FICHE TECHNIQUE

GALERIE API 20E

MICRO-GALERIE

PRINCIPE : Le systme API BioMrieux (Appareillage et Procd dIdentification) est une version miniaturise et standardise des techniques biochimiques conventionnelles pour lidentification des bactries. Lorquune suspension bactrienne de densit convenable est rpartie dans les diffrentes alvoles qui composent la microgalerie (contenant de substrats dshydrats), les mtabolites produits durant la priode dincubation se traduisent par des changements de couleur spontans ou rvls par addition de ractifs. Elle permet lidentification dune centaine de bacilles Gram ngatif dont les Entrobactries. Elle comprend 20 tests biochimiques. TECHNIQUE : Prparation de la galerie Runir fond et couvercle dune bote dincubation et rpartir de leau dans les alvoles pour crer une atmosphre humide. Dposer strilement la galerie dans la bote dincubation Prparation de linoculum Ouvrir une ampoule de Suspension Medium (ou un tube deau distille strile) Prlever une seule colonie bien isole sur milieu glos Raliser une suspension bactrienne faible (opacit 0,5 sur lchelle Mc Farland) Inoculation de la galerie Remplissage des tubes : Remplir les tubules et les cupules des tests du type CIT Remplir les tubules des tests du type ADH et remplir la cupule avec de lhuile de paraffine, pour crer lanarobiose. Remplir uniquement les tubules des tests restants
Pipette Pasteur Cupule

Tubule

Remplir en posant la pipette contre la paroi de la cupule.

Remarque : il est important de veiller ne pas crer de bulles lors de linoculation qui pourraient fausser le rsultat. De plus lapparition de bulles aprs incubation apportera un caractre didentification supplmentaire (GAZ+) RESULTATS : Noter sur la fiche de rsultats toutes les ractions spontanes. Raliser les tests ncessitant laddition de ractifs : Test VP, TDA, IND, Nitrate rductase IDENTIFICATION : Avec le tableau didentification : comparer les ractions notes sur la fiche de rsultats avec celle du tableau : chaque cellule de ce tableau contient les pourcentages de positivit Avec le catalogue analytique : Les tests sont regroups en groupe de 3, et une valeur (1, 2 ou 4) est indique pour chacun. Additionner lintrieur de chaque groupe les nombres correspondants aux tests positifs. On obtient un nombre 7 chiffres qui sert de code didentification Avec un logiciel didentification

TABLEAU DE LECTURE DE LA GALERIE MINIATURISEE API 20E

Microtube ONPG ADH LDC ODH CIT H2S URE TDA IND VP GEL Substrat Caractre recherch Lecture directe ou indirecte (Test si ncessaire) Lecture directe Lecture directe Lecture directe Lecture directe Lecture directe Lecture indirecte Test : ajouter 1 goutte de Perchlorure de Fer Lecture indirecte Test : ajouter 1 goutte de ractif de Kovacs Lecture indirecte (Attendre 10 minutes) Test : ajouter 1 goutte de KOH et d-napthol Lecture directe Lecture directe Lecture indirecte dans la cupule GLU Test : ajouter 1 goutte de ractif de Griess Ajouter de la poudre zinc en cas de rsultat ngatif Rsultat + Rsultat Ortho-Nitro-Phnyl-Galactoside -galactosidase Arginine Lysine Ornithine Citrate Thiosulfate de sodium Ure Tryptophane Tryptophane Pyruvate de sodium Glatine emprisonnant particules de charbon des Arginine dihydrolase Lysine dcarboxylase Ornithine dcarboxylase Utilisation du citrate Production dH2S Urase Tryptophane dsaminase Production dindole Production dactone Glatinase Utilisation de substrat carbon Nitrate rductase

GLU ARA Substrat carbon NO2 N2

-/

Nitrates (NO3)

TABLEAU DE LECTURE DE LA GALERIE MINIATURISEE API 20E

Microtube ONPG ADH LDC ODH CIT H2S URE TDA IND VP GEL Substrat Caractre recherch Lecture directe ou indirecte (Test si ncessaire) Lecture directe Lecture directe Lecture directe Lecture directe Lecture directe Lecture indirecte Test : ajouter 1 goutte de Perchlorure de Fer Lecture indirecte Test : ajouter 1 goutte de ractif de Kovacs Lecture indirecte (Attendre 10 minutes) Test : ajouter 1 goutte de KOH et d-napthol Lecture directe Rsultat + Rsultat Ortho-Nitro-Phnyl-Galactoside -galactosidase Arginine Lysine Ornithine Citrate Thiosulfate de sodium Ure Tryptophane Tryptophane Pyruvate de sodium Glatine emprisonnant particules de charbon des Arginine dihydrolase Lysine dcarboxylase Ornithine dcarboxylase Utilisation du citrate Production dH2S Urase Tryptophane dsaminase Production dindole Production dactone Glatinase

GLU ARA Substrat carbon

Utilisation de substrat carbon

Lecture directe Lecture indirecte dans la cupule GLU Test : ajouter 1 goutte de ractif de Griess Ajouter de la poudre zinc en cas de rsultat ngatif

NO2 N2

-/

Nitrates (NO3)

Nitrate rductase