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I-PRINCIPAUX CARACTÈRES
BACTÉRIOLOGIQUES

ANTIBIOGRAMME 9
9
Cocci à Gram positif
Aéro anaérobie facultatif, non
DE STAPHYLOCOCCUS
exigeant
E.D. coloration de Gram
9 Catalase +,, oxydase –,,
AUREUS 9 Coagulase, dégradation du
mannitol, novobiocine.
9 Milieux sélectifs: Chapman,
Pr KOUASSI M BENGUE A Baird Parker

Culture sur milieu solide 4

I-POUVOIR PATHOGÈNE -
OBJECTIFS PRÉLÈVEMENTS
| A la fin de cet exposé, l’ apprenant sera capable 9 Infections
de réaliser et d’ interpreter les résultats d’ un communautaires et | Pus divers
antibiogramme de S.aureus nosocomiales | Hémoculture
9 Infections cutanéo- | Prélèvements nasaux
muqueuses (folliculite, | Prélèvements cutanés
f
furonculose,
l anthrax)
h )
| Urines
9 Septicémies
| LCR
9 Intoxications
| Aliments
alimentaires
9 Infections urinaires

2 5

DEROULEMENT I-HISTORIQUE DES RESISTANCES

| 194…: apparition des premières souches
| I-GENERALITES de S.aureus résistantes à la pénicilline
| 196…: apparition des souches résistantes
| II-TECHNIQUES DE L’ ANTIBIOGRAMME à la méthicilline
| 199… : Souches de sensibilité
| III-INTERPRETATIONS intermédiaire à la vancomycine
| SARM et résistances associées aux
aminosides, macrolides, fluoroquinolones.
| 200… :Plus récemment caractérisation de
souches de SARM, virulentes,
responsables d’infections
3 communautaires. 6

1
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II-PHÉNOTYPES DE RÉSISTANCE AUX

II-ANTIBIOTIQUES À TESTER BÊTALACTAMINES
Pénicilline G ATB + inhibiteur
Pénicilline A de Pénicilline M Céphalosporines
| Bêtalactamines: Autres: Mécanisme
|
Carbox/ Uréido bêtalactamase Carbapénèmes
Pénicilline G
y Ofloxacine
y
y Oxacilline 5µg
y Acide fusidique Phénotype
| Aminosides:
Kanamycine y Chloramphénicol
S S S S
y
Amikacine
sauvage
y Tétracyclines/Minocyclines
y
y Gentamicine
| Macrolides Lincosamines- y Cotrimoxazole Pénicillinase R S S S
Streptogramines (MLS) y Fosfomycine (rare)
•

y (
Erythromycine au milieu pour Modification R R R R
détecter R inductible au MLSb) de PLP2a
| Cefoxitine: pour rechercher la
y Lincomycine résistance à l’oxacilline gène mecA
(cible)
y Pristinamycine | Novobiocine: diagnostic
| Glycopeptides (Vancomycine 30µg) BORSA
| Composé vibriostatique O129: Pase hyperproduite R R R S
| Rifampicine 5µg diagnostic Souches borderline
MODSA
7
Modif. PLP (non 2a) S S r S
Absence de Pase

10

II-TEST DE SENSIBILITÉ AUX

ANTIBIOTIQUES
(TECHNIQUE STANDARDISÉE
Antibiogramme ppt dit
| Milieu: Mueller Hinton
à 30°c ou hypersalé (2-4%)
à 37°c
| Inoculum: 0,5 Mc
Farland ( dilution 1/10
d 05 MC)
du
Disques d’antibiotiques
|
(cf liste)
| Incubation : 24hà 48h si
croissance faible (oxacilline)
| Interprétation: valeurs
critiques
| Contrôle de qualité:
S.aureus ATCC 25923
– NORMES NCCLS) ATTENTION:
Tests complémentaires | PLP = enzymes de synthèse constituants paroi,4 PLP
• Screening test à chez S.aureus,
l’oxacilline si meti R ↔ ajout PLP2a à faible affinité pour B
• Recherche de la PLP2a lactamines
• Détermination de la CMI
• Recherche de la
Meti-R par modification PLP2a peut être homogène ou
pénicillinase: en cas de |
problème d’interprétation à héterogène ( sous-population dans zone inhibition)
l’ATBgramme
• Recherche de la résistance
| Meti-R Î répond pour toutes les b-lactamines
aux glycopeptides.
8 11

ATTENTION
| Detection avec un disque de Peni G:

-Absence de Pénicillinase si diamètre>30mm , et

STAPHYLOCOQUES la bordure de la zone d inhibition est floue (zone
ET BÊTALACTAMINES fantôme)
-Presence de Pénicillinase si bordure nette avec
colonies de grande taille en bordure ,quelque soit
diamètre d’ inhibition (squater)
9

12

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RECHERCHE DE LA MÉTHICILLINO-RÉSISTANCE

Technique Contrôle de Observation

qualité
Test à la cefoxitine -Antibiogramme S.aureus ATCC 25923 Normes NCCLS:
(30µg) -MH : R si ≤ 19mm
-0,5 Mc Farland CASFM R si ≤ 25mm

Screening test -MH 4% NaCl

-Oxacilline à 6µg/ml
S.aureus ATCC 29213
S.aureus ATCC 43300
Culture= résistant II-STAPHYLOCOQUES
MRSA
-0
0,5
5 Mc Farland S aureus ATCC 43866
S.aureus ET MACROLIDES
-Ensemencement / (Témoins)
spot

Recherche de la -Agglutination Contrôle selon Kit Technique rapide,

recommandée en cas de
PLP2a diagnostic d’urgence et ou
d’infection grave. (témoin)
CMI à l’oxacilline -MH 2% NaCl S.aureus ATCC 29213 Technique de référence 16
-0,5 Mc Farland Obligatoire pour la
confirmation des SCN MetiR.

Recherche du gène PCR Selon technique Très sensible, rapide. Pas

13
toujours une expression
mec A phénotypique

RECHERCHE DES MRSA PHÉNOTYPES DE RÉSISTANCE AUX MACROLIDES

SCREENING TEST
Mécanisme Phénotype Erythro Linco Clinda SA Pristina
Azithromycine
(SB)
Phénotype Sensible S S S S S
sauvage
Souche à tester
Modification MLSb inductible R S S S S
de la cible MLSb constitutive R R R S S
S.aureus ATCC 29213 S.aureus ATCC 43866
Inactivation L S R s S S
enzymatique LSa S s/R S R ?
Témoin -
S.aureus ATCC 43300 Sa S S S S ?
Screening test
(R)
Efflux LSa S S/I/R S/I/R R S/R
14 E R S S S S17

S.AUREUS MLSB
RECHERCHE DES MRSA INDUCTIBLE
RECHERCHE DE LA PLP2A

Antagonisme
(E-linco)

Souche MRSA + Souche MRSA - 15 18

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S.AUREUS MLSB RÈGLES GÉNÉRALES D’INTERPRÉTATION DE

CONSTITUTIVE
L’ANTIBIOGRAMME

ANTIBIOTIQUES OBSERVATIONS

Bêtalactamines:
Pénicilline G (rare) Réponse valable pour: pénicilline A, carboxy et uréido-pénicilline
Oxacilline Résistance croisée à toutes les bêtalactamines
Macrolides:
Ery et linco Erythromycine Réponse valable pour l’azithromycine
contact Clindamycine Réponse valable pour la lincomycine *
Pristinamycine Réponse valable pour les synergistines
Aminosides:
Amikacine Résistance d’expression faible in vitro, tenir compte du diamètre de la
kanamycine
Gentamicine+++ Résistance croisée à tous les aminosides utilisés en thérapeutique
Glycopeptides:
Vancomycine Tout diamètre <17mm est une indication à la CMI
19 22
*: Si phénotype L, résistance à la Lincomycine avec diminution de l’activité de la Clindamycine.

RÉCAPITULATIF

Mécanismes de résistance (3)

Méthodes de détection au laboratoire

STAPHYLOCOQUES
ET AMINOSIDES b og a e minimum
Antibiogramme u (5)

Antibiogramme complémentaire (3)

Lecture interprétative
20
Meti R Î
Genta RÎ
Vanco RÎ
23

PHÉNOTYPES DE RÉSISTANCE AUX

AMINOSIDES

Kanamycine
Phenotype Mécanisme Tobramycine Gentamicine
Amikacine
Inactivvation enzymatique

Sauvage S S S

K R S S

KT R R S

KTG R R R Je vous remercie

21 24