TP difficultés de groupage

sanguin.
 Rappel:
Les bases de l’interprétation d’un groupage
sanguin:
1.Résultats conformes de contrôles internes de
la qualité (CIQ).
2.Absence d’ambigüité réactionnelle avec
chaque réactif.
3.Absence de double population.
4.Cohérence absolue des réactions observées
entre les épreuves globulaires et
plasmatiques pour le groupage ABO.
5.Absence de divergence entre deux
réalisations ou de discordance avec une
antériorité de résultat
6.Négativité des témoins réalisé dans le cadre
de la détermination du groupage ABO et
rhésus D
.
Les 3 témoins sont :

1-Témoin allo: Hématies O + sérum patient.

→valide l’épreuve sérique
2-Témoin auto: sérum patient + Hématies patient
→présence d’auto Ac

3 Témoin AB: Hématies patient + sérum AB

→valide l’épreuve globulaire.
Ce témoin n’est plus utilisé depuis l’utilisation des Ac
monoclonaux dans l’épreuve globulaire.
Il permettait d’éliminer toute agglutination, « fausse
agglutination », liée à la présence d’Ag dits de
polyagglutinabilité
 Définir une difficulté de groupage:

Une difficulté de groupage est dite d’un résultat

présentant une réaction non attendue, à la
vue des deux épreuves ( globulaire et sérique)
soit par excès ou par défaut.
Avec ou sans discordance entre les deux
épreuves.
Associé ou non à une/ou plusieurs positivité
(s) des témoins.
 Devant toute anomalie il faut:

• S’assurer de la qualité du prélèvement;

• De la qualité des réactifs;
• De la qualité du matériel (pipetage,
contamination…)
→ refaire le test, après correction de l’anomalie et
validation du CIQ.
• Prendre connaissance du contexte de l’analyse:
âge, ATCD transfusionnels ou d’allogreffe et du
contexte pathologique.
Une fois toutes ces causes exclues il y a lieu
d’ajouter:
• Dans certaines situations l’anti A1 et l’anti H à
l’épreuve globulaire.
• Les hématies A2 à l’épreuve sérique.
 difficulté de groupage

/-Incohérence par défaut III/-Incohérence par excès réactionnel:

réactionnel: Un ou plusieurs des trois témoins est positif.
Dans ce cas les trois témoins sont
négatifs. 1/-T Auto positif
2/-T Allo positif
3/-T AB positif
défauts défaut
réactionnels à réactionnel lors
l’épreuve de l’épreuve
globulaire plasmatique:

II/-Image de double population:

 I/-Incohérence par défaut réactionnel:
trois témoins sont négatifs.
A/- défauts réactionnels à l’épreuve globulaire:
Il s’agit d’expression affaiblie des Ag A et B
pouvant correspondre à différentes situations:
1. Nouveau né: les Ag A et B subissent une
maturation postnatale.
2. Hémopathie maligne: LA, SMP.
3.Phénotype A ou B faible:
Un phénotype faible se définit comme le phénotype
d’hématies dont la réactivité antigénique A ou B
observée à l’épreuve globulaire est plus faible que
celle d’hématies A2 ou B « normales ».

Note: La réaction peut être faible voir ,parfois,

prendre l’aspect d’une double population ou dans
certains cas peut être nulle.
cette classification n’a qu’un intérêt didactique.
Elle n’a aucun intérêt transfusionnel. Il s’agit
dans tous les cas de sujets de groupe A/B,
mais en cas de transfusion il est « classique »
de leur transfuser des CG de groupe «O ».
4. Phénotype cis-AB:
-Ag A de réactivité égale à celle d’un trans-A2B;
-Ag B faible (parfois DP);
-réactivité importante avec l’anti-H;
-fréquent anti-B faible.
5. Phénotype « B acquis »
A la faveur d’une infection, volontiers de type surinfection d’un
cancer colique, les hématies de patients de groupe sanguin A1
essentiellement, voient sous l’action d’une déacétylase
d’origine bactérienne, leur sucre immuno-dominant la N
Acétylgalactosamine, se transformer en galactosamine
(structure proche de l’antigène B dont le sucre immuno-
dominant est un galactose) que reconnaissent certains anti-B
polyclonaux et quelques monoclonaux mal sélectionnés
(caractéristique devant être précisée par le producteur). Ce
phénomène est transitoire et le groupe A du patient pourra
 CAT:
1-rechercher la substance H à la surface des
hématies (avec l’anti-H).
2-Rechercher l’Ag faible ( A ou B) par fixation-
élution.
3-Rechercher des substances ABH solubles dans
la salive des sujets « sécréteurs » par
technique d’inhibition de l’agglutination.
 B/- défaut réactionnel lors de l’épreuve
plasmatique:
Les CDD d’une simonin négative sont:
• Nouveau-né: situation normale, l’anti-A et l’anti B
apparaissent progressivement pour atteindre un
max vers l’age de 5 ans, pour cela un groupage
pour nouveau né n’a qu’une valeur provisoire.
• Hypogammaglobulinémie.
• Chimère hématopoïétique in utéro chez le
jumeaux dizygotes: exemple A/O on notera
l’absence de l’anti A.
• Patient allogreffé.
 CAT
sensibiliser l’épreuve sérique en :
-réalisant l’épreuve en tube en doublant le volume
de plasma par rapport au volume de la
suspension d’hématies-test .
- incubant le mélange 15 min à +4°C avant
centrifugation et lecture.
Note :En cas de suspicion
d’hypogammaglobulinémie une ELP et dosage
des Ig confirment le résultat.
 II/-Image de double population:
1. DP d’origine transfusionnelle: ++++
2. Greffe de cellules souches hématopoïétiques
non identiques: la DP est transitoire, il
convient dans ce cas d’établir un dossier
donnant les consignes transfusionnelles et de
ne pas rendre de document de groupage.
3. Hémopathies malignes.
4. Gémellité dizygote:
En raison de la greffe du tissu hématopoïétique
pendant la vie embryonnaire.
5. Prélèvement de sang de cordon:
Contamination du sang du nouveau né par le
sang maternel.
6. Chez les sujets âgés: par faiblesse
antigénique.
7.Certains phénotypes A ou B faibles.
 CAT

-Demande des renseignements cliniques et des

antécédents transfusionnels .

-remettre une carte provisoire et le conseil

transfusionnel .
 III/-Incohérence par excès
réactionnel:

Un ou plusieurs des trois témoins est positif.

 1/-T Auto positif

Agg froides S in vivo par Rouleaux

apport d’Hties
incompatibles
 a/- le phénomène de rouleaux:
L’épreuve globulaire est perturbée en raison
d’une forte concentration en protéines
observées dans:
-Dysglobulinémies (Kahler , Waldenström).
-Certaines réactions inflammatoires.
-Sang de cordon en raison de présence de
gelée de Wharton (substance mucoïde)
Les rouleaux sont visible au microscope.
Pour résoudre le problème:

• L’ épreuve globulaire:
Laver plusieurs fois les GR en solution saline (4
fois à 37°C).
• l’épreuve plasmatique:
diluer au demi ou au tiers le plasma.
 b/-transfusion incompatible:
On observera :
-une image de double population à l’épreuve
globulaire.
-Coexistence des Ac naturels du patient avec des
Hties ABO incompatibles apportées par erreur
transfusionnelle.
Facilement identifiable par l’historique
transfusionnel.
 c/-Agglutinines froides
Il s’agit d’auto anticorps d’optimum thermique de (+4 C ) , de nature IgM.
Dirigé habituellement contre le Ag sanguin I.
 90% secondaire a certaines infections à :
- mycoplasma pneumaniae
- infections virales
- hemopathie maligne
Agglutination des GR du malade par son propre sérum

 Ac froids titre ↗↗↗ AHAI

Les réactions des 2 épreuves peuvent être positives ainsi que les 3
témoins
 Les Ac

Libres et fixés sur

Libres dans le les GR:
sérum: gênent Gênent l’épreuve
l’épreuve sérique globulaire
 CAT
• si la concentration chauffer la plaque à 37°C ainsi que
le prélèvement et les réactifs
des Ac est faible

• si la concentration des On doit se débarrasser de l’Ac

Ac ’est trop↗

Epreuve globulaire Epreuve sérique

Laisser séjourner les tubes de l’épreuve
éluer les Ac des GR par une
sérique à 37°C pdt 1h, lecture à la sortie
serie 2 à 3 lavage a 37C
de l’étuve

faire une élution à Absorption: des Ac froids sur les GR du

50°C (56°C) sujet lui-même ou sur des GR « O ».
les T doivent être négatifs.
NB: le T auto n’a plus aucune valeur à ce moment là
et nous nous contenterons du T AB
 Examens complémentaires:

-TCD.
-Déterminer la spécificité des auto Ac
froids
-Détermination du titre de l’auto Ac.
-Si une RAI doit être faite dans un cadre
pré-transfusionnel il faudra d’abord
fixer les Auto Ac.
 CAT transfusionnelle:

Transfuser du sang avec un réchauffeur de sang.

 2/-T AB positif
Polyagglutinabilité
Les hématies st dites polyagg lorsqu’elles sont reconnues par
les sérums humains, adultes normaux, ABO compatibles.

Il existe alors sur le GR un Ag: - Anormal.

-Cryptique mais

démasqué.
Et presque ts les sérums humains Nx contiennent l’Ac
correspondant.
En revanche ts les sérums de cordon en sont dépourvus.
 Poly agglutinabilité

Génétiquement transmise Acquise

Cad Hempas

Infectieuse Maligne
T Tk B acquis Tn

Caractéristiques:
-Agglutinables par ts les sérums humains.
-non agg par le sérum autologue.
-reconnus par certaines lectines.
 Aujourd’hui cette difficulté de
groupage n’est plus retrouvée en
laboratoire grâce à l’utilisation d’Ac
monoclonaux.
 3/-T allo positif
-Présence dans le plasma du sujet testé, d’un Ac
irrégulier reconnaissant un Ag autre que Ag A
ou B, exprimé par les hématies test et
provoquant une agglutination des hématies
dans les conditions de réalisation du groupage
ABO.
-L’épreuve sérique ne peut être validée!
 CAT:
Identifier l’Ac:
-faire une RAI à une incubation à T° ambiante.
-les Ac identifiés sont le plus svt des «Ac froids»
Lewis, P1, MNSs voir Lu.
-rarement des Ac d’allo-immunisation post-transf
ou foeto-mat, actifs en salin.
- Une fois l’Ac identifié, refaire l’épreuve sérique
avec des hématies A1, B,O et probablement A2
dépourvues de l’Ag concerné.
Phénotyper :le malade dans la système concerné.
Cas particulier: « phénotype Bombay »
Sans T allo le sujet porteur est groupé O et Avec le
T auto est négatif.
C’est avec le T allo ou à l’occasion d’une RAI que
l’anti H est découvert.
Cet Ac est puissant, actif également à 37°C et très
dangereux sur le plan transfusionnel « receveur
dangereux »
Le sérum réagit avec toutes les hématies O testées.
.
Difficulté de détermination de RH1
• D faible:
-Déficit quantitative
-Quarantaines de types moleculaire decrits
-Il s’agit de substitution ou deletion d’AA sur la
partie trans ou intramembranaire de Ag RH1
-La detection est liee au seuil de sensibilité de la
reaction .
• La technique traditionnelle est le test indirect à
l’antiglobuline.
• D partiel :
déficit qualitatif d’un epitope ou plusieurs
epitopes sur l’Ag D.
Le phénotype le plus fréquent c’est le DVI et
Plus facile a s’immunisé contre Ag D
un anti RH1 ne reconnaissant pas le variant RH1
partiel VI
• En cas d hemolysine , penser a
decomplementer le serum