Standardisation de I'antibiogramme de

Neisseria meningitidis. Detection des souches

relativement resistantes a la penicilline
P. Nicolas,1 J.-D. Cavallo,2 R. Fabre,2 & G. Martet1

L'6tude de la sensibilite de 189 souches de Neisseria meningitidis a plusieurs antibact6riens tels que
p6nicilline, amoxicilline, c6fotaxime, ceftriaxone, chloramph6nicol et rifampicine, par dilution en milieu solide,
E-test et m6thode des disques sur milieu de Mueller-Hinton incub6 a 37°C sous atmosphere contenant 5%
de dioxyde de carbone, a permis de standardiser ces antibiogrammes. Si la d6termination de la concentra-
tion minimale inhibitrice (CMI) par dilution en g6lose doit rester la technique de r6f6rence, I'obtention d'une
valeur exacte ou approch6e de la CMI en fonction de I'antibiotique est possible grace au E-test.
Quand la d6termination de la CMI de la p6nicilline G par dilution en g6lose n'est pas faisable, la
d6tection des souches relativement r6sistantes a la p6nicilline (0,1 mg/l CMI 1 mg/l) avec un disque de -

p6nicilline 10 U est impossible. Un disque d'oxacilline a lig permet d'obtenir un r6sultat dans la majorit6 des
cas lorsque le diam6tre d'inhibition est -10mm.
Les donn6es de la litt6rature sur les concentrations d'antibiotique obtenues dans le liquide
c6phalorachidien (LCR) et la salive associ6es aux r6sultats de l'6tude permettent de proposer des concen-
trations critiques pour ces diff6rents antibiotiques ainsi que des diametres critiques pour le chloramph6nicol
et la rifampicine.

Introduction logiques valables pour l'etude de la progression des

I1 n'existe pas actuellement de consensus sur les
methodes d'etude de la sensibilite de Neisseria
meningitidis aux antibiotiques. La nature des milieux
employes, l'incubation en presence ou non de
dioxyde de carbone, les valeurs critiques, varient en
effet avec les auteurs. Jusqu'a ces dix dernieres
annees, et a l'exception des sulfamides, la sensibilite
de Neisseria meningitidis vis-a-vis des antibiotiques
demeurait importante et ne posait pas de probleme
th6rapeutique. Un antibiogramme n'etait pas
indispensable. L'apparition de la resistance a la
rifampicine, et surtout la multiplication des souches
moins sensibles a la penicilline, sont susceptibles de
remettre en cause les schemas prophylactiques et
therapeutiques.
Afin de comparer les r6sultats obtenus dans
differents laboratoires, de proposer des concentra-
tions critiques, de fournir des donnees epidemio-
Centre collaborateur OMS de reference et de recherche sur
les m6ningocoques, Institut de M6decine tropicale du Service
de Sante des Armees, BP 46, Le Pharo,13998 Marseille Arm6es
(France). (Tires a part: P. Nicolas.)
2 Laboratoire de biologie clinique de I'H6pital d'Instruction des
Armees Begin, 69 avenue de Paris, 94160 Saint-Mand6 (France).
Tire a part NO: 5875
resistances dans le monde, il devient indispensable
de standardiser la determination de la sensibilite des
meningocoques aux agents antimicrobiens. Pour
bien faire, l'antibiogramme de Neisseria meningitidis
devrait comporter une methode par dilution en
gelose ou en milieu liquide et une methode par diffu-
sion au moyen de disques. L'unanimite n'est pas
faite sur le choix du milieu, ni sur le choix de son
fabricant. Les suggestions du National Committee
for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) (1)
semblent, actuellement, les mieux armeme de rallier
tous les suffrages. Dans la presente etude, on a donc
utilise le milieu de Mueller-Hinton, incube a 37 °C en
presence de 5% de dioxyde de carbone (CO2). Cette
methode a l'avantage d'etre applicable en routine
par tous les laboratoires. Les buts de l'etude etaient
les suivants:
proposer pour Neisseria meningitidis un anti-
biogramme simple, a la portee imm6diate de tous
les laboratoires;
- proposer des valeurs critiques pour les
principaux antibiotiques utilisables en
therapeutique et prophylaxie a partir des
donnees provenant de cette etude et de la
litterature;
- proposer une strategie facilement applicable de
mise en evidence des sensibilites diminuees aux
penicillines.

Bulletin de l'Organisation mondiale de la Sant6, 1998, 76 (4): 393-400 C Organisation mondiale de la Sante 1998 393
P. Nicolas et al.

Materiel et methodes de Steers. La souche de reference Staphylococcus

Un total de 189 souches de Neisseria meningitidis,
recues dans les laboratoires de l'Hopital
d'Instruction des Armees (HIA) Begin de Saint-
Mande et du centre collaborateur OMS de Marseille,
isolees entre 1991 et 1996 dans le liquide
cephalorachidien, le sang, le pharynx, ont ete
incluses dans l'etude. Elles appartenaient aux
serogroupes suivants: 59 etaient de groupe B, 52 de
groupe A, 42 de groupe C, 11 de groupe 29E, 1 de
groupe X, 7 de groupe Y, 1 de groupe Z; 14 souches
etaient non agglutinables ou polyagglutinables.
Le milieu de Mueller-Hinton supplemente en
ions Mg++ (25 a 35mg/l) et Ca++ (50 a 100mg/l),
pH 7,3 + 0,1, a ete employe avec toutes les tech-
niques: dilutions en gelose, methode des disques,
E-test.
La mesure des concentrations minimales
inhibitrices par dilutions en gelose a utilise
differentes poudres d'antibiotiques provenant de
divers fabricants: la rifampicine, le chloramphenicol,
la penicilline G, le cefotaxime, la ceftriaxone,
l'amoxicilline, l'ampicilline, la ciprofloxacine, qui
ont e dissoutes selon les recommandations et
diluees dans les tampons appropries (1) pour obtenir
les gammes de dilution suivantes: penicilline G
(0,007 a 4mg/l), ampicilline ou amoxicilline (0,007 a
4 mg/l), cefotaxime (0,007 a 2 mg/l), ceftriaxone
(0,007 a 2mg/1), chloramphenicol (0,03 a 16mg/l),
ciprofloxacine (0,007 a 2 mg/l), rifampicine (0,007 a
256 mg/l).
L'inoculum a 6te realise a partir d'un isolement
cultive sur gelose au sang cuit, incub6e 18-24 heures
a 37°C sous 5% de CO2. Nous avons confectionne
une suspension en tampon phosphate a pH 7,2,
d'indice 0,5 dans l'echelle de MacFarland (densite
optique = 0,03 a 0,04 au spectrophotometre a
600nm) et depose 104 bacteries grace a un appareil
aureus ATCC 25923 a ete systematiquement incluse,
de meme qu'un temoin de pousse sans antibiotique
dans chaque serie. La lecture a ete faite apres 18-20
heures d'incubation en atmosphere humide a 37°C
contenant 5% de C02, prolongee jusqu'a 36-40
heures quand la pousse des temoins etait
insuffisante.
Mesure de l'inhibition de la pousse par la methode des
disques. En raison de la grande sensibilite habituelle
de Neisseria meningitidis, nous avons prefere utiliser
des boftes carrees (120 x 120mm), en placant les
disques en quinconce pour lire facilement les
diametres. L'inoculum a ete realise de la meme
maniere que ci-dessus afin d'obtenir une concentra-
tion finale de 2 'a 4 x 106 (±0,5 logl0) bacteries/ml.
Pour rechercher une diminution de la sensibilite 'a la
penicilline, on a mesure le diametre d'inhibition
autour des disques suivants: oxacilline 1 p.g et 5 rg,
penicilline 2 U et 10 U. D'autres disques ont ete
testes: ampicilline 10 [tg, amoxicilline 25 [tg, cefo-
taxime 30 jtg, ceftriaxone 30 ,ug, chloramphenicol
30 ig, ciprofloxacine 5 sg et rifampicine 30 ig. Les
diametres d'inhibition ont ete mesures au pied a
coulisse apres 18-20 heures d'incubation en atmos-
phere humide a 35-37°C contenant 5% de CO2.
Pour evaluer le E-test (bmd), deux techniques
d'inoculation, par inondation et par ecouvillonnage,
ont et testees.
La pharmacocinetique des antibiotiques dans le
serum, le liquide cephalorachidien et les secr6tions
rhinopharyngees a ete recherchee dans la litterature.
Resultats
La r6partition des CMI des neuf antibiotiques
etudies est donnee au Tableau 1. Sept souches ayant

Tableau 1: Repartition des CMI de neuf antibiotiques, pour N. meningitidis

CMI (mg/I)
Antibiotique
(nombre de souches) s0,007 0,015 0,03 0,06 0,125 0,25 0,50 1 2 4 8 16 32 >32
Penicilline (n 189) 21 106 48 7 7 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Ampicilline (n 175) 7 20 23 98 19 5 1 2 0 0 0 0 0 0
Amoxicilline (n 177) 2 4 2 22 105 34 4 3 1 0 0 0 0 0
Cefotaxime (n 179) 165 8 5 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Ceftriaxone (n 177) 166 7 4 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Chloramphenicol 0 0 3 0 8 15 118 31 2 2 0 0 0 0
(n= 179)
Rifampicine (n 176) 95 27 14 20 15 3 0 0 0 0 1 0 0 1
Spiramycine (n 137) 0 0 0 0 1 5 2 14 18 24 48 25 0 0
Ciprofloxacine (n = 42) 37 1 0 3 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Les nombres en caracteres gras correspondent au nombre de souches classees en cat6gorie intermediaire ou resistante.

394 WHO Bulletin OMS. Vol 76 1998

 Standardisation de I'antibiogramme de Neisseria meningitidis

une CMI a la penicilline de 0,125 mg/l ont
ete classees comme relativement resistantes 'a
la penicilline (RRP). Les CM150 et CMI19 des
antibiotiques etudies sont indiquees au Tableau 2.
On a egalement cherche a savoir si la methode des
disques permet de distinguer les souches RRP.
Quatre disques differents ont ete utilises: deux
disques charges avec 10 U (6 rig) et 2 U de
penicilline et deux disques charges avec 1 [ig et 5 [ig
d'oxacilline. En ce qui concerne le disque 'a 10 U de
penicilline, la repartition des diametres d'inhibition
etait la suivante: 7 souches RRP avaient un diametre
d'inhibition compris entre 32 et 38 mm, et 149
souches sensibles un diametre d'inhibition com-
pris entre 25 et 46 mm. Pour le disque 'a 1 ,tg
d'oxacilline, toutes les souches RRP ont pousse au
contact du disque, donnant un diametre d'inhibition
de 6 mm; parmi les 114 souches sensibles a la
penicilline, 3 ont pousse au contact du disque, et le
nombre de souches ayant donne un diametre
d'inhibition de 8 mm, 9 mm, 10 mm et superieur a
10 mm etait respectivement de 2, 2, 5 et 102. Avec le
disque a 5 [tg d'oxacilline, le nombre de souches
RRP qui ont montre un diametre d'inhibition de
6 mm, 7 mm et 10 mm etait respectivement de 5, 1 et
1; le nombre de souches sensibles ayant un diametre
de 11 mm, 12 mm et superieur 'a 12 mm etait
respectivement de 5, 5 et 102. Avec le disque a 2 U
de penicilline, les 7 souches RRP ont montre un
diametre inferieur ou egal a 25 mm, et les souches
sensibles des diametres allant de 20 mm a plus de
27 mm.
Nous avons ensuite compare les CMI obtenues
par la methode de reference et par la technique du
E-test apres ensemencement par inondation et par
ecouvillonnage. Les resultats figurent aux Tableaux
3 et 4. Lorsqu'on ensemence par inondation, les CMI
sont globalement plus elevees avec le E-test pour la
penicilline, identiques pour le cefotaxime et la
ceftriaxone, et globalement inf6rieures pour
l'ampicilline, I'amoxicilline, le chloramphenicol,
la ciprofloxacine et la rifampicine. Lorsqu'on

Tableau 2: CMI50, CMI et CMI limites de neuf antibiotiques, pour N.

meningitidis
Antibiotique (nombre de souches) CMIl mg/I CMIgo mg/l CMI limites mg/l
P6nicilline (n 189) 0,015 0,03 -0,007-0,125
Ampicilline (n - 175) 0,06 0,125 <0,007-1
Amoxicilline (n 177) 0,125 0,25 <0,007-2
Cefotaxime (n 179) <0,007 <0,007 <0,007-0,06
Ceftriaxone (n 177) <0,007 <0,007 <0,007-0,03
Chloramphenicol (n = 179) 0,5 1 0,03-4
Rifampicine (n 176) <0,007 0,125 <0,007->32
Spiramycine (n 137) 8 16 0,125-16
Ciprofloxacine (n = 42) <0,007 0,015 <0,007-0,125

Tableau 3: Comparaison entre les CMI obtenues par la methode de reference (dilutions en gelose MH) et I'E-test
(ensemencement par inondation) pour N. meningitidis
Ecart exprime en nombre de dilutions
-3 a <-2 -2 a <-1 -1 a <0 0 >0 a 1 >1 a 2 >2 a 3
Antibiotique (nombre de souches) Nombre de souches (%)
P6nicilline (n 92) 0 6 (6,6) 14 (15,2) 24 (26,1) 20 (21,7) 14 (15,4) 14 (15,4)
Ampicilline (n 42) 2 (4,9) 13 (31,7) 19 (46,3) 3 (7,3) 4 (9,8) 1 (2,4) 0
Amoxicilline (n 41) 3 (7,3) 8 (19,5) 20 (48,8) 4 (9,8) 6 (14,6) 0 0
Cefotaxime (n 92) 2 (2,2) 8 (8,8) 18 (19,8) 44 (48,3) 18 (19,8) 2 (2,2) 0
Ceftriaxone (n 41) 0 1 (2,4) 0 40 (97,6) 0 0 0
Chloramphenicol (n = 91) 4 (4,4) 27 (29,7) 33 (36,3) 12 (13,2) 10 (11,0) 4 (4,4) 1 (1,1)
Ciprofloxacine (n = 50) 0 4 (8) 31 (62) 5 (10) 5 (10) 2 (4) 3 (6)
Rifampicine (n = 91) 0 16 (17,6) 23 (25,3) 33 (36,3) 17 (18,7) 1 (1,1) 1 (1,1)

WHO Bulletin OMS. Vol 76 1998 395

P. Nicolas et al.

Tableau 4: Comparaison entre les CMI obtenues par la methode de reference (dilutions en gelose MH) et I'E-test
(ensemencement par ecouvillonnage) pour N. meningitidis
Ecart exprim6 en nombre de dilutions
-3a< -2 -2a<-1 -1 a<0 0 >Oa1 >1 a2 >2a3
Antibiotique (nombre de souches) Nombre de souches (%)
Penicilline (n 66) 0 0 5 (7,6) 8 (12,1) 39 (59,1) 13 (19,7) 1 (1,5)
Ampicilline (n 65) 20 (30,8) 32 (49,2) 3 (4,6) 6 (9,2) 4 (6,1) 0 0
Amoxicilline (n 65) 6 (9,2) 27 (41,5) 25 (38,5) 5 (7,7) 2 (3,1) 0 0
C6fotaxime (n 65) 0 0 1 (1,5) 61 (93,8) 2 (3,1) 0 1 (1,5)
Rifampicine (n = 65) 0 1 (1,5) 5 (7,7) 18 (27,7) 25 (38,5) 9 (13,8) 7 (10,8)

Tableau 5: Resume des donnees pharmacologiques de la litt6rature

Demie-vie Cmax en mg/I (posologie,
Antibiotique (heures) administration, nombre d'6tudes) % lid aux proteines
Penicilline G 0,5 120-30 (1 MU IV) 40-65
1300-400 (5MU IV)
20,7-0,8 (250000 U/kg/j)
Ampicilline 1 160-80 (1 g IV) 18-20
20,3-0,4 (IV, 4 etudes)
Amoxicilline 1 a 1,5 1180 (1gIV) 17
22 a 3 (IV, 14 6tudes)
Cefotaxime 0,7-1,3 ' 100 (1 g IV) 35-38
26,4 a 8,7 (IV)
Ceftriaxone 8 1150 (1 g IV) 83-96
24 a 5,7 (IV, 8 etudes)
Thiamphenicol 2-3 153 (1,5g thioph6nicol IV) 5-10
2>50% taux seriques 6 a 23 (IV)
Rifampicine 2 14-5 (600mg PO) 75-80
30.3 (P0)
50,25 (PO)
Ciprofloxacine 3-7 1,6-2,8 (500mg PO) 30-40
13,4-4,2 (750mg PO)
30,56 (PO)
40,15 (PO)
60,56 (500mg PO)
Spiramycine 8 13,3 (6MU PO) 10
61-18 (2g PO doses multiples)
713-36mg/kg, (2g PO doses multiples)
88-78mg/kg, (2g PO doses multiples)
PO: per os; IV: par voie intraveineuse; MU: million d'unites; Cmax: concentration maximale.
Serum.
2 LCR infect6.
3 LCR enflamme.
4LCR non enflamme.
5Salive.
6 Secretions bronchiques.
7Muqueuse bronchique.
8 Amygdales.

ensemence par 6couvillonnage, les CMI sont
globalement plus elevees avec le E-test pour la
penicilline et la rifampicine, identiques pour le
c6fotaxime, et globalement plus basses pour
l'ampicilline et l'amoxicilline.
Le Tableau 5 a ete etabli d'apres les donnees de
la litterature et indique les concentrations
d'antibiotique obtenues dans le LCR ou dans la
salive en fonction de l'antibiotique et de la quantite
injectee ou absorbee.

396 WHO Bulletin OMS. Vol 76 1998

 Standardisation de l'antibiogramme de Neisseria meningitidis
Discussion
Le milieu de Mueller-Hinton, largement repandu
dans tous les laboratoires de bacteriologie, est utilis-
able pour l'antibiogramme de Neisseria meningitidis.
La culture a 37 °C sous atmosphere contenant 5% de
CO2 permet la pousse de l'ensemble des souches en
24 heures, pousse que l'on n'est pas parvenu a
obtenir lors d'essais preliminaires pour la plupart
des souches, meme en 48 heures, en l'absence de
CO2.
fi-Lactamines
En ce qui concerne les penicillines, la litterature fait
etat de souches de moindre sensibilite 'a la penicilline
et de tres rares souches productrices de ,-lactamase.
Aucune resistance n'est actuellement decrite pour
les cphalosporines de troisieme generation.
La production d'une 13-lactamase n'a jusqu'a ce
jour ete observee que sur de trtes rares souches
provenant d'Espagne, d'Afrique du Sud ou du
Canada. La CMI de la penicilline G est alors
toujours :2 mg/l, pouvant atteindre et depasser
256 mg/l (2, 3, 4). Ces enzymes de type TEM-1 sont
d'origine plasmidique (3) et transferables in vitro du
gonocoque au meningocoque (5, 6). La production
de 13-lactamase peut etre facilement decelee au
moyen d'un disque de nitrocfine.
La diminution de la sensibilite a la penicilline
G et aux aminopenicillines (CMI = 0,125-1 mg/l)
est liee a une modification de la PLP 2 (proteine
de liaison aux penicillines). Cette resistance de bas
niveau signalee en Espagne des 1985 progresse
actuellement en Europe, en Afrique du Sud, aux
Etats-Unis, et est decrite en France depuis 1991 (7).
La resistance est liee a un gene pen A modifie qui est
une mosaique du gene des meningocoques dits peni
S et de genes d'especes voisines comme Neisseria
cinerea (8). Ce gene code pour une PLP 2 hybride
d'affinit6 reduite a la penicilline, entrainant une mul-
tiplication par un facteur 5 a 10 des CMI, qui
6ventuellement associee a un autre mecanisme tel
que la diminution de la permeabilite de la membrane
externe, pourrait rendre compte de la diminution de
sensibilite a la penicilline G et aux aminopenicillines.
La sensibilit6 aux cephalosporines de troisieme
generation comme le cefotaxime et surtout la
ceftriaxone est conservee (9, 10, 11).
Le probleme actuel est la recherche, par une
methode simple, des souches de sensibilite diminu6e
a la penicilline (0,1 mg/l CMI 1 mg/i). Campos
suggere l'emploi de deux disques (oxacilline 1 tg et
p6nicilline G 2 U) qu'il depose sur une gelose de
Mueller-Hinton enrichie par 5% de sang de mouton
incubee sous atmosphere humide sans CO,. Les
WHO Bulletin OMS. Vol 76 1998
souches sont alors classees en: peni S ampi S si le
diametre d'inhibition est -11 mm pour l'oxacilline et
C28mm pour la penicilline (2U), peni S ampi R
(CMI 0,125 mg/i) ou peni R ampi R si le diametre
-
d'inhibition est s10mm pour l'oxacilline (1 rtg) et
,26mm pour la penicilline (2U) (12,13).
Perez-Trallero recommande l'utilisation du
disque de penicilline 2 U et note qu'aucune souche
sensible sur 126 n'a un diametre inferieur a 22mm
alors qu'aucune souche de sensibilite diminu&e sur
61 n'a un diametre superieur a 27mm (14).
Les resultats obtenus dans notre etude sur
milieu de Mueller-Hinton en atmosphere humide
contenant 5% de CO2 montrent que l'application de
ces criteres permet d'identifier toutes les souches de
sensibilite diminuee a la penicilline, mais egalement
des souches sensibles. Tenover retrouve egalement
des faux positifs avec un disque contenant 1 ,ug
d'oxacilline et recommande d'emblee la mesure de
la CMI par microdilution en milieu liquide de
Mueller-Hinton suivant les normes NCCLS ou par
dilution en gelose de Mueller-Hinton ou en gelose de
Mueller-Hinton supplementee en sang cuit (15).
Quand le diametre d'inhibition obtenu par la tech-
nique des disques est -10mm pour l'oxacilline (1 rtg)
ou s28 mm pour la penicilline (2 U), il est necessaire
de verifier par dilution la CMI de la penicilline G.
Les concentrations en penicilline G atteintes
dans le LCR avec une posologie de 250000U/kg
sont de 1 tg/ml une heure apres l'injection et se
maintiennent 'a 0,8 [tg/ml pendant les quatre heures
qui suivent. Dans la mesure otu les CMI restent
inferieures aux concentrations de penicilline ou
d'ampicilline atteintes dans le LCR, l'evolution
clinique sous traitement est identique a celle
observee avec les souches sensibles (16, 17).
Rifampicine
Les resistances a la rifampicine sont encore rares.
Ces resistances seraient dues a des mutations au
niveau du gene rpo B combin6es ou non a une dimi-
nution de perm6abilite qui determinent des niveaux
differents de r6sistance (18). Toutes les souches
sensibles ont une CMI S 0,25 mg/l (Tableau 1). Dans
la litterature, les CMI des souches sensibles sont
comprises entre -60,007 et 0,25 mg/l (18, 19). Les con-
centrations maximales (Cmax) atteintes dans la
salive apres prise orale de 600mg sont de l'ordre de
0,25 mg/l et atteignent 4-5 mg/l dans le serum (20).
Chloramphenicol
Les CMI des souches etudiees dans la litt6rature sont
comprises entre 0,12 et 4mg/l (10, 11, 19, 21). Les
concentrations obtenues dans le LCR sont de 6 a
23 mg/I.
397
P. Nicolas et al.

Ciprofloxacine rifampicine et le chloramphenicol. Le chevau-

La ciprofloxacine a ete proposee comme
antibiotique prophylactique de remplacement (22,
23). Rekonen, dans une 6tude randomisde contre
placebo, obtient un taux d'eradication du portage de
96% chez les malades sous prophylaxie contre 13%
dans le groupe placebo (23). Les CMI rapportees
dans la litterature sont comprises entre <0,007
et 0,06mg/l, quel que soit le phenotype des souches
vis-a-vis des penicillines (10, 11, 19, 21, 24). La
resistance aux fluoroquinolones est rapportee
de facon exceptionnelle. Les concentrations
atteintes se situent autour de 2mg/l dans le serum et
sont voisines de 0,5 mg/l dans les s6cretions
respiratoires.
Interet du E-test
Le E-test est utilisable, en particulier pour le
depistage des sensibilites diminuees 'a la penicilline
ou des resistances a la rifampicine, si l'on ensemence
par ecouvillonnage (14, 15, 24, 25), les CMI ainsi
obtenues pour la penicilline et la rifampicine etant
globalement sup6rieures d'une dilution a celles
obtenues par la methode de reference. Le E-test
comme methode rapide de mesure des CMI ne
semble pas permettre d'eviter un controle par la
methode de reference (dilutions en gelose de
Mueller-Hinton).
Interet de la methode des disques par
diffusion
Le determination des diametres critiques avec les
disques du commerce est possible pour la
chement des valeurs des diametres d'inhibition des
souches sensibles et intermediaires rend compte de
l'impossibilite de donner des diametres critiques
fiables avec les disques d'amoxicilline 25 rg,
ampicilline 10 tg et penicilline lOU. Seuls les disques
faiblement charges en beta-lactamine, oxacilline
l1tg, penicilline 2U ou oxacilline 5,tg, permettent
une detection, quoique imparfaite, des souches
relativement resistantes a la penicilline.
Concentrations critiques
proposees
Tenant compte des resultats obtenus, des donnees de
la litterature, des concentrations maximales atteintes
dans le serum et le LCR avec les antibiotiques
utilis6s en therapeutique, et dans les secr6tions
respiratoires et le serum avec ceux utilises en
prophylaxie, nous proposons les concentrations cri-
tiques indiquees au Tableau 6.
Conclusion
Le milieu de Mueller-Hinton incube a 37 °C avec 5%
de CO2 a servi a standardiser les m6thodes d'etude
de la sensibilit6 de Neisseria meningitidis par dilution
en milieu solide, par E-test et par la methode des
disques pour differents antibacteriens: penicilline,
amoxicilline, cefotaxime, ceftriaxone, chloramph6ni-
col et rifampicine.
La determination de la CMI par dilution en
gelose doit rester la technique de reference.

Tableau 6: Concentrations critiques proposees pour N. meningitidise

Antibiotique Concentrations critiques (mg/I) Diametre critique (mm)
Penicilline G .-0,06b >1
Amoxicilline s0,25 >2
Cefotaxime <0,25
Ceftriaxone s0,25
Chloramphenicol s2 >4 >30
Rifampicinec --0,25 >30
a Conditions
techniques habituelles: milieu de Mueller-Hinton, incubation a 37 °C en presence
de 5% de C02, lecture a 18-20 heures.
b La recherche d'une diminution de sensibilite aux penicillines se fait en routine avec un
disque d'oxacilline (1 ltg) selon les criteres suivants: diametre d'inhibition >10mm: souche
sensible aux penicillines; diametre d'inhibition - 10mm: presomption de sensibilite diminu6e
a la p6nicilline et/ou l'amoxicilline. Dans ce dernier cas, les CMI doivent etre mesurees par
dilutions en gelose (104 bacteries par inoculum) ou a defaut par E-test (ensemencement par
ecouvillonnage a partir d'une suspension correspondant a l'indice 0,5 de l'echelle de Mac
Farland en tampon phosphate a pH 7,2). Quand la CMI de la penicilline G est superieure a
1 mg/I, il est necessaire de rechercher la presence d'une 3-lactamase avec un disque de
nitrocefine.
c Antibiotique utilisable uniquement en prophylaxie.

398 WHO Bulletin OMS. Vol 76 1998

 Standardisation de I'antibiogramme de Neisseria meningitidis
L'obtention d'une valeur approchee de cette CMI
est toutefois possible par le E-test.
La detection des souches relativement
resistantes a la penicilline par la methode des disques
est difficile. En effet, un disque de penicilline a 1OU
ne permet pas de deceler ces souches. Un disque
d'oxacilline a 1 [ig permet d'avoir une presomption
lorsque le diametre d'inhibition est -1O mm. Dans ce
cas la mesure de la CMI en milieu solide ou
eventuellement par E-test reste indispensable pour
distinguer les quelques souches sensibles 'a la
penicilline qui se melent a ces souches moderement
sensibles. Cette confirmation releve d'un centre de
r6f6rence.
Enfin, des concentrations critiques sont
proposees pour ces differents antibiotiques ainsi que
des diametres critiques pour le chloramphenicol et la
rifampicine.
Summary
Standardization of the Neisseria
meningitidis antibiogram. Detection of
strains that are relatively resistant to
penicillin
Studying the susceptibility of 189 Neisseria
meningitidis strains to penicillin, amoxicillin,
cefotaxime, ceftriaxone, chloramphenicol and
rifampicin by determination of minimum inhibitory
concentrations (MICs) by agar dilution (reference
method), E-test and disc diffusion method on
Mueller-Hinton agar at 370C with 5% C02 enabled
us to standardize the antibiograms.
While MIC determination by agar dilution is still
the reference method, it is possible to obtain exact
or approximate MIC values using the E-test. For
laboratories that cannot determine penicillin MICs, it
is impossible to detect strains that are relatively
resistant to penicillin (RRP strains: 0.1 .MIC .
1 mg/I) using a 10-U penicillin disc. A 1 tg-oxacillin
disc allows MIC to be determined in most cases
when the oxacillin inhibition zone is .10 mm. Such
strains must be sent to a reference laboratory for
exact MIC determination. Based on our results and
literature data on pharmacokinetics, we propose
critical concentrations for these various antibiotics
as well as critical diameters for chloramphenicol and
rifampicin discs.
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