Univsité Badji Mokhtar – Annaba

Méthodologie Scientifique et Techniques d'Etude du Vivant (2ème année T.C)

TP n°01 : Observation d’un frottis sanguin

par microscope optique.
Objectifs :
- Préparer un frottis sanguin.
- Observation de la morphologie des constituants du sang
- Observer un frottis sanguin coloré au grossissement x40, et repérer sur ce frottis les différentes cellules
sanguines

 Principe :
1- La préparation d’un frottis sanguin :
Le frottis sanguin sert à évaluer la taille et la morphologie des différents constituants du sang « la taille
et la forme des érythrocytes, l’aspect et la différenciation des leucocytes
2- Observation par microscope

 Protocole

Frottis sur lame :

 Déposer une goutte de sang de taille moyenne à 01 cm de l'extrémité d'une lame dégraissé.
 Placer sur la goutte au contact de l’arête d’une lame ou une lamelle inclinée à 45° de façon à ce que
le sang s'étale par capillarité.
 Pousser rapidement la deuxième lame maintenue à 45° le long de la lame pour étaler uniformément la
goutte (frottis)
 Si la taille de la goutte est convenable, le frottis doit se terminer à 01 cm environ de l’autre extrémité
de la lame

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Coloration de May Grünwald- Giemsa :C’est une association de deux types de colorants :

May Grünwald Giemsa

Une solution d’éosine et bleu de méthylène Une solution d’éosine et de dérivé bleu de
dans le méthanol. méthylène (azur de méthylène) dans le
méthanol et le glycérol.

 Mode opératoire

Etapes Manipulations Durées d’action

1 - Coloration au May -
Grünwald
2 - Coloration au May –
Grünwald (suite)
3 - Coloration au Giemsa
Séchage
 Observation au microscope :
On procède à l’observation microscopique du frottis avec l’objectif x40.
- Placer la lame du frottis sur les barrettes de
support horizontal d’un bac de coloration. 3 minutes
- Recouvrir le frottis de 15 gouttes de
colorant.
- Ajouter 15 gouttes d’eau distillée.
2 minutes
- Eliminer le May – Grünwald sous un
faible courant d’eau distillée.
10 minutes
- Déposer 2 gouttes de Giemsa puis 20
gouttes d’eau distillée
- Rincer par un faible jet d’eau distillée.
- Laisser sécher la lame à l’air, en position Au moins 5minutes
inclinée, après avoir essuyé la face inférieure
avec du papier essuie-tout.

EQUIPE MSTEV : DJEDIOUI-DERRADJ-BOUALI-LAOUAR-DJEGHADER-DERBA-SEHILI-TAZIR.

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Compte rendu TP N°01 MSTEV

OBSERVATION MICRSCOPIQUE
D’UN FROTTIS SANGUIN

NOM –PRENOM N°POSTE GROUPE NOM DE L’ENSEIGNANT

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La description des différentes parties du microscope à lumière :

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Les constituants du sang

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Résultats
Observation microscopique réelle du frottis(TP)

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