Doc1a : Doc1b : Doc1c :

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PLANCHE I : TECHNIQUES SUR PRELEVEMENTS CELLULAIRES

Figure : Techniques de prélèvement de cellules

Consigne :
Identifier chacune des techniques puis donner la différence entre ponction et biopsie.
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PLANCHE VI: TRAÇAGE RADIOACTIF

Expérience :
Une feuille (FD) d’un jeune plant de châtaigne d’eau est placée un certain temps dans une enceinte
contenant du 14CO2. On réalise ensuite, à l’aide de cette plante, une autoradiographie.
La photographie b présente les résultats observés (notons que les zones radioactives sont claires car
c’est ici le négatif de l’autoradiographie qui est présenté).

Consigne :
1. Analysez cette expérience puis définir le traçage radioactif.
 2. Proposez une hypothèse pour expliquer ces résultats.

PLANCHE II : TECHNIQUES DE COLORATION.

Test de Brachet :

Mettre l'échantillon dans un verre de montre contenant du vert de méthyle pyronine pendant 2min.
Faire passer l'échantillon dans un second verre de montre contenant de l'eau distillée, pour rincer.

Coloration de Feulgen :

Mettre l'échantillon dans un tube contenant de l'acide chlorhydrique puis placer au bain marie à 60°C
pendant 10min.
Récuperer l'échantillon et le mettre dans le réactif de Schiff pendant 30min à 1h.

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PLANCHE III : LA CHROMATOGRAPHIE

Texte :

La chromatographie est une technique qui initialement était appliquée uniquement à la séparation de
substances colorées (d’où son nom). Actuellement, elle est généralisée à des substances non colorées. Il
y’a divers procédés de chromatographie mais nous allons utiliser la chromatographie de partage qui utilise
l’équilibre qui s’établit pour des corps dissouts entre deux solvants partiellement miscibles, l’un mobile et
l’autre stationnaire. Une substance dissoute est entrainée par le solvant mobile d’autant plus rapidement
que sa solubilité dans ce solvant est plus grande et sa solubilité dans le solvant stationnaire plus faible.

Exemple : séparation des pigments de la chlorophylle par la chromatographie de partage.

Expérience :

On dispose :

− Une grande éprouvette munie d’un bouchon

− Un mélange de solvant : éther 85%, acétone 10%, benzène 5% (10 cm)
− Un papier à filtration lente.
− Une solution acétonique de pigment de pigment foliaire de 3g de feuille verte broyée au mortier et
de 20cm3 d’acétone.

On applique une tâche de cette solution à analyser à 2cm de l’extrémité de la bande du papier. On met le
solvant au fond de l’éprouvette, la bande de papier est suspendue au crochet coulissant du bouchon et
disposé dans l’éprouvette de façon à ce qu’elle baigne dans environ 1c, du solvant et ne touche pas la
paroi de l’éprouvette. Les solvants vont emporter les pigments selon leur solubilité. L’éprouvette sera
entourée d’un papier noir afin d’éviter l’altération du pigment par la lumière. Les résultats sont lus au bout
de 30 à 50 minutes.
Fig1. Technique de séparation des pigments de la chlorophylle par chromatographie sur couche fine

Consigne :

1. Coloriez du bas vers le haut le chromatogramme obtenu en utilisant une couleur vert olive au
premier pigment, une couleur vert bleu pour le deuxième pigment, une couleur jaune pour le
troisième pigment et une couleur orange pour le dernier.
2. Que pouvez-vous conclure à la fin de cette expérience ?

PLANCHE IV : LA CENTRIFUGATION

Afin d'analyser leur structure ou leur composition, il faut d’abord séparer les différentes structures
présentes dans la cellule. Pour cela, on broie une culture de cellules pour obtenir un broyat. La séparation
des constituants peut alors se faire par centrifugation.
− Centrifugation différentielle
On centrifuge en fonction de la taille et de la densité de ses constituants et donc à différentes vitesses : à
chaque vitesse, différents organites se déposent dans le culot, qui sera prélevé.
La centrifugeuse fait tourner une suspension au tour d’un axe central en produisant une force centrifuge
qui provoque le rassemblement des particules en amas au fond du tube.
Consigne :

1. Identifier la méthode de séparation utilisée.

2. Décrivez les résultats obtenus.

PLANCHE V : TECHNIQUES D’OBSERVATION :

 Figure 4 : Présentation du microscope optique

Figure 5 : Montage de la préparation microscopique

Centrage. Mise au point.

Après réglage de la lumière, placez la préparation
sur la platine de façon que la coupe soit dans
l’axe optique du microscope
Elle doit toujours se faire en remontant le tube.
On mène l’objectif le plus près possible de la lamelle, sous
contrôle direct de la vue A1. Puis l’œil à l’oculaire, on ra-
mène le tube jusqu’à apparition de l’image B.
Comparaison entre le microscope optique et électronique

Comparaison entre le microscope optique et électronique