Centre Hospitalo-Universitaire Dr Benbadis

Constantine
Laboratoire de Toxicologie
Cours de 1e anne rsidanat 2013/2014

La toxicit aigue
Ralis et prsent par : Khaoula KOULOUGHLI
Le 19 Novembre 2013

Plan :
Introduction la toxicologie ;
Toxicit aigue ;
Conclusion ;
Bibliographie.

INTRODUCTION
A LA
TOXICOLOGIE
3

1. Historique de la toxicologie, de lart

la science :
Le mot toxicologie a t cr au XVII sicle. A une origine

grec : Toxikon : flche empoisonne.

Logos : science => La science des poisons.
=> Au dbut il sagissait de lart de confectionner des poisons.
Certains dveloppaient lart de se prmunir contre les effet

des poisons : Le roi romain Mithridate consommait

rgulirement des dcoctions contenant un mlange de 36
poisons, afin de se protger contre les attentats des ses
ennemis. Il fut emprisonn par ses ennemis et choua se
suicider par des poisons ! (1)
4

1. Historique de la toxicologie de lart la

science:
Lart sest dvelopp en une science :

Paracelse (1493-1541) le pre de la toxicologie tait le

premier reprsentant de la pense scientifique.
Il dveloppa le paradigme valable en allopathie :
seule la dose fait le poison .
Durant les annes 1850 : la dcouverte des ATB et des

anesthsiques, a donn naissance la toxicologie tel quon

la connat aujourdhui, vue les nombreux incidents
dempoisonnement par les mdicaments. (2)

Entre 1890 1900 : Suite la dcouverte des vitamines et

de la radioactivit , la toxicologie a trouv sa place pour les

tester et conclure sils taient nocifs ou bnfiques pour la
sant par des essais sur les animaux. (2)
5

2. La toxicologie moderne :
Science multidisciplinaire qui tudie les toxiques :

leur origine, leur proprits physiques, chimiques et

biologiques, leurs biotransformations, leurs
modalits et mcanismes d'action sur les systmes
vivants, leur dtection et leur quantification, les
moyens de combattre leurs actions nocives par la
mise en uvre de procds thrapeutiques
appropris et de mesures de prvention.
Lvaluation du risque reprsente un lment

important dans la protection de la sant des

individus, et un objectif particulier de la toxicologie.
6

La toxicologie a une histoire varie et

intressante. Cest peut tre une science qui
a grandit et qui a prospr par des emprunts
auprs des autres disciplines. Une science
qui a souffert de labsence dun seul but Il
en a rsult un domaine passionnant,
innovant et diversifi qui sert la science et la
communaut.
Michael A. Gallo, History and scope of Toxicology.
7

3. Domaine de la toxicologie :
Toxicologie mdico-lgale.
Toxicologie professionnelle (Industrie, Agriculture).
Hygine alimentaire (additifs et rsidus).

Hygine sociale (toxicomanie).

Ecotoxicologie: toxicologie environnementale.
Toxicologie rglementaire (limite et interdiction

demploi de substances ventuellement toxiques).

Biotoxicologie (toxicologie exprimentale,
descriptive et clinique).

4. Dfinitions:
A. Toxique :

un poison, ou toxique est toute substance qui, aprs

pntration dans lorganisme, par quelque voie que ce soit,

une dose relativement leve en une ou plusieurs fois trs
rapproches ou par petites doses longtemps rptes,
provoque, de faon passagre ou durable, des troubles dune
ou plusieurs fonctions ou des lsions, troubles pouvant aller
jusqu lannihilation complte et mme provoquer la mort
(Fabre et Truhaut).
Cette dfinition permet dj de distinguer des phnomne

de toxicit aigu ou subaigu et des effets de toxicit long

terme dite chronique. (3)

Classification des toxiques :

10

Les toxiques peuvent tre classs en fonction de plusieurs

critres :
Chimique : mtaux, hydrocarbure aromatique;
Physique ;
Biologique : mycotoxine,
Organes cibles : cardiotoxique, nphrologique
Effets biochimiques : inhibition enzymatique;
Effets sur lorganisme : cancrognes, mutagnse.

B. Toxicit et Intoxication :
Toxicit : caractre dun toxique.

On distingue trois types de toxicits : aigue, subaigu et

chronique. (3)
La toxicit dune substance peut tre influencs par
plusieurs facteurs : facteurs lis la substance, lis
lorganisme, environnementaux
Par le terme dintoxication on dsigne lintensit de la
souffrance cellulaire par action du toxique sur elle. Elle
reprsente non seulement labsorption dun toxique, mais
aussi la mise en vidence clinique dun empoisonnement.(4)

11

C. Etiologie des intoxications :

Suicide ou tentative de suicide ( par des mdicaments,

12

CO, pesticides, produits domestiques);

Empoisonnement criminel (par arsenic, cuivre, cyanure) ;
Empoisonnement accidentel (eau de javel);
Intoxication alimentaire (champignon toxique);
Intoxication professionnelle (en milieu industriel ou
agricole);
Intoxication due la pollution.

E. Forme dintoxication (4):

13

Intoxication

Dose

Dure
dexposition

Exemple

Etat final

Toxicit aigue

Une fois

24H-14jrs

Test DL50
Test de
Draize

Mort
Etat
dirritation

Toxicit
subaigu

Plusieurs
fois

< un mois

Toxicit
subchronique

Plusieurs
fois

< 10%
esprance de
vie

No observed
effect level
NOEL

Toxicit
chronique

Plusieurs
fois

>10%
esprance de
vie

Test
concernant
le pouvoir
cancrigne

Dommag
e aux
organes
/

Noplasi
es

F. Exposition et effet :
Effet :

Modification biochimique, cellulaire ou

physiologique, dcoulant de lexposition une
substance chimique (1).
Exposition :

Lexposition prcde les intoxications.

Peut avec lexpression dose dexposition,
dsigner la dose dun toxique dans le sens anglosaxon : intake (1).

14

Effet

15

Aigu

Chronique

Aigue

-Effet court terme

- Exposition court
terme
- (ex. : irritation
cutane cause par
le contact avec une
solution trs dilue
dacide sulfurique)

-Effet long terme

- Exposition court terme
- (Ex : trouble respiratoire
persistant la suite dune
courte inhalation dune
forte concentration de
chlore).

chroniqu
e

-Effet court terme

- Exposition long
terme
- (ex. :
sensibilisation
cutane lthylne
diamine la suite
dun contact pendant
plusieurs annes)

-Effet long terme

- Exposition long terme
- (ex. : cancer du foie, du
poumon, du cerveau et du
systme hmatopotique
caus par lexposition
des doses leves de
chlorure de vinyle
pendant plusieurs
annes)

En pratique, en raison de lutilisation

des mots aigu et chronique
conjointement avec exposition ou
avec intoxication, certains auteurs
recommandent den rserver lusage
pour dcrire la nature des effets
rsultants dune intoxication. (Winder
et al. 1997; Lipnial-Gawlik, 1998) (1).
16

J. Relation dose-rponse:
Seule la dose fait le poison.
Dfinition de la dose :

Dsigne la quantit absolue de toxique laquelle un

organisme est expos.
Selon le contexte il dsigne aussi la quantit absolue
dun toxique auquel un organisme est expos par unit
de masse corporelle et par unit de temps (1).

17

J. Relation dose-rponse:
Dfinition de la rponse :

Nombre dindividus ou proportion dune

population prsentant un effet donn la suite
dune exposition une substance chimique (2).

18

J. Relation dose-rponse:
La courbe dose-rponse :

La courbe entre la dose dune substance introduite

dans un organisme et la rponse quelle dtermine
se matrialise habituellement par une courbe en S
(3).
En gnral, plus la dose augmente, plus la rponse
augmente soit par sa svrit, soit par le
pourcentage des individus affects.

19

J. Relation dose-rponse:

20

J. Relation dose-rponse:

21

LA TOXICITE
AIGUE
22

I. Toxicit aigue :
Dfinition :

Dsigne les effets nocifs (aigus) rsultant de

l'exposition une seule forte dose d'un produit ou de
multiples doses sur une priode ne dpassant pas 24
heures.
cest la consquence dun blocage immdiat des
fonctions des organes vitaux.
En gnral lintoxication volue rapidement vers la
gurison ou peut aboutir la mort.

23

II. Evaluation de la toxicit aigue :

Base sur des tudes qualitative et quantitative :
1. Etudes exprimentales in vivo;
2. Etudes exprimentales in vitro;
3. Etudes pidmiologiques;
4. Etudes thoriques (par modlisation).

24

1. Etudes exprimentales in vivo :

La pluspart des tudes sur la toxicit aigue

(o la manifestation finale typique est la

mort(4)) sont programmes pour
dterminer la DL50 du toxique.

25

1. Evaluation de la toxicit aigue

(in vivo) :
A. Dtermination de la DMM :

Cest la dose minimal de substance capable de

tuer un animal par administration intraveineuse
lente.
La mort est dfinie par larrt cardiaque.
Intret :
La DMM aide lexprimentateur choisir les
doses tester pour la dtermination de la DL50.

26

Etudes exprimentales in vivo :

B. La DL50 :

Estimation statique dune dose unique de produit

suppose tuer 50% des animaux, exprime en mg de
substance/kg de poids tout en mentionnant lanimal et la
voie dadministration .
Remarques :
Dans certains cas, particulirement pour les produits

faiblement toxiques, il nest pas toujours ncessaire de

dterminer la DL50 avec prcision : des valeurs
approches suffisent (5).
Quand lexposition se fait par inhalation, la valeur retenue
est soit la concentration ltale 50 (CL50) pour une dure
dexposition dtermine.
Soit le temps ltal (TL50) pour une concentration
27
dtermine du toxique dans lair.

Dispositif exprimental pour

dtermination de la DL50 :
La substance :
Avant de procder l'essai, le laboratoire doit rassembler

28

toutes les informations disponibles sur la substance

d'essai :
Son identit ;
Sa structure chimiques;
Ses proprits physico-chimiques;
Les rsultats de tous les autres essais de toxicit in vitro
et in vivo;
Les donnes toxicologiques sur des analogues de
structure ou des mlanges semblables (6).

Dispositif exprimental pour

dtermination de la DL50 :
Slection de lespce animale :

=> Gnralement deux spces:

(variabilit dune espce une autre).
Exemple : Benzene : la CL50 est de 13 700ppm pour
une exposition de 4H pour le rat. 10 400ppm pour la
souris pour une exposition de 7H. (7)
=> Des deux sexes, jeunes et ags (diffrence de
sensibilit).
Exemple : Influence de lge : Benzne : La DL50 du
benzene par voie orale chez les rongeurs se situe aux
alentours de 5000mg/kg. Les jeunes rat sont plus
sensibles : DL50 = 3400mg/kg chez les rats ags de 14
jours.
29

Dispositif exprimental :
Voie dadministration :

- Celle de lexposition humaine:

Ladministration orale par gavage est la plus frquente.
- cutane et respiratoire sont de plus en plus utilises (non
seulement pour les produits administrs par cette voie,
mais aussi pour les substance causant des problmes de
toxicologie professionnelle).
On utilise galement une administration parentrale:
pour dterminer la vitesse et limportance de labsorption
par les voies cutanes et orales (5).
30

Dispositif exprimental :
La dose :

Pour dterminer correctement la DL50, il est

important de slectionner :
* Une dose qui tuera environ la moiti des animaux ;
* Une dose qui en tuera plus de la moiti, mais de
prfrence moins de 90% ;
* Une dose qui en tuera moins de la moiti, mais de
prfrence plus de 10%.

31

Dispositif exprimental :
Le nombre des animaux :

Lessai est paratiqu sur 5 6 lots. Tout les animaux

du mme lot reoivent la mme dose (dose unique)
(Alain Viala).
La prcision de la DL50 est amliore en
augmentant le nombre danimaux par dose et en
diminuant le rapport entre deux doses succssives.
La plupart des exprimentateurs utilisent 40 50

animaux et des rapports allant de 1,2 et 1,5 (5).

32

Dispositif exprimental :
Facteurs environnementaux :

33

Le conditionnement peut influencer la DL50 :

Il a t prouv (Balazs, 1976), que les rats vivants dans
des cages individuelles avaient une DL50 pour
lisoprotrenol (DL50=50mg/kg) beaucoup plus infrieure
celle enregistre chez les rats vivants en groupe
(800mg/kg).
La temprature peut modifier la toxicit :
La toxicit de latropine, strychnine, nicotine, est
augmente chez lanimal expos au froid.
Certains organophosphors voient leur toxicit augmente
par lhypothermie (malathion, sarin). Chez dautres la
toxicit sera rduite dans ces conditions (parathion).
Lhumidit relative pourrait augmenter la toxicit.

Dispositif exprimental :
Examens :
Aprs ladministration, les animaux sont observs

pendant 14 jours au cours desquels les examens

cliniques sont frquents (3).
Les animaux demeurs vivants la fin de lessai

sont sacrifis.
Tous les animaux (morts en cours dessai et sacrifis
en fin dessai) font lobjet dune autopsie (3).

34

Protocole exprimental :
On peut remarquer certaine variabilit des protocoles

dans la rgmentation de chaque pays :

Tableau : y Kathryn Chapman, NC3Rs; Sally Robinson,
AstraZeneca. Challenging the regulatory requirement for acute
toxicity studies in the development of new medicines. Worksho
report, May 2007.

35

EEC

USA

Japan

Espce

2 ( 1 non
rongeur)

2 (1 non
rongeur)

Voie
dadministration

Jours
dobservation

7-14

14

14

Mthodes de dtermination
de la DL50 :
1. Mthode de Trvan ;
2. Mthode Bliss ;
3. Mthode Lietchfield et Wilcoxon ;
4. Mthode Miller et Tainter;
5. Mthode Kraber et Berhens;
6. Autre mthode.

36

1. Mthode de Trvan (1927) :

Principe :

Administration de doses croissantes de la substance

tester chez tout les animaux du lot tout en notant le
pourcentage de mortalit.
=> Obtension dune courbe sgmoide.

Courbe de Trevan :
% de mortali = f(dose)
37

 Courbe de Trvan :

38

Inconvnients de la mthode de
Trvan :
Elle prsente deux inconvenients :
1. Une grande partie de la courbe nest pas

exploitable (DL05 et DL95).

2. Le nombre danimaux utiliss est trs elev.

Selon Trvan un nombre de 30 animaux constitue

un minimum.

39

2. Mthode de Bliss (1938) :

Principe :

Linarisation de la courbe de Trvan.

=> Les pourcentages de mortalit sont remplacs
par les probits .
=> La dose est remplac par le logarythme dcimal
de la dose.

Bliss : Probits = f(LogDose)

40

Mthode de Bliss :
Probits

Log (dl50)

41

Log dose

Les units probits :

Se sont des cart-types rguliers au tour de la

moyenne. La moyenne est fixe zro.

Pour viter les valeurs ngatives les units probits
sont obtenues en ajoutant 5, de sorte que le
systme stablit ainsi (5) :

42

Ecarts

probits

% de
rponse

-3
-2
-1
0
1
2
3

2
3
4
5
6
7
8

0.1
2.3
15.9
50.0
84.1
97.7
99.9

Avantages et inconvnients de la
mthode de Bliss :
Avantage :

Suffisemment prcise et peut tre utilise

avantageusement en premire analyse.

Inconvnient :
Le trac de la droite de rgression entraine des
erreurs parfois notables (il est ncessaire de
dfinir la position de cette droite par des calculs
laborieux).

43

3. La mthode Litchfeild
et Wilcoxon (1943):
Principe :
Tracer le graphique : probit en fonction du Log de la

concentration. Une mthode semi-graphique.

Determine : DL16, DL50, DL84.
Le calcul de la pente du graphique (S) :
permet de dfinir lintervalle de confiance. Ensuite on
dtermine le facteur de correction (f DL50).

44

3. La mthode Litchfeild
et Wilcoxon (1943):

45

3. Mthode de Litchfeild et
Wilcoxon :
Calculs :

La pente (S) :
Facteur de correction fDL50 :
N : est le nombre danimaux qui ont t utilis pour obtenir les points situs entre

DL16 - DL84.

Limite de confiance de la DL50 :

u: DL50 de rfrence
46

4. Mthode de Miller
et Tainter (1944):
Principe :
Cest une mthode graphique.

Sur un papier logarythme probit:

% mortalit (probit) = f(LogDose).
Avec correction des valeurs 100% et 00% l o le

probit tend vers linfini.

Cest une mthode : pratique, simple et rapide.
47

4. Miller et tainter correction

des 0 et 100% :
Correction du 0% :
Y(0) = 50/N.
Correction du 100% :
Y(100) = (100N-50)/N.

48

N : cest le nombre des animaux des lots qui ont donn les pourcentage de
mortalit 0 et 100%.

4. Miller et Tainter calculs :

Calcul de lcart type de la DL50 :

S = (dl84% - dl16%)/2
Lcart la moyenne :

E = 2S/ 2N
N : nombre totale danimaux dans les groupes qui ont donn le
pourcentage de mortalit [7,2 , 93%].

Lintervalle de confiance :

dl50 ] u E, u+ E [
U : DL50 de rfrence.

49

5. Mthode de Kraber et Behens :

Principe :
Cest une mthode arythmtique.
Base sur lapproximation par calcul rapproch de la
DL50.

DL50= (DL100-AB) N
A=la diffrence entre 2 doses successives ;
B=moyenne de morts entre 2 doses successives ;
N=nombre moyen danimaux par lot.
=> Cette mthode manque de prcision.
50

6. Exemple dautres Mthodes :

Lorcke (1983) (8):
Offre la possibilit d'obtenir avec 13 animaux

exprimentaux des informations adquates sur la

toxicit aigu et sur la DL50.
Elle se ralise en deux phases (9) :

Phase I : =>Trois groupes de trois souris.

=>Chaque groupe reois une dose.
Observation pendant 24H pour mortalit et modification
du comportament.
Phase II : 3 4 groupes dune souris
Administration de doses en fonction des rsultats de la
premire phase.
51

6. Mthode de Lorcke (1983):

La moyenne gomtrique entre la dose minimale qui

tue les souris et la dose maximale qui ne tue pas les

souris reprsente la DL50.
Avantage : sacrifie peu danimaux (13 animaux au

maximum).
Inconvnients : lexactitude, la reproductibilit, la

fiabilit sont remises en questions.

52

Comparaison des mthodes

lvaluation de la DL50 :
Tableau : Deora Paramveer S., et al, Effective alternative

methods of LD50 help to save number of experimental animals.

J. Chem. Pharm. Res., 2010, 2(6):450-453 (10) :

53

Kraber

Miller et
Tainter

Lorcke

Nombre de
Rongeurs

important

Important

Appropri

Dpenses

Eleve

Eleve

Moyenne

Exactitude des
rsultats

Inexacte

Inexacte

Douteuse

Exemple de dtermination de la DL50 pour le

sulfate de Zinc par la mthode de Karber :

5 animaux dans chaque groupe : des

souris ages de 10 12 semaines.

54

55

Exemple de DL50 de quelques

toxiques chez le rat par voie orale:
Vitamine C : 11 900 mg/kg;
Bisphnol A : 3250 mg/kg;
sel de table : 3 000 mg/kg;
THC : 1270 mg/kg;
cafine : 192 mg/kg;

Digitaline : de 5 10 mg/kg;
Strychnine : 1 mg/kg;
cyanure : de 0,5 3,0 mg/kg;

dioxine : 0,02 mg/kg;

toxine botulique : 1 ng/kg.
56

Intret de la DL50 :
Classification des substances selon leurs

toxicit, chelle de Glossin Smith et Hodge :

57

Dose orale
probablement
mortelle (humain)

Indice ou classe de
toxicit

Moins de 5mg/kg

Ultra-toxique

5-50 mg/kg

Extrmement toxique

50-500 mg/kg

Trs toxique

0.5-5g/kg

Moyennement toxique

5-15g/kg

Lgrement toxique

Plus de 15g/kg

Non toxique

Intret de la DL50 :
La dtermination de la DL50 est une opportunit

58

pour derterminer leffet toxique spcifique au

produit, lorgane cible, et fournis des donnes
pour dterminer les doses utilises dans les
tudes long terme;
Programmation des essais thrapeutiques chez
lhomme ;
Evaluation du danger en cas de surdosage;
Contrle de qualit ;
Mdicaments: calcul d'un index
thrapeutique .

Intret de la DL50 :
Pour evaluer lutilit des donnes fournies par

les essais de toxicit aigue, un groupe dexperts

coordonn par NC3R comprenant 15 socits
pharmaceutiques et des organisations de
recherche a t tablit.
Des questionnaires ont t remplis par les

membres du groupe de travail afin de dterminer

les raisons de la conduite tudes de toxicit
aigu.
59

Intret
de
la
DL50
:
y Kathryn Chapman, NC3Rs; Sally Robinson, AstraZeneca. Challenging the

regulatory requirement for acute toxicity studies in the development of new

medicines. Worksho report, May 2007. (11)

60

Limites de la DL50 :
Ne concerne que la mortalit et ne donne aucune

information sur les mcanismes et la nature des

lesions ;
Rsultats obtenus ne prjugent pas forcement de ce

qui pourrait tre observer aprs administration chez

lhomme (diffrence de ractivit biologique entre
lhomme et lanimal) ;
Apprciation grossire et prliminaire, influence par

plusieurs facteurs (espce animale, sexe, ge)

61

Limite de la DL50:
La DL50 est critique sur le plan thique vu la

souffrance et le nombre de mortalit importante

quelle engendre aux animaux de laboratoire.
Le FRAME (Fonds pour remplacement des

animaux en exprimentation mdicale) estime

que la DL50 est un test inutil, cruel et
scientifiquement invalide (www.frame.org.uk).

62

C. Mthodes alternatives aux

mthodes conventionnelles:
LOCDE a fait de la DL50 un test officiel (ligne

directrice pour les essais 401) en 1981.

En 1987, elle a rduit 20 au lieu de 30 le
nombre minimal d'animaux que doit contenir
l'chantillon test.
En 2001, elle a approuv trois nouvelles
mthodes, destines remplacer la DL50 et
occasionner une moindre souffrance animale.
La ligne directrice 401 a finalement t abroge
par l'OCDE, le 17 dcembre 2002.
63

C. Mthodes alternatives (6) :

OCDE dcrit trois tests alternatifs :
1) Mthode de la dose prdtermine (ligne

directrice 420, 2001).

2) Mthode de classe de toxicit aigue (___ 423,
2001).
3) Mthode ajustement de doses (____ 425,
2008).

64

C. Mthodes alternatives
Espce animale et conditions de lessai :

Le rat est lespce prfr.

Femelles nullipares, non gravide, age de 8 12

65

semaines.
T = 22 C + ou 3C.
HR = 50 60%.
Un clairage artificiel est utilis :12 heures de lumire
et 12 heures d'obscurit.
Le nombre d'animaux par cage ne doit pas faire
obstacle une observation prcise de chaque animal.

Mthodes alternatives:
1) Mthode de la dose prdtermine :
La mort nest pas leffet observ.
Mthode squentielle, s'appuit sur l'observation de

signes manifestes de toxicit apparaissant aprs

traitement une dose prdtermine.
La dose initiale est choisie sur la base dune tude

d'orientation.
Les autres groupes danimaux reoivent des doses
plus fortes ou moins fortes en fonction de labsence
ou de la prsence deffets toxiques.
66

Mthodes alternatives /dose

prdtermine :
Avantages :

Reproductible;
Utilise moins danimaux;
Occasionnant moins de souffrance, que les

mthodes traditionnelles.
Permet de classer des substances par ordre de
toxicit.
Inconvnients:
Ne permet pas de dfinir une valeur prcise de la
DL50.
67

Mthodes alternatives :
2) mthodes par classe de toxicit aigue :

Ce test se ralise de faon squentielle.

Lots de 3 animaux par substance.
Administration dune dose dorientation : son effet

dterminera le choix de la dose associe la

posologie ultrieure.
Si mortalit < 2 animaux : la dose X 10 ltape
suivante;
Si mortalit >2 animaux la dose est rduite.
Avantage : reproductible, utilise peu danimaux (de 7
8 animaux suffisent), permet de classer les
substances par ordre de toxicit.
68

Mthodes alternatives :
3) Mthode dajustement de dose :
Il existe plusieurs variantes du mode opratoire de

la mthode de lajustement des doses permettant

d'estimer la DL50.
Celui de lOCDE est bas sur lutilisation dun

minimum d'animaux. Et applique une progression

de doses uniques sur les animaux, un par un, des
intervalles d'au moins 48 heures.
69

Mthodes alternatives/ Ajustement

de doses :
La mthode permet d'estimer la DL50 avec un

intervalle de confiance.
Ses rsultats autorisent le classement qualitatif et
quantitatif de la substance dans le Systme gnral
harmonis (SGH) de classification des produits
chimiques entranant une toxicit aigu.
Remarque :
Cette mthode s'applique le plus facilement aux

substances entranant la mort en l'espace d'un ou deux

jours.
Elle se prte mal aux cas o la mort est suppose
survenir dans un dlai nettement plus long (au moins
70
cinq jours).

D. Test de Draize :
Test dvaluation de la toxicit aigue par voie locale.

Son but est de dterminer les produits irritants par

leur application sur la peau ou la muqueuse
conjonctivale de lanimal.
Peau :

71

Epiderme de lapin intact et scarifi maintenu par un

bandage adhsif. La lecture seffectue aprs 2472H.
Des tables dvaluation permettent de dterminer
les scores, chaque score correspond une intensit
de la raction.

D. Test de Draize :
Lindex dirritation correspond la somme des

scores obtenus pour : la corne, liris, les

conjonctives palpbrales et bulbaires.
Le test de Draize est trs ciriqu sur le plan thique.

72

E. Toxicit aigue par inhalation :

Concerne les gaz, vapeur, darosol ou une

forme mixte:
Animal entier est plac dans une chambre ou
nez seul .
Exposition durant un temps dtermin (4H
selon OCDE) concentration prdfinie.

73

Problme de transposition des

rsultats des tudes in vivo :
Les diffrences dans le systme ADME entre

lhomme et lanimal ;
Diffrences anatomiques ;
Les suceptibilits individuelles qui conduisent
des rponses diffrentes.
Certains effets ne peuvent tre mis en vidence
chez lanimal par exp: Cphales, vertiges,
nauses.

74

Relation de transposition :
Concentration Equivalente en Toxicit Humaine

CETH:
CETH=DL50 /(Vd*1000)

(mg/l)

Vd : volume de distribution du toxique dans

lorganisme.
Lextrapolation reste approximative car le sujet

idal pour des tudes relatives lhomme cest

lhomme lui-mme.

75

B. Etudes exprimentales in vitro :

les tests de culture de cellules humaines :
Sont plus prcis que les DL50 chez les animaux.
Les systmes de culture cellulaire peuvent tre amliors

mais ce nest pas le cas de lexprimentation animal.

Cellules humaines donc viter les diffrences despces.

Elles peuvent tre prleves partir dun tissu susceptible

dtre affect par une substance particulire.

Elles permettent dtudier le mcanisme de toxicit

molculaire.
Elles permettent dviter de faire souffrir et de tuer des
animaux.
76

Les tests alternatifs aux tests de

Draize:
1. Eyetex:
Mesure lirritation oculaire par une protine vgtale

extraite du pois sabre.

Comme la corne ce gel protinique clair devient vitreux
lorsquil est en contact avec une substance irritante.
Avantage:
Sur animal on doit estimer quelle partie de lil du lapin
est rouge et gonfle pas trs prcis.
Avec le test Eyetex, le degr dopacit (dgts) peut
tre mesur par un spectrophotomtre bien plus fiable
que le test de DRAIZE.
77

Tests alternatifs au test de Draize/

2. Epiderme humain reconstitu :
Couches de peau humaine cultives en laboratoire

pour les tests dirritation cutane. Commercialiss

sous les noms de Skin Squared ou Episkin .
Evaluation:
Examiner les cellules au microscope
=> observer les dgts au niveau des membranes
(extraction des enzymes)
=> dterminer une inflammation ( libration
dinterleukine) .

Avantage:
Mesure du rsultat avec prcision. (dans les tudes
animales on estime les dgts en observant la
rougeur ou lenflure).
78

Tests alternatifs au test de Draize/

3. Test de fixation du rouge :

79

Les cellules normales absorbent et retiennent

le rouge neutre.

Si la membrane cellulaire ou les lysosomes

sont endommags par une substance chimique
irritante, la teinture schappe par les
membranes permables.

Un spectrophotomtre mesure la quantit de

teinture chappe.

Tests alternatifs au test de Draize/

4. Les tudes humaines :
En cosmtologie:
Utilisation de volontaires humains pour tester les
nouvelles formulations.
Cest le test le plus fiable.
Grce un patch. On place les substances sur
des petites zones en haut du dos (2 jours).

80

C. Etude pidmiologiques :
Lpidmiologie est ltude de lvolution des

maladies ou les dcs au sein des populations.

Avantages:
Conditions d'exposition ralistes;
Effets mesurs chez l'homme.
Inconvnients:

Essais coteux, et de longue dure;

tudes rtrospectives;
Effets difficiles quantifier.
81

D. Modlisation informatique :
Les systmes informatiques professionnels

prvoient la toxicit de nouvelles substances

partir dune banque de donnes de molcules
dont le profil toxicologique est dj dtermin.
Ces systmes se basent sur la relation structure
activit.

82

CONCLUSION :
Les tudes exprimentales in vivo reste la

mthode la plus utilise, malgr :

_ le problme thique,
_ le problme de transposition.
Les mthodes informatiques et de cultures

cellulaires peuvent tre plus largement pratiqus

en raison de leur simplicit et leur fiabilit.

83

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