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Acide nucleique
I- Historique
1 ère théorie cellulaire (XIXème siècle) : « Tous les êtres vivants, animaux et végétaux, sont constitués de cellules
» (Schleiden et Schwann, 1839)
Cellule : unité de base du monde vivant, pas de vie sans cellule (virus non-vivants)
En 1937, Chatton classe les cellules en procaryotes (sans noyau) et eucaryotes (avec noyau)
XIXème siècle : Mendel définit comment les gènes se transmettent d’une génération à l’autre
1902 : Garrod fait la 1 ère relation entre un gène et une protéine l'alcaptonurie serait due au déficit héréditaire
d'une enzyme des voies azotées
1) Les phosphates
Structure générale :
– Base azotée
– Sucre
– Phosphate(s)
Motifs de variation :
– Nombre de phosphates
3) Les ribosomes
- de la base A, T, C, G et U
- du nombre de P 1, 2 ou
Les nucléosides :
RESUME :
III- L’ADN
Polynucléotides : polymères de nucléotides
Orientation anti-parallèle
- 30% de cytosine
- 30 % de guanine
→ Diamètre : 2 nm
→ Bases séparées de 0,34 nm
→ Pas de l’hélice : 10 nucléotides = 3,4 nm
→ Rotation de 36° d’un nucléotide à un autre
→ Les bases s’associent par des liaisons hydrogènes
2) La condensation de l’ADN
Génome humain :
Séquencé en 2004 par un consortium international et une société privée, Celera Genomics
2 à 3% de l’ADN codant :
Fibres de 30 nm de diamètre
Mitose :
Prophase ;
3) L’ADN mitochondrial
Une région non codante : d-loop, très variable = outil d’investigation utilisée pour :
- Origine populations
- Recherche filiation
- Enquêtes policières
- Topoisomérases I et II
- ADN gyrase
Même orientation 5’ → 3’
3) ARN ribosomiques
ARN ribosomiques :
ARNr transcrits sous la forme d’un « grand » ARN précurseur qui est ensuite coupé
En particulier les microARN (miARN) et les ARN interférents (siARN pour small interfering)
Les siARN
ARN courts introduits dans la cellule par l’expérimentateur pour inhiber une
expression protéique
Les snARN :
Participent notamment à l’épissage des ARN messagers et à la maturation des ARN ribosomiques
Les snoARN :
ADN « lourd »
Réplication semi-conservative
2) La transcription
La
maturation de l’ARNm :
La coiffe :
La queue :
L’épissage :
3) La traduction
Traduction de l’ARNm :
Les ARNt se fixent les uns après les autres sur les codons de l’ARNm
par leurs anticodons
1- Initiation
activité peptidyltransferase
2- Elongation
Translocation du ribosome
Terminaison
Applicable aux nucléotides, pas à l’ADN ou à l’ARN pour lesquels une concentration en mol.L-1 n’est pas applicable
40 µg/ml d’ARN
du % de GC (coefficient de Chargaff)
Hybridation: association de
2 brins complémentaires (ADN-ADN,
ADN-ARN ou ARN-ARN)
2) Electrophorèse
3- Electrophorèse 50-100 V
5- Observation sous UV
Exemple d’application :
pour vérifier que des ARN sont non dégradés
systématique après une extraction d’ARN
ARN ribosomiques : 80% des ARN et structures doubles brins
Pour mettre en évidence l’apoptose
Après extraction de l’ADN de cellules ou d’un tissu
Distance de migration inversement proportionnelle avec la taille
Relation non linéaire entre la distance de migration et la taille
Il faut tracer log (taille) = f (distance de migration)
3) Observation microscopique
Pour observer l’ADN
Pour observer les noyaux, les cellules
Coloration au DAPI (4’,6-diamino-2-phenylindole)
Se lie aux bases A et T Émet une fluorescence bleue
Observation des noyaux en microscopie à fluorescence
Coloration bleue de l’ADN avec le DAPI
Coloration verte des microtubules
Méthode mise au point par Kary Mullis en 1985 (prix Nobel de chimie en 1993)
Permet d’obtenir rapidement de grandes quantités d’un fragment d’ADN donné
Chaque région, chaque gène, sur un chromosome est unique dans la cellule
Besoin de davantage d’ADN pour nombre d’applications
Séquençage
Tests de paternité Criminologie Dépistages Contrôles agroalimentaires…
Génération d’OGM
Thérapie génique
Une 1ère réaction à 95 °C pendant 5 minutes pour dénaturer tout l’ADN et homogénéiser le milieu réactionnel
Puis 3 étapes qui se répètent à la chaîne
Détermination de la
quantité d’ADN après
chaque cycle
Par incorporation dans
l’ADN d’une sonde
fluorescente
5) Hydrolyse
chimique
enzymatique
- ADN résistant
Hydrolyse acide :
- DNases
- Libèrent une extrémité 5’phosphate et une extrémité 3’OH
- Endonucléases spécifiques d’une séquence d’ADN