Le Cycle cellulaire Résumé

I. Introduction
1- Introduction

I.1. Le cycle cellulaire décrit les différentes étapes menant à la division cellulaire

• Le cycle cellulaire alterne entre 2 phases principales:

G0 = Phase de quiescence
lnterphase (Phase G1, S, G2) et mitose (Phase M)
• Sortie du cycle cellulaire
• Etat réversible
M= Mitose
• Séparation des
chromatides sœurs
• Obtention de deux cellules
filles G1 = Phase de croissance
• Contrôle sa taille
• Capte son environnement
• Préparation à le duplication
de l’ADN

G2 = Phase de croissance
• Vérification de l’ADN
• Préparation à la mitose

S = Phase de synthèse de l’ADN

• Réplication de l’ADN
• Chromosome à deux chromatides
II. Introduction
1- Caractérisation du MPF

II.1. Notions historiques: dominance cytoplasmique et MPF

• Différentes phases du cycle cellulaire connus depuis longtemps

• Constance de la succession de ces phases suggère un contrôle tout au long du cycle mais
quel est le facteur/molécule/protéine qui le permet?

Manipulations de biologie cellulaire

1920-1930 notion de dominance cytoplasmique

expériences de fusions cytoplasmiques
(voir diapo suivante)

1960-1970, notion de MPF (Maturation promoting

factor) expérience d'injection dans les ovocytes

Découverte d’un facteur diffusible qui permet aux

cellules de rentrer en mitose:
MPF (maturation promoting factor)
II. Introduction
1- Caractérisation du MPF

II.1. Notions historiques: dominance cytoplasmique et MPF

• Il y a dans le cytoplasme de la cellule mitotique ,

la présence d’un facteur diffusible MPF ui
provoque le désassemblage de l’enveloppe
nucléaire et le début de la condensation
chromosomique de la cellule G1
cellule
hybride

• Il faut attendre les années 89-90 pour découvrir la vraie nature du MPF: c’est en fait un
hétérodimère entre une cycline MITOTIQUE et une CDK MITOTIQUE (cyclin-dependent
kinase
• La cellule peut faire plusieurs cycles de divisions cellulaires, l’activité du MPF est donc
cyclique
• Quand la cycline se lie à la CDK, cette dernière devient active.
Cycline mitotique Elle va phosphoryler un tas de protéines qui vont permettre
l’entrée en mitose de la cellule

Cycline-dependent kinase Phosphorylation

mitotique (sérine/thréonine protéines
Mitose
kinases) 3
III.Introduction
1- Régulation de l’activité cyclique du MPF
Qui permet ces
oscillations de synthèse
III.1. Régulation de l’activité du MPF
et de dégradation des
cyclines?
• L’activité MPF cyclique et les mitoses dépendent de la synthèse et de la dégradation
cycliques de la cycline mitotique

Extrait non traité Extrait traité à la RNase

Cycline mitotique concentration

Extrait traité à la Rnase + ARNm de cycline Extrait traité à la Rnase + ARNm de cycline
mitotique wild type mitotique non dégradable

4
III.Introduction
1- Régulation de l’activité cyclique du MPF

III.1. Régulation de l’activité du MPF

• Les cyclines peuvent dégradées car elles contiennent une séquence de 9 aa

(destruction box) qui est reconnue par des enzymes d’ubiquitinylation (E1, E2,
complexe E3 ligase)

Cycline mitotique avec une destruction box

Polyubiquitination des cyclines mitotiques

E1: ubiquitin-activating enzyme

E2: ubiquitin-conjugating enzyme
E3: ubiquitin ligase
ubiquitin: 76 aa polypeptide
III.Introduction
1- Régulation de l’activité cyclique du MPF

III.1. Régulation de l’activité du MPF

• Le complexe APC est une E3 ligase qui s’active en fin de mitose : elle permet la
dégradation de la cycline mitotique => sortie de mitose
III.Introduction
1- Régulation de l’activité cyclique du MPF

III.1. Régulation de l’activité du MPF

• L’association à une cycline n’est que le 1er niveau de régulation du complexe MPF
(CDK/cycline mitotique)

- +
3. Phosphorylation inhibitrice 1. Association
TRH14 et TYR15 avec une Cycline
KINASE WEE1 VA INACTIVER
PHOSPHATASE CDC25 VA P THR14 Cycline
ACTIVER

P TYR15
CDK
LA KINASE CAK VA ACTIVER

THR160 P
CKI +
-
2. Phosphorylation
4. Association avec activatrice sur THR160
un inhibiteur CKI
7
III.Introduction
1- Régulation de l’activité cyclique du MPF

III.3. les différents niveaux de régulations des CDKs

1) Avant la liaison de la Cdk à la Cycline, le site catalytique de la Cdk est inaccessible pour
l'ATP et la protéine substrat

2) la cycline se lie au niveau de la séquence PSTAIR de

la CDK => déplacement boucle T => les thr160, thr14,
Thr14 tyr15 deviennent accessibles
Tyr15
PSTAIR Thr14

Thr160 Tyr15
T Loop Cycline
PSTAIR

CDK Thr160
T Loop
Protéine
ATP
substrat
CDK
III.Introduction
1- Régulation de l’activité cyclique du MPF

III.3. les différents niveaux de régulations des CDKs

3) Wee1 phosphoryle la Cdk sur la Thr14 et la Tyr15: cela provoque une répulsion
électrostatique qui interdit l'entrée de l’ATP. Note pour toi étudiant: Comme entrer dans le cycle
cellulaire est une décision fondamentale pour la cellule et un phénomène irréversible, on se laisse
encore du temps pour être sûr de vouloir activier notre CDK….En gros de bien mûrir notre décision de
nous diviser….

X
4) Bon OK, on a bien réfléchi, on y a va, on fonce, on se
divise!
ATP CAK phosphoryle la Thr160: Cela dégage l'entrée du
Thr14 P site substrat et permet la fixation de la protéine
Tyr15 P substrat sur la Cdk

Cycline X ATP
PSTAIR Thr14 P
Tyr15
P
T Loop Thr160
PSTAIR

CDK
T Loop Thr160 P
Protéine Protéine
substrat substrat
III.Introduction
1- Régulation de l’activité cyclique du MPF

III.3. les différents niveaux de régulations des CDKs

5) Cdc25 déphosphoryle la Thr14 et la Tyr15: l'ATP entre dans son site.

Enfin! La CDK phosphoryle son substrat!

Thr14
Tyr15
ATP

T Loop Thr160 P
Protéine
P
substrat
!"
IV.#$%&'()*%+'$
1- Activité des complexes CDK/cyclines au cours du cycle cellulaire
Introduction

IV.2. Il existe plusieurs complexes Cycline / Cdk qui interviennent à un moment

précis du cycle cellulaire
• Ils permettent d’activer directement ou indirectement des protéines qui sont impliquées
dans un stade particulier du cycle cellulaire

Mais commence ça
marche exactement? Ca
sert à quoi de
phosphoryler des
protéines avec des
CDK/cyclines? Prenons
l’exemple de la phase
START
!"
IV.#$%&'()*%+'$
1- Activité des complexes CDK/cyclines au cours du cycle cellulaire
Introduction

IV.4. Phase G1: le point de contrôle START

• Phase G1: Le point de contrôle START ou point de restriction est une étape irréversible ou la
cellule s’engage définitivement dans le cycle cellulaire
• A cette étape, certaines protéines clés sont contrôlées par l’activité de complexe CDK/cyclines
spécifique de cette étape

Le franchissement du
START est régulé par le
complexe Rb/E2F

• Rb: rétinoblastome (gène

suppresseur de tumeurs)

• E2F: facteur de
transcription permettant
l’entrée en phase S
!"
IV.#$%&'()*%+'$
1- Activité des complexes CDK/cyclines au cours du cycle cellulaire
Introduction

IV.5. la protéine rétinoblastoma Rb: le verrou du cycle cellulaire

• Le passage du point de restriction dépend de la phosphorylation de la protéine Rb

V. Introduction
1- Mécanismes de contrôle de la progression du cycle cellulaire

V.1. De nombreux points de contrôle

• Il existe d’autres points de contrôle qui permettent le maintien de l’intégrité de la

cellule

Point de contrôle

Tout est Ok?

-nutriment?
-taille cellulaire?
-ADN intact?
-chromosomes bien alignés?
!" #$%&'()*%+'$
V. Introduction
1- Mécanismes de contrôle de la progression du cycle cellulaire

V.1. De nombreux points de contrôle

V.1.a Arrêt du cycle cellulaire en cas de

dommage à l’ADN: rôle de la p53 et des
CKIs

Un dommage à l’ADN est perçu

par la cellule et conduit à
l’activation de la p53

La p53 active la
transcription du gène de
la p21

La p21 est un CKI:

Arrêt en phase G1 ou G2 inhibiteur des cyclines de
phase G1 ou S
15
V. Introduction
1- Mécanismes de contrôle de la progression du cycle cellulaire

V.2. le FACS: un outil pour suivre les cellules au cours du cycle cellulaire

Trieur de cellules fluorescentes Tri des cellules en fonction

FACS (fluoresence-activated cell sorter) du contenu en ADN
Marquage de l’ADN : DAPI, HŒSCHT ou
Iodure de propidium

Nbre de

130
cellules
G1
~ 70%

200 400
G2/M
S ~ 10-20%
~ 5-10%

2n 4n Contenu en ADN
des cellules
V. Introduction
1- Mécanismes de contrôle de la progression du cycle cellulaire

V.2. le FACS: un outil pour suivre les cellules au cours du cycle cellulaire

Ex: Importance de la protéine p53 dans l’activité des points de contrôle cellulaire

Cellules wild type Cellules p53 mutantes

 Le Cycle cellulaire partie 2

Machinerie du cytosquelette autour de la

phase M

Comment se condensent les chromosomes?

Comment s’établit le fuseau mitotique?
Comment les chromosomes se placent sur la plaque équatoriale?
Comment se séparent les chromatides soeurs?

18
I. Condensation chromatine et préparation des chromosomes à la séparation

Condensines et Cohésines assurent la condensation de la chromatine et la cohésion des

chromatides sœurs
Formation de complexes de protéines ayant des structures et des fonctions apparentées

II. Le centrosome et centrioles : essentiels pour le fuseau mitotique

Le centrosome se duplique pour établir le fuseau mitotique

• La duplication du centrosome débute à la transition G1/S
• À la mitose, les deux centrosomes sont matures, ont acquis le maximum
de MPC et peuvent se séparer
• Il y a un couplage entre le cycle cellulaire (cycle de la chromatine) et le
cycle de réplication du centrosome
• Le centrosome joue un rôle important dans le contrôle de la ploïdie des
cellules filles
19
III.Le fuseau mitotique: une structure très dynamique

1) Le fuseau mitotique est composé de 3 classes de microtubules

• Lors de la division cellulaire les MT sont organisés en fuseau bipolaire pour assurer la
transmission des chromosomes aux cellules filles.

2) Demi-vie des microtubules : Augmentation de la

dynamique en mitose

• En interphase, les microtubules ont une demi-vie

d’environ 5 minutes, alors qu’en mitose, cette demi-
vie diminue pour atteindre 15 secondes ce qui
MTs astraux MTs kinétochoriens MTs interpolaires facilite leur réorganisation

Tubuline fluorescente • Cette capacité à augmenter sa dynamique repose

sur…. 20
….d’une augmentation de 5 à 10 fois de la fréquence de catastrophe en mitose: passage d’un réseau
de microtubules longs et stables à un réseau de microtubules courts et dynamiques

• L’équilibre entre catastrophine et MAP

(microtubule associated protein)
détermine la fréquence des catastrophes
et la longueur des microtubules
• Les MAP sont phosphorylées par des
complexes CDK/cyclines en G1 =>
inhibition de ces MAP et
augmentation des catastrophes

Si les MAP et les facteurs de catastrophe jouent un rôle clé dans les propriétés dynamiques des
microtubules, l’assemblage tridimensionnel du fuseau ne pourrait avoir lieu sans l’existence de
moteurs moléculaires ou protéines motrices

3) L’assemblage tridimensionnel du fuseau nécessite des moteurs moléculaires ou

protéines motrices en prophase

21
 Formation d’un point de
concentration des extrémités (-)

Protéines
motrices orientées
ATP (-)

Glissement des filaments de

microtubules
Déplacement du
microtubule

Kinesine 5 se
dépace vers le (+)

Kinesine 5 se
dépace vers le (+)

Déplacement du
microtubule
4) les chromosomes se placent sur le fuseau grâce à leurs kinétochores

• Les kinétochores sont des complexes macromoléculaires au niveau des régions

centromériques des chromosomes mitotiques qui attachent la chromatide aux
microtubules Force tirant le MT
Dépolymérisation côté plus du vers le pôle du
MT kinétochorien fuseau

Inner kinetochore
Dam1 Ring

kinetochore

• Le kinétochore permet une liaison stable avec l’extrémité (+) dynamique du microtubule
• Son rôle et d’assurer une ségrégation rigoureuse des chromosomes entre les 2 cellules filles

5) Alignement des chromosomes en prométaphase

1. Microtubules dynamiques polymérisés à partir des deux pôles

2. Quand un microtubule rencontre un kinétochore d'un chromosome, il le
capture (attachement unipolaire)
3. Le chromosome glisse jusqu’au pôle du fuseau et se réoriente
4. Le chromosome est capturé par un autre microtubule venant de l'autre
centrosome => attachement bipolaire
5. Le « raccourcissement » d’une fibre kinétochorienne est associé, pour les
chromosomes bi-orientés, à la polymérisation de la fibre kinétochorienne
opposée => placement des chromosomes sur la plaque métaphasique
6) En métaphase, les MT kinetochoriens sont à l’état de
additio additio
tapis roulant n de
tubulin
n de
tubulin
e e

La séparation des chromatides (anaphase) est bloquée

tant que TOUS les chromosomes ne sont pas alignés et
reliés aux deux pôles. Tout chromosome mal attaché
envoie un signal inhibiteur

7) Les chromatides se séparent en anaphase grâce au dynamisme des microtubules

Anaphase A: les MT kinetochoriens se raccourcissent: séparation des chromatides sœurs

• Raccourcissement des microtubules

kinétochoriens
• Forces générées principalement au niveau des
kinétochores

Anaphase A

Mouvements des chromatides sœurs vers les pôles

Anaphase B: les MT interpolaires et astraux s’allongent: éloignement des chromatides sœurs
Anaphase B
Elongation et glissement des microtubules interpolaires
traction exercée par les microtubules astraux

Modèle d’action des

protéines motrices
pendant l’anaphase B

IV.Les organites cellulaires au cours de la cytokinèse

Rupture de l’enveloppe nucléaire et fragmentation de l’appareil de golgi

V. La cytokinèse

1 Un anneau contractile d’actine et de myosine permet la séparation des cellules filles

• anneau contractile = assemblage actine/myosine 2 transitoire

Actin / Myosine II

• Interactions moléculaires entre fuseau mitotique central (MT) et sillon de clivage (actine)

Récepteurs membranaires
internes/molécules d’adhésion
Membrane plasmique cellulaire

Actine F

Actine G

microtubules
V. La cytokinèse

2) La GTPase Rho A régule l’activité de l’anneau contractile

Rho A permet la formation d’actine et l’activation de la myosine II

Des protéines régulatrices (ici Cyk4, vert) associées aux

extrémités +
des MTs chevauchants génèrent des signaux contrôlant
l’activité de RhoA
(rouge) recrutée au niveau du cortex cellulaire