
3- La transfusion sanguine chez des sujets qui reçoivent du sang à
cause d’une pathologie déterminée.
Les Ac intervenant sont de type lgG.
Les Ag qui provoquent une allo-immunisation sont les Ag des systèmes
Rh, Kell, Duffy….etc.
L’allo-immunisation dépend de plusieurs facteurs :
- Le phénotype : l’homozygote a plus de chances de rencontrer
un antigène qu’il ne possède pas.
- La grossesse augmente les probabilités de l’immunisation.
39
- L’âge : la synthèse de l’anticorps est plus faible chez les sujets

âgés.
- La pathologie : toute source de déficit immunitaire entraîne
une diminution de l’allo-immunisation.
- Chez les polytransfusés : la fréquence de l’allo-immunisation
érythrocytaire est calculée par rapport au nombre de
transfusions envisagées.
Les accidents transfusionnels tardifs :
De tous les accidents post-transfusionnels, l’hémochromatose et les
hépatites, complications tardives, sont parmi les plus redoutables.
Le risque d’atteinte par ces deux affections est directement lié au nombre
d’unités de sang transfusé.
Ne transfuser que la main forcée est donc la meilleure prévention de
ces accidents tardifs.
1-4-La sécurité transfusionnelle :

1-4-1- Introduction :
La sécurité de la thérapeutique transfusionnelle est, à l’évidence, un
objectif nécessaire, la complicité des données à prendre en compte pour
sa réalisation, n’est pas toujours exactement évaluée.
La transfusion doit assurer :
La survie normale, en quantité efficace, d’un ou plusieurs éléments
sanguins déficients chez le malade sans entraîner des réactions
immédiates, mais sans introduire non plus de risque à moyen ou à long
terme sur un plan de sécurité, cet objectif implique une triple sélection.
- Sélection du produit sanguin approprié de façon à éliminer au
maximum les risques de surcharge en éléments inutiles.
- Sélection de produits non infectieux.
40
- Sélection immunologique de nature impératifs de

«
compatibilité ».
1-4-2- Le système érythrocytaire et transfusion :
Toute transfusion sanguine doit être dans le respect de l’identité
minimale dans le système ABO, Rh et si possible dans les autres
systèmes.
L’existence d’un grand nombre de ces systèmes implique la
reconnaissance de groupes entre le donneur et le receveur.
Des anticorps naturels du système ABO ou immuns du système Rh,
Kell… peuvent être en effet responsables d’accidents, ce risque a conduit
à établir des règles strictes de sécurité tout au niveau des centres de
transfusion ainsi que des services utilisateurs.
1-4-3- La prévention de l’allo-immunisation :

Un certain nombre de malades sont susceptibles de recevoir du sang
ou des dérivés sanguins plusieurs fois d’où la nécessité d’éviter le plus
possible tout conflit immunologique quelque soit la cible de l’anticorps
(GR, GB, Plaquettes).
La prévention de l’allo-immunisation dépend d’une sélection sévère
du sang à transfuser, pour cela, il faut indiquer le groupe ABO et Rh, Le
phénotype du receveur et celui du donneur et éviter la transfusion du sang
dont les hématies ont des antigènes absents sur celle du receveur surtout
ceux qui sont plus immunisant.
1-4-4- Recherche des anticorps irréguliers :
Les anticorps irréguliers peuvent être classés en deux groupes :
Les Ac Naturels :
Ex : anti-M, anti-N, anti-P1, anti-Lea, anti-Leb, anti-Lex, anti-Lea,
anti-Lua. Ces Acs, sont de type lgM, présents chez certains sujets
déprourvus des Ag correspondants sans immunisation préalable connue.
41
Les Ac immuns :
Ex : anti-D, anti-C, anti-E, anti-c, anti-K, anti-Jka, anti-JKb…
Ces Acs sont de type lgG, normalement absents dans le sérum.
Leur détection suppose une immunisation préalable par transfusion
incompatible ou par grossesse chez les femmes.
Le test à l’antiglobuline « test de Coombs », est la technique la plus
couramment utilisée.
La recherche des Acs circulants dans les sérums sont révélés par la
réaction de Coombs indirect et la réaction de Coombs direct qui permet la
recherche de ces Ac préalablement fixés in vivo sur les hématies.
1-4-5- Le test d’incompatibilité :
L’épreuve directe au laboratoire consiste à mettre en présence le sérum
du malade avec les globules rouges qui lui seront transfusés.
L’épreuve comporte au moins deux réactions dont l’une avec une
antiglobuline (réaction de Coombs).
Le plus souvent, les techniques utilisées sont celles utilisées pour la
recherche d’agglutinines irrégulières.
L’épreuve de compatibilité est un test personnalisé qui n’exclut pas la
recherche d’agglutinines irrégulières, comme le montre le tableau
suivant :
42
Tableau : Comparaison entre la RAI et le test

d’incompatibilité :
Test d’incompatibilité RAI test de Coombs

Définitions Mise en contact in vitro des Dépistage et identification
hématies de l’unité à transfuser sur panel d’hématies
avec le sérum du receveur. convenablement phénotypé
d’éventuels Ac chez le
receveur.
Avantages - Dépiste l’incompatibilité -dépistage des Ac faibles.

ABO et tous les allo-anticorps
présents. -Permet l’identification de
l’Ac dans le même temps.
- Permet de délivrer avec
sécurité l’unité de sang sans - (Si la RAI est effectué
attendre l’identification de directement sur un panel
l’identification de l’anticorps. d’identification).
inconvénients - Possibilité de réactions - Ne dépiste pas

faussement positives (fausse l’incompatibilité ABO.
agglutination).
- Exige un abonnement d’un
- Risque de contamination par le panel de dépistage et un autre
VHB, VHC et le HIV. d’identification.
1-4-6- Contrôle ultime au lit du malade :

Il n’est ni possible ni indiqué, au lit du malade, de pratiquer une
épreuve de compatibilité constituant à mélanger les sangs du receveur et
de l’unité de sang à transfuser.
En effet les Ac naturels anti-A ou anti-B d’un receveur n’ont souvent
pas l’avidité nécessaire pour produire une agglutination facilement
interpréalable au lit du malade.
On préfère actuellement réaliser un contrôle de groupage ABO
simultanément sur le sang du receveur et sur l’unité à transfuser, dans le
but d’éviter une incompatibilité dans le système ABO et ses
43
conséquences dramatiques sur le devenir du malade. Deux techniques

peuvent être utilisées :
1) Si l’on dispose d’une plaque de verre ou mieux d’une petite plaque
d’opaline et de deux flacons de sérums-tests anti-A et anti-B.
Il suffit de contrôler le groupe ABO du receveur et de l’unité de
sang à transfuser.
Les réactions d’agglutination ou de non-agglutination doivent être
identiques dans les deux échantillons.
2) Il est possible de se procurer, dans certains centres de transfusions,
des cartons de bristol portant des gouttes de sérums-tests anti-A et
anti-B desséchés, ou que l’on peut utiliser avec des sérums-tests
anti-A ou anti-B liquides.
2-Les polytransfusés :
2-1- Définition :
Le terme poly-transfusé est un terme donné pour certains malades
ayant reçus plus d’une unité de sang.
L’exemple des malades qui peuvent être des poly-transfusés : ceux qui
sont atteint des anémies de l’insuffisance rénale chronique, certaines
autres anémies congénitales (drépanocytose, thalassémie…etc).
La carte de polytransfusés :
Description :
C’est une carte comportant le plus souvent tous les renseignements qui
concernent le malade « Nom, Prénom, l’âge, le Service ».
Les renseignements cliniques sont aussi à indiquer (diagnostic).
Les résultats obtenus : système ABO, Rh, phénotypage ; C, c, E, e,
Kell…etc.
44
Intérêt :
C’est une carte qui montre les antigènes et les anticorps existant chez le
malade.
C’est un document permettant lors de demande de sang pour un
polytransfusé de connaître son passé immunologique, elle permet aussi la
sélection immunologique du sang ou de l’un de ses composants sans
risque d’allo-immunisation.
45
Approche pratique
I/Description du terrain d’expérimentation :

Notre étude s’est effectuée au niveau du centre de la transfusion sanguine de
Biskra « CTS »
Le CTS est situé au niveau E.P.H ElAlia (Hopital B.B. Nacer Biskra)
Les zones principales du CTS sont :
-salle de prélèvement et de collecte de sang
-salle de séparation et conservation
-salle de distribution
-une paillasse d’analyses d’immuno-hématologie
-une paillasse de sérologie
1/les annexes :
-un bureau du médecin chef de service
-secrétariat
-Bureau du chef de service
-une salle de collation pour les donneurs
- une vestiaire
-une cuisine
2/ équipement :
-05 fauteuils de prélèvement
- 02 tensiomètres électroniques
-05 agitateurs des poches de sang
-01 aphérèse
-03 centrifugeuses de poches de sang
-03 séparateurs
-03 balances
-01 clompeur
-03 banques de sang
-03 congélateurs
-01 agitateur des plaquettes
46
Approche pratique
-02 centrifugeuses de paillasse

-01 bain marie
-02 incubateurs
-01 spectrophotomètre
-01 réfrigérateur
- consommable
3/personnel :
-01 médecin chef de service
-04 médecins transfusionistes
-01 surveillant médicale
- 01 laborantin principal
-05 laborantins diplômés d’état
-01 infirmier principal
- 04 infirmiers diplômés d’état
-01 secrétaire médicale
-08 ingénieurs d’application en biologie
-02 femmes de ménage
II/matériel et méthodes :
1/ matériel :
Notre travail consiste à connaître l’intérêt de la recherche des agglutinines
irrégulières chez les polytransfusés.
La durée de l’étude est de 45 jours (du 20/03/2011 au 05/05/2011).
Les échantillons utilisés dans notre étude pratique sont :
A/ une population constituée de 32 patients polytransfusés dont :
- 15 patients atteints d’insuffisance rénale chronique traitants au niveau du
service d’hémodialyse.
- 4 patients traitants en ambulatoire qui présentent des différentes
hémoglobinopathies.
47
Approche pratique
- 13 patients hospitalisés au niveau du service d’hématologie clinique

présentant diverses pathologies.
B/dans le but de collecter un certain nombre de données nécessaires à notre
étude, nous avons élaborés :
02 questionnaires l’un est destiné au personnel du CTS dont :
- 02 médecins.
- 11 laborantins.
- 02 infirmiers.
Et l’autre au personnel d’hospitalisation des services : hématologie et
hémodialyse dont :
- 06 médecins.
- 09 infirmiers.
2/ méthodes :
Les méthodes utilisées reposent sur le principe d’agglutination.
- La détermination du système ABO est réalisée par deux méthodes :
*Beth Vincent avec des antisérums monoclonaux.
* Simonin avec des suspensions d’hématies tests a 5% préparées au
niveau du CTS.
-la détermination du système rhésus avec des antisérums monoclonaux.
-la détermination des phénotypes du système rhésus : E, e, C, c avec des
antisérums monoclonaux.
-la détermination de l’antigène DU se fait par le test coombs indirect avec :
*antiglobuline polyvalente « MAESTRIA IGG +C3D ».
–la détermination du système Kell est effectuée avec des antisérums
monoclonaux.
-la RAI est effectuée par le coombs indirect avec :
*suspension d’hématies à 5% de groupe O Kell+ préparée au niveau du CTS.
*antiglobuline polyvalente.
48
Approche pratique
NB : les antisérums utilisés au cours de cette étude provenant du laboratoire

« DIAGAST » France.
Les questionnaires ont été préparés :
*l’un à l’intention du personnel du CTS portant 11 questions fermées et
ouvertes
* et l’autre à l’intention du personnel des services d’hospitalisation:
hématologie et hémodialyse portant 15 questions fermées et ouvertes.
49
Approche pratique
III/ résultats :
A/Tableau : Représentation selon les groupes sanguins, phénotypes et
résultats de la RAI
Groupes
patient Age Sexe Phénotypes RAI
sanguins
01 60 M O+ DDCceeK- NEGATIF
02 22 M O+ DDCceeK+ NEGATIF
03 57 F O+ DDCceeK- NEGATIF
04 25 F B+ DDCCeeK- NEGATIF
05 37 M O+ DDCCeeK- NEGATIF
06 50 M O+ DDCcEeK- NEGATIF
07 22 F B+ DDCcEeK+ NEGATIF
09 18 M O- dd cceeK- NEGATIF
10 60 M B+ DDCCeeK- NEGATIF
11 18 F B+ DDCceeK- NEGATIF
12 15 F A+ DDCceeK- NEGATIF
13 12 M B- ddCceeK- NEGATIF
14 30 M A+ DDCCeeK- NEGATIF
15 64 M B+ DDCCEEK- POSITIF
16 63 M A+ DDccEeK- NEGATIF
17 61 F O+ DDCceeK- POSITIF
18 57 M A+ DDCCEeK- NEGATIF
19 54 F O+ DDcceeK- NEGATIF
22 61 M A+ DDCCEEK- NEGATIF
24 59 F A+ DDCceeK- NEGATIF
26 27 M O+ DDCceeK- POSITIF
27 32 M A+ DDCCEEK- NEGATIF
29 52 F A+ DDCcEeK- NEGATIF
30 41 F O+ DDCCeeK- NEGATIF
31 39 F B+ DDCceeK- NEGATIF
32 38 F O- ddcceeK- NEGATIF
50
Approche pratique
Commentaire du tableau :
On remarque sur ce tableau que la majorité des patients sont de groupe O (53%),
avec une prédominance du facteur rhésus (91%) ; et seul deux patients ont
l’antigène Kell+.
Pour les anticorps irréguliers, ils ont été mis en évidence que chez trois patients
(soit 9%).
B/Questionnaire destiné au personnel du CTS :
1/ Quels sont les services utilisateurs du sang ?
Commentaire :
La majorité des participants disait que les grands services utilisateurs du sang :
l’hématologie, chirurgie, hémodialyse, pédiatrie et maternité.
2/ Est ce que vous réalisez la recherche des agglutinines irrégulières ?

Réponses Oui Non Total
Nombre 4 11 158
pourcentage 27% 73% 100%
Commentaire :
Seul 27% des questionnés déclarent réaliser la RAI, alors que le reste (73%)
disent ne pas la réaliser
51
Approche pratique
3/Si non pour quelles raisons ?
Commentaire :
Sur les 11 qui ont répondus ne pas réaliser la RAI, la raison est soit le manque
de réactif (91%) ou que l’examen n’est pas demandé.
4/Quelles sont les pathologies qui exposent le malade à être un polytransfusé ?

Commentaire :
Selon les réponses données on trouve en premier les IRC et leucémie, en suite
les β-thalassémie après l’hémophilie et les anémies.
5/Est ce que vous faite le phénotypage érythrocytaire systématiquement chez des

éventuels polytransfusés ?
Résultats Oui Non Total
Nombre 12 3 15
Commentaire :
La majorité des questionnés soit 80% disait faire le phénotypage
systématiquement, alors que 20% ne le font pas.
52
Approche pratique
6/devant quelles situations procédez-vous au phénotypage des unités de sang ?

Commentaire :
Pour l’ensemble des questionnés on procède au phénotypage lors de la demande
du sang à des polytransfusés.
7/ Est-ce que chaque polytransfusé dispose t’il d’une carte de transfusion ?

Nombre 15 0 15
Commentaire :
Selon les réponses obtenues on trouve que 100% des polytransfusés disposent
d’une carte de transfusion.
8/ Est ce que les phénotypes sont ils ou non portes sur cette carte ?
Nombre 13 2 15
53
Approche pratique
Commentaire :
87% du personnel qu’on a questionné, disent que les phénotypes sont portés sur
la carte.
9/ Quelles sont les procédures à prendre quand vous distribuer les unités de sang
aux polytransfusés ?
Commentaire :
En générale la procédure lors de la distribution du sang aux polytransfusés c’est
la vérification du groupe sanguin, rhésus et les phénotypes chez le donneur que
chez le receveur.
C/Questionnaire destiné au personnel des services d’hématologie et
hémodialyse :
1/ Quelles sont les maladies qui nécessitent des transfusions sanguines
systématiques ?
Commentaire :
Pour la majorité du personnel soignant des services d’hématologie et
d’hémodialyse les pathologies sont : les anémies, IRC, leucémie, et hémorragies.
54
Approche pratique
2/Est-ce qu’après le diagnostic de ces pathologies le médecin traitant demande

t’il un phénotypage ?
Réponse Oui Non Total
Nombre 14 1 15
Commentaire :
On note que pour 93% du personnel soignant la demande du phénotypage est
systématique lors d’un diagnostic de ces pathologies.
3/ Est-ce que tous les malades hospitalisés au niveau du service

reçoivent-ils du sang ?
Nombre 4 11 15
55
Approche pratique
Commentaire :
Pour 73% des questionnés la réponse est que la transfusion sanguine n’est pas
nécessaire à tous les malades hospitalisés au niveau de leur services.
4/ Est-ce que le sang est toujours disponible ?

Nombre 13 2 15
Commentaire :
La disponibilité du sang au niveau du CTS est révélée par la majorité (87%) du
personnel soignant.
5/qu’elle est la fréquence des transfusions pour les polytransfusés ?

Commentaire :
Selon les réponses obtenues, la fréquence des transfusions varie d’une fois par
semaine à une fois par mois.
6/ L’ultime test est il ou non réalisé systématiquement avant chaque

transfusion ?
Nombre 15 0 15
56
Approche pratique
Commentaire :
La totalité (100%) du personnel a répondus que l’ultime test est réalisé avant
chaque transfusion.
7/ Parmi les polytransfusés au niveau du service il y a t’ils ceux qui ont présenté
des accidents transfusionnels tardifs ?
Nombre 15 0 15
Commentaire :
L’ensemble du personnel soignant a révélé qu’il ya des accidents transfusionnels
chez certains polytransfusés.
8/ quel sont les symptômes présentés par le receveur après la

Transfusion ?
Commentaire :
Les symptômes les plus cités sont : les nausées, vomissements, vertiges…
57
Approche pratique
9/ qu’elles sont les procédures à faire pour prévenir une immunisation

transfusionnelle ?
Commentaire :
Majoritairement est pour prévenir une éventuelle immunisation, on procède a la
transfusion du sang phénotypé.
10/ le sang transfusé aux malades se fait selon les phénotypes ou non avant la
première transfusion ?
Nombre 12 3 15
Commentaire :
Le sang donné aux éventuels polytransfusés avant la première transfusion est la
réponse donnée par la majorité du personnel soignant 80%.
11/ les polytransfusés disposent ils d’une carte de transfusion avec un

phénotypage ?
Nombre 12 3 15
58
Approche pratique
Commentaire :
80% des réponses recueilles, ces patients disposent d’une carte de transfusion
avec phénotypage.
12/ le sang à transfusé est il phénotypé ou non ?

Nombre 14 1 15
Commentaire :
En majorité 93% le personnel soignant a répondu que le sang est phénotypé.
59
Approche pratique
IV/ analyse des résultats :

L’analyse des résultats du questionnaire adressé au personnel (médecins,
laborantins et infirmiers) du CTS ; qu’à celui des services d’hématologie et
d’hémodialyse (médecins et infirmiers) à fait ressortir que :
Les pathologies qui nécessitent le plus de transfusions sont l’IRC, les anémie,
les leucémies, certaines hémoglobinopathies…ce qui fait de l’hématologie
clinique et de l’hémodialyse les services les plus utilisateurs du sang même si ce
n’est pas l’ensemble des malades qui sont transfusés.
Le phénotypage est prescrit par le médecin dans 93% des cas de diagnostic de
maladies nécessitant des transfusions répétées et que sa réalisation au niveau du
CTS à fait que la totalité des polytransfusés disposent d’une carte de transfusion
sanguine avec les phénotypes et qui leur permet d’obtenir lors d’éventuelles
transfusions dont la fréquence varie d’une fois par semaine à une fois par mois,
du sang phénotypé et prévenir ainsi une allo-immunisation .
Mais malgré toutes les précautions et le recours à l’ultime test avant chaque
transfusion l’ensemble du personnel soignant à révélé qu’il y a eu des accidents
transfusionnels chez certains polytransfusés marqués par des nausées,
vomissements ,vertiges et que les causes de ces accidents est probablement la
présence des anticorps irréguliers et dont la recherche « RAI » n’est pas
effectuée au niveau du CTS pour des raisons ,soit le manque de réactif ( panels
d’hématies phénotypés ) ou que l’examen n’est pas demandé par le médecin.
60
Conclusion :
La transfusion sanguine est une thérapie vitale qui assure la compensation de la

fraction de sang (globules rouges, globules blancs, plaquettes, plasma) qui
manque aux malades, c’est une transplantation qui peut être acceptée ou refusée
par l’organisme d’où la nécessité de prendre toutes les précautions pour ne pas
exposer le malade et surtout le polytransfusé à des accidents transfusionnels.
Il faut donc s’assurer des phénotypes des sujets transfusés et de ne leur donner
que du sang compatible, comme il faut aussi réaliser systématiquement la
recherche des agglutinines irrégulières pour leur sécuriser des futures
transfusions.
Ce qu’on à constaté lors de notre étude est que la détermination des phénotypes
se fait systématiquement aussi bien pour les malades polytransfusés que pour
les unités de sang qui leur sont réservés.
Mais que malheureusement la recherche des agglutinines irrégulières n’est pas

effectuée au niveau du CTS, du fait du manque de réactif (panel d’hématies).
Au terme de cette étude et à la lumière de ces résultats nous pouvons dire que
nos hypothèses sont confirmées.
Bibliographie
*C.Sultan/ M.Gouault / Heilman/ M. Imbert

« Aide mémoire d’hématologie »
Flammarion paris 1987.
*Ch.Salmon/J-P .Cartron/ P.H Rouger
« Les groupes sanguins chez l’homme »
Masson paris 1991.
*R.Sylvestre/ M.Benbunan/Y.Brossard/B.Jaulmes
« Transfusion sanguine »
Masson paris 1981.
*M.Chassaigne.
« Transfusion sanguine »
Doin éditeur paris 1984.
*Bachir Dora/Belabes Saliha/ Smaili Farida/ Bouzid Kamel
Sous la direction du professeur Belhani Meriem
« Hématologie clinique »
Office des publications universitaires Alger 1993.
*les sites d’internet consultés :

http://www.vulgaris-medical.com/encyclopedie / anticorps irréguliers
http://fr.wikipedia.org/wiki/anticorps irréguliers.
http://www.chups.jussieu.fr/pols/hemato.html
Annexe
Institut national des formations superieur paramédicale Biskra
Questionnaire destiné aux médecins, et infirmiers des services :

Hématologie et Hémodialyse
Réalisé par :
Mr : Soualah Ahmima BadrEddine

Mr : Bazga Ahmed
Troisième année laborantin diplômé d’état
En vue de réalisation du mémoire de fin d’études sous le
titre de :
Intérêt de la recherche des agglutinines irrégulières chez les

polytransfusés.
Madame, monsieur : vue votre expérience professionnelle au niveau

du centre hospitalo universitaire Biskra, et vue votre rôle majeur et
essentiel dans la prise en charge des malades. Nous vous prions de
bien vouloir répondre à ce modeste questionnaire, pour nous aider et
nous orienter vers une recherche efficace dans notre mémoire de fin
d’études.
-Identification du participant :
-Années d’expérience :
-Service ou vous exercer votre fonction :

Hématologie Hémodialyse
1/Quelles sont les maladies qui nécessitent des transfusions sanguines
systématiques ?
………………………………………………………………
………………………………………………………………
………………………………………………………………
Annexe
2/ Est-ce qu’après le diagnostic de ces pathologies le médecin traitant

demande t’il un phénotypage ?
Oui Non
3Est-ce que tous les malades hospitalisés au niveau du service
reçoivent-ils du sang ?
Oui Non
4/Est-ce que le sang est toujours disponible ?
Oui Non
5/qu’elle est la fréquence des transfusions pour les polytransfusés ?
Par semaine : Par mois :
6/ L’ultime test est il ou non réalisé systématiquement avant chaque
transfusion ?
Oui Non
7/Parmi les polytransfusés au niveau du service il y a t’ils ceux qui ont
présenté des accidents transfusionnels tardifs ?
Oui Non
8/quel sont les symptômes présentés par le receveur après la
transfusion ?
………………………………………………………………
………………………………………………………………
9/qu’elles sont les procédures à faire pour prévenir d’une
immunisation transfusionnelle ?
………………………………………………………………
………………………………………………………………
10/le sang transfusé aux malades se fait selon les phénotypes ou non
avant la première transfusion ?
Oui Non
11/les polytransfusés disposent ils d’une carte de transfusion avec un
phénotypage ?
Oui Non
12/le sang à transfusé est il phénotypé ou non ?
Oui Non
Merci pour votre participation

Annexe
Institut national des formations superieur paramédicale Biskra
Questionnaire destiné aux médecins, laborantins et infirmiers du

Centre de la transfusion sanguine Biskra.
Réalisé par :
Mr : Soualah Ahmima BadrEddine

Mr : Bazga Ahmed
Troisième année laborantin diplômé d’état
En vue de réalisation du mémoire professionnel de fin
d’études sous le titre de :
Intérêt de la recherche des agglutinines irrégulières chez les

polytransfusés.
Madame, monsieur : vue votre expérience professionnelle au niveau

du centre de la transfusion sanguine Biskra, et vue votre rôle majeur et
essentiel dans la prise en charge des donneurs de sang, et le don du
sang en toute sécurité. Nous vous prions de bien vouloir répondre à ce
modeste questionnaire, pour nous aider et nous orienter vers une
recherche efficace dans notre mémoire de fin d’études.
-Identification du participant :
- Années d’expérience :
1/Quel sont les services utilisateurs du sang ?

…………………………………………………………………..
…………………………………………………………………..
2/Est ce que vous réalisez la recherche des agglutinines irrégulières ?
Oui Non
3/Si non pour quelle raison ?
………………………………………………………
Annexe
4/Quelles sont les pathologies qui exposent le malade à être un

polytransfusé ?
……………………………………………………….
……………………………………………………….
………………………………………………………
5/Est ce que vous faite le phénotypage érythrocytaire
systématiquement chez des éventuels polytransfusés ?
Oui Non
6/Devant quelles situations procédez-vous au phénotypage des unités
de sang ?
………………………………………………………
………………………………………………………
7/Est-ce que chaque polytransfusé dispose t’il d’une carte de
transfusion ?
Oui Non
8/Est ce que les phénotypes sont ils portés ou non sur cette carte ?
Oui Non
9/Quelles sont les procédures à prendre quand vous distribuer les
unités de sang aux polytransfusés ?
………………………………………………………..
………………………………………………………..
………………………………………………………..
Merci pour votre participation

226 L - Intéret de La Recherche Des Agglutinines Chez Les Polytransfusés

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REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE

Ministère de la sante de la population et la réforme hospitalière

Encadreur / Mr : Ben Farha AbdElKader Réalisé par :

*Mr : Ahmed Bazga

Sans oublier mon encadreur et notre chef d'option et mes

Surtout mon copin

Nous tenons en premier lieu de présenter nos respects et nos

1-5- les autres systèmes des groupes sanguins------------------------------------------ 14

- Notre travail comporte deux parties :

L'hémoglobine est de nature protéique. C'est le constituant essentiel du globule

• Les acides aminés nécessaires à la synthèse de la globine.

1-2-2- les globules blancs :

1- 4- les fonctions du sang :

La réaction Ag-AC est spécifique à chaque déterminant correspond un

1- Les groupes sanguins:

la recherche d'anticorps définissant des antigènes nouveaux appartenant

1-3- le système ABO :

que le facteur correspondant est absent du globule rouge on obtient ainsi

groupe AG globulaire AC naturels sériques

1-3-1- les antigènes du système ABO:

1-3-3- les anticorps du système ABO :

Les propriétés des anticorps naturels et immuns

1-4- le système rhésus :

1-4-2- les antigènes du système rhésus :

1-4-3- les anticorps du système rhésus :

1-5- les autres systèmes des groupes sanguins :

1-5-1- le système Kell :

L'expression des Ag du système Kell liée à un autre antigène appelé Kx,

1.5.2 Le système Duffy:

1.5.3 Le système Kidd:

Un phénotype silencieux, JK (a - b) est très rare: ces sujets

1.5.4 Le système MNSs:

Les fréquences sont celles de la race blanche.

Les autres systèmes de groupe sanguin sont démontrés dans le tableau

Lutheran Lua LU (a-b+) 90% Anticorps immuns

1-Détermination du système ABO :

-S'assurer de la propreté de la plaque avant la détermination.

Il faut utiliser des tubes à hémolyse.

* lecture des résultats :

globules-tests B et dans le dernier tube une goutte de

1-5-Détermination du système Rhésus :

" Matériels et réactifs :

- la réaction se pratique à chaud : 370 à 400c sur plaque

1-5-3- lecture des résultats :

Utilité de témoin albumine : point fondamental car toute hématie

1-6- Test de Coombs :

1-6-2- Test de Coombs direct :

-Après chaque lavage, il est important de mettre le culot en suspension

Comparaison entre le test de Coombs direct et indirect.

Constituants Anticorps Anticorps Antigène

1.7 Détermination de l'antigène Du :

1-7-3-Lecture des résultats :

1-8- Détermination du système Kell :

- Absence d’agglutination avec l’anti E présence de : ee

1-10- Principales indications du phénotypage :

-Test négatif s’observe par l’absence d’hémolyse ou l’agglutination,

1-La transfusion sanguine :

1-1-Le don du sang :

Dans le cas des leucopénies, la transfusion des globules blancs est

Si elle est immédiate, totale, quelque soit le volume de globules rouges

- L’âge : la synthèse de l’anticorps est plus faible chez les sujets

1-4-La sécurité transfusionnelle :

- Sélection immunologique de nature impératifs de