Biotechnologie appliquée à la lutte

contre les ravageurs

 Résistance de la plante
Antixénose

Phénomène où insectes ne consomment pas la

plante mais vont infester d’autre hôtes
(répulsifs)
Facteurs physiques
Trichomes : sur feuilles (pénétration stylet
pucerons, dépôt œufs)
Cires : niveau épicuticule
Protection dessication, insectes et maladies
Dureté tissus : feuilles, graines comme protection
attaques des ravageurs
Facteurs chimiques

Répulsifs : émission par plante (ex : terpènes)

Départ insecte avant consommation
Substances volatiles
Phagodétérrents : présents dans les tissus
(végétal testé par ravageur)
Alcaloïdes, phénols, saponines, lactones

Ex : grains maïs et acides phénoliques

Céréales et DIMBOA

Nécessité d’analyser les volatiles (CPG, GC-MS)

Prise d’essai air sur le terrain
 Résistance de la plante
Antibiose

Phénomène où les insectes consomment la

plante, impliquant des modifications de
la biologie du phytophage
(développement, reproduction)

Effet sur mortalité larvaires, adultes,

viabilité des œufs, durées de
développement
Facteurs physiques
Libération de molécules (aldéhydes, alcanes, esters)
quand dégradation trichomes

Facteurs chimiques
Toxines (cétones, furanocoumarines, acides organiques,
isothiocyanates, …)

Inhibiteurs de croissance
(enzyme digestifs : amylases, protéases, …)
Inhibition activité enzymatique
Bloquage de la digestion
 Comment évaluer résistance plante ?

Mesures dégâts plante au champ

(manchon toile, tube en verre)
et au laboratoire (1 plante / cage)

Mesures sur l’insecte

Comportement (olfactométrie, EAG)

Application : électrode sur puceron et sur plante

(à chaque piqûre : impulsion électrique)

Biologie (développement et reproduction)
Isolation substance active

Répulsif : piégeage et test olfactif

Phagodétérrents & toxines : extraction et test

biologique

Isolation molécule
utilisation divers solvants (ethanol, eau, ether, …)

Test biologique : papiers filtres traités avec

substance

Injection dans plante témoin

Comment observer résistance des plantes ?

Olfactométrie

Type tunnel : +sieurs mètres de long en Zn

(car n’absorbe pas odeurs)
Olfactomètre de labo (1, 2, 4 voies les plus
courant)
Système à large diffusion (1 source odeur)
Electroanténnographie (EAG)

Prélèvement antenne insecte, branche électrodes de

chaque côté (fils de cuivre)
Relié à amplificateur et oscilloscope
Passage air + substance (extrait de plante, molécule
pure)
Mesure de l’influx nerveux (électrique) dans antenne
Utilisation des moyens de défense
des Plantes

et

organismes génétiquement modifiés

Plantes et Schéma de l’écosystème

• Dans l’utilisation des plantes transgéniques, aucune recherche ne porte

sur la relation de l’insecte et de la plante ni son importance comme
agent de l’écosystème

Animaux
(Humains) Climat

Plantes Sol
(Plantes transgéniques)
 Quels sont les types de plantes
transgéniques?
• Vis-à-vis de la résistance aux nématodes
– inhibiteur de protéases (plantes)
• Vis-à-vis de la résistance aux maladies
– malades virales
– protéine constituant la capside (manteau), immunité spécifique à
une espèce (virus)
– protéine de mouvement, moins spécifique, en développement
(virus)
– maladies bactériennes et fongiques
– protéine antibactérienne (insectes)
– phytoalexine (plante)
– chitinase (plante)
– glucanase (plante)
 Quels sont les types de plantes
transgéniques?
• La résistance aux herbicides
– glutathion S-transférase dégradant les herbicides (plantes)
– glyphosate réductase (bactéries)
• La résistance aux insecticides
– protéine insecticide Bt (bactéries)
– inhibiteur de protéases (plantes/insectes)
– lectine (plante)
– Chitinase (champignon/ insecte)
 Le développement des plantes
transgéniques
• Le développement fulgurant des cultures transgéniques

Evolution du nombre d’autorisations annuelles octroyées sur le territoire

des Etats-Unis pour la réalisation de tests de terrain visant à déterminer
l’efficacité des plantes transgéniques résistantes aux insectes.
 Le développement des plantes
transgéniques
• En 1999:
– 39,9 millions d ’ha
– rendement supérieur mais dégâts plus importants
– après trois années d ’utilisation, obtention des
premiers bénéfices (119 millions de $ pour le maïs
en intégrant les économies sur les pesticides
utilisés, le coût de la main d ’œuvre, le prix des
semences et les frais de technologies associés à
celles-ci)
Des protéines d’origine microbienne
pour résister aux insectes
• Bacillus thuringiensis

Bacillus thuringiensis: S (spore), C (crystal de protoxine)

Des protéines d’origine microbienne
pour résister aux insectes
• Bacillus thuringiensis

Chou non transgénique Chou transgénique

Des protéines d’origine microbienne
pour résister aux insectes
• Bacillus thuringiensis
• Gènes codants pour des protéines:
– Cry 1 et 2 toxiques pour les Lépidoptères
– Cry 3 toxique pour les larves de Coléoptères
– Cry 4 toxique pour les larves de Diptères

Les principales cultures Bt actuellement sur le marché

 Mécanismes de défense de la
plante
Ehrlich et Raven (1964)
Harborne (1993)
Diversité de métabolites secondaires

Et protéines à propriété insecticide

« Diversité métabolites secondaires »
 Inhibiteurs d’enzymes (protéinases)
Enzymes protéolitiques catalysent la coupure de ponts
peptides dans protéines

Classification suivant mécanisme catalyse et présence

d’acides aminés dans le centre actif :

(1) sérine protéinases avec sérine et histidine,

(2) cystéine protéinases,

(3) aspartic protéinases avec un groupe aspartate,

(4) metalloprotéinases avec un ion Zn, Ca ou Mn
 Rôles des Inhibiteurs de protéinases :

Action sur stockage des protéines,

régulateurs de l’activité protéolitique endogène,
participation à certains processus du développement
 Inhibiteurs -amylases
-amylases catalysent hydrolyses initiales de polymères
sucrés comme l’amidon et le glycogène en
oligosaccharides plus courts
Quand amylases inhibées, nutrition impossible par
manque d’énergie disponible
Inhibiteurs amylases surtout chez céréales et nombreux
légumes comme moyen de défense
Ex AI-1, AI-2, AI-3 avec AI-1 qui inhibe activité
-amylases d’insectes
Inhibiteurs enzymes
 Lectines
Protéines présentant affinité envers mono- et
oligo-saccharaides
Spécificité de liaison au sucres avec sites multiples
de liaison
Capable d’agglutiner les cellules vu glyco-conjugés
à la surface cellulaire
Plusieurs 100aines de molécules identifiées
(champignons, plantes, virus, bactéries,
 Lectines
Ex : Agaricus bisporus et Xerocomus chrysenteron
1. Toxicité sur insectes
2. Test au niveau cellulaire :
antiprolifération, adhérence, mécanisme d’endocytose
(vers Golgi, lysosomes …)
3. Test au niveau tissus – organes
Alimentation insectes avec diètes artificielles
Immuno-histologie
Lectines
 Autres stratégies plantes OGM
• Enzymes hydrolytiques (chitinases)
• Enzymes peroxydase et poloyphénol
oxydase (oxydation et toxicité certaines
molécules, diminuton qualité protéines)
• Oxydases de lipides (lipoxygénase et
cholestérol oxydase) :
Estimation des risques
agri-environnementaux
• Risques liés à l’utilisation à grande échelle de
plantes transgéniques

Risques agronomiques Risques écologiques

Chute du rendement de la Effets négatifs sur les

culture organismes non-cibles

Baisse de l’efficacité de Perte de biodiversité

certaines techniques Dysfonctionnement des
culturales écosystèmes
 Estimation des risques
agri-environnementaux
• Risques liés à l’utilisation à grande échelle
de plantes transgéniques
Peut-on avoir l’assurance que
l’événement ne se produira pas?

Quel est l’impact que celui-ci peut

3 questions
produire sur l’environnement ?

Existe-t-il des solutions pour réduire

la probabilité d’occurrence et
l‘impact du risque envisagé?
 Estimation des risques
agri-environnementaux:
• Les flux de gènes et leur impact sur
l’environnement

– Probabilité de transfert du transgène vers un

environnement autre que celui de la culture
– Impact de l’expression du transgène sur ce
nouvel environnement
– Devenir du transgène dans son nouvel
environnement
 Estimation des risques
agri-environnementaux
• Les flux de gènes et leur impact sur
l’environnement

– Dissémination de parties de plantes (hybridation pas

nécessaire)
• par bouturage (peuplier)
• présence de semences dans la terre commercialisée avec les
plantes
• par les oiseaux (semences)
 Estimation des risques
agri-environnementaux
• Les flux de gènes et leur impact sur
l’environnement

– Dissémination du pollen (hybridation)

• par le vent (1,5 km de distance)
• par les insectes pollinisateurs (plusieurs km) 35 à 95 %
d ’hyménoptères
 Les risques agri-environnementaux:
Résistance aux insecticides

• Risques liés à l’utilisation à grande échelle de

plantes transgéniques résistantes aux insectes

– 1. Développement de souches d’insectes résistants

– 2. Effets secondaires sur les organismes non-cibles

– 3. Impact sur l’environnement

 Les risques agri-environnementaux:
Résistance aux insecticides
 1. Possibilité d’apparition de souches d’insectes résistants

600

500

400 DDT
300 Number of
resistant species
200

100

0
1908 1956 1965 1977 2000
 Les risques agri-environnementaux:
Résistance aux insecticides
• 2. Effets secondaires sur les organismes non-cibles
Organismes Prédateurs
floricoles et parasitoïdes

Phytophages Prédateurs
cibles et parasitoïdes

Phytophages Prédateurs
secondaires et parasitoïdes

Décomposeurs Prédateurs
et parasitoïdes

Schéma illustrant les différents modes d’exposition possibles entre une

culture transgénique et les organismes de différents niveaux trophiques
 Les risques agri-environnementaux:
Résistance aux insecticides
• 2. Effets secondaires sur les organismes non-cibles
A. Les phytophages
secondaires

Attention aux insectes forestiers

et à l’écosystème forestier
Exemple: peupliers: 500 espèces d’insectes phytophages en Europe dont
200 Lépidoptères, et parmi ceux-ci 5% sont nuisibles
 Les risques agri-environnementaux:
Résistance aux insecticides
• 2. Effets secondaires sur les organismes non-cibles
B. Les insectes floricoles

Attention aux insectes pollinisateurs

Sans eux, l’espèce humaine ne
survivrait que pendant 4 années
(Einstein)
 Les risques agri-environnementaux:
Résistance aux insecticides
• 2. Effets secondaires sur les organismes non-cibles

– En Europe, on étudie l ’expression dans les colzas transgéniques d ’inhibiteurs de protéases contre les coléoptères (retard de développement et mortalité larvaire)
• effets des inhibiteurs de protéases sur les abeilles observés en laboratoire
• pas d ’effets aux champs (car cela dépend du promoteur qui permet l ’expression dans le pollen et le nectar)

B. Les insectes floricoles

 Les risques agri-environnementaux:
Résistance aux insecticides
• 2. Effets secondaires sur les organismes non-cibles
C. Les organismes saprophages et la microflore

Difficilement mis en évidence

Nécessité de mise au point de tests fiables en vue
d’estimer la vitesse de dégradation des OGM

Geotrupes

Wolbachia
 Les risques agri-environnementaux:
Résistance aux insecticides
• 2. Effets secondaires sur les organismes non-cibles
D. La faune auxiliaire

Prédateurs et parasites
Diminution drastique des
proies et nourriture
Effets des OGM sur la
survie, la fécondité et la
fertilité des prédateurs
 Les risques agri-environnementaux:
Résistance aux insecticides
• 2. Effets secondaires sur les organismes non-cibles
D. La faune auxiliaire
 Les risques agri-environnementaux:
Résistance aux herbicides
• 1. Les flux de gènes et leur impact sur
l’environnement
– Introgression dans le génome d ’adventices
• possibilité d ’hybridation interspécifique en laboratoire et en
champ
• instabilité des transgènes dans les plantes hybrides en cours
des générations
 Les risques agri-environnementaux:
Résistance aux herbicides
• 1. Les flux de gènes et leur impact sur l’environnement
B. Instabilité des transgènes dans les plantes
hybrides au cours des générations
Nombre de
graines/100
fleurs
45 100 plantes
40 90 résistantes (% )
35 80
30 70
60
25
50
20
40
15 30
10 20
5 10
0 0
G0 G1 G2 G3 G4
Générations

Nombre de graines/100 fleurs

Plantes tolérantes au Basta (% )
 Les risques agri-environnementaux:
Résistance aux herbicides
• 1. Les flux de gènes et leur impact sur
l’environnement
– Le devenir des plantes transgéniques dans
l’environnement
• Dépend de l’aptitude colonisatrice propre à l’espèce
• Gain de fitness correspondant à l’expression du trangène
• La plupart des plantes cultivées: pouvoir invasif faible sauf
la chicorée, la luzerne, le ray-grass et le colza
• Les plantes adventices: potentiel de multiplication et de
compétition très important. Attention donc au croisement
avec les OGM!
 Les risques agri-environnementaux:
Résistance aux herbicides
• 1. Les flux de gènes et leur impact sur
l’environnement
– Impact des plantes modifiées sur leur nouvel
environnement
• Apparition de nouvelles adventices prolifiques
• Dysfonctionnement des écosystèmes
• Perte de la biodiversité
• Espèces végétales rares peuvent perdre leur identité,
ex.: les Beta vulgaris et Brassica oleracea
Remèdes aux risques
agri-environnementaux
• 1. Résistance au sein des populations d’insectes
ravageurs

– Remèdes:
• l ’utilisation de variétés « haute dose »
– quantité de toxine assez élevée pour tuer les hétérozygotes résistants (par
ex. maïs Bt = 99% d ’efficacité vis-à-vis de la pyrale)
• la mise en place de zone refuge
– diluer les gènes de résistance en maintenant en vie les individus sensibles
– 20% de la superficie; à coté ou au sein du champ de maïs Bt; même
période pour les semis, pas de mélange de graines
• la mise en place d ’un réseau de surveillance
• l ’utilisation de variétés exprimant deux transgènes
 Remèdes aux risques
agri-environnementaux
• 2. Effets secondaires sur les organismes non-cibles
– Remèdes:
• Utilisation de toxines à spectre d’action étroit et à faible
rémanence dans l’environnement (ex.: les protéines Cry);
• Utilisation de promoteurs spécifiques permettant de cibler
les tissus et la période durant laquelle les transgènes sont
exprimés (surtout au sein des organes floraux);
• Dispersion des cultures transgéniques dans le paysage
agricole et aménagement de zones refuges où la faune
auxiliaire pourra se développer
• Interdiction de l’usage de plantes transgéniques en milieu
forestier et dans les habitats qui sont le siège d’une forte
biodiversité
 Remèdes aux risques
agri-environnementaux
• 3. Flux des gènes et impact sur l’environnement

– Les remèdes:
• exploiter la variabilité génétique des plantes cultivées
permettant de modifier sa biologie pour limiter la
dissémination du pollen
• identifier des itinéraires techniques permettant de
limiter les croisements
 Remèdes aux risques
agri-environnementaux
• 3. Flux des gènes et impact sur l’environnement
– Les remèdes:
• utiliser du gène « Exorcist »
• étudier la place du transgène dans le génome de la
plante cultivée
 Conclusions
• Le développement durable invite à voir à long terme, alors
que suite au développement contemporain du savoir, la
gestion privée – et non publique – ne parvient plus à gérer
un tant soit peu le futur.
• Quoique les plantes transgéniques représentent une
alternative intéressante à l’utilisation des pesticides, nous
ne devons pas négliger d’autres facettes de la lutte
intégrée, comme par exemple l’aspect comportemental des
stratégies reproductives chez les insectes. Cette approche
peut mener à la conception de méthodes de lutte efficaces
par augmentation de la compatibilité sexuelle des individus
chez les insectes auxiliaires ou par la diminution de celle-ci
chez les insectes ravageurs.
 Conclusions
• Ce n’est donc pas la science qui doit être
remise en cause, mais le fait que la plus
grande partie du savoir est entre les mains de
sociétés à vocation économique. Il est temps
que la Société contrôle le savoir qui se
développe actuellement, en insistant auprès
des pouvoirs politiques pour qu’ils dégagent de
nouveaux moyens pour permettre aux
chercheurs universitaires de rester compétitifs,
ceci n’est pas une autre histoire mais une
nécessité morale face aux générations futures.