Université Saad Dahlab

Faculté de Médecine, Département de Pharmacie

Laboratoire de Chimie Analytique

Chromatographie en phase gazeuse

Cour pour les étudiants en 3eme année de pharmacie

Fait par Dr F.BELAIDI

I-Introduction :

La Chromatographie en Phase Gazeuse (CPG) fut inventée en 1952.

Son grand essor est lié à l’invention des colonnes capillaires en 1957 par M.J.E.GOLAY.
Le développement de ces colonnes ainsi que le développement des systèmes d’injection et de
détection sont à l’origine de l’étendu d’application de cette méthode d’analyse.

II-Principe :

Technique de séparation applicable aux composés gazeux ou susceptibles d’être volatilisés par
élévation de la température. Limitée aux composés thermostables et suffisamment volatils
(MM<300).
Phase mobile  gazeuse (gaz vecteur).
Phase stationnaire:
-Des grains (colonnes remplies)
-Un film déposé sur la paroi interne de la colonne capillaire ou semi capillaire.
Liquide (mécanisme de partage)  Chromato Gaz/Liquide.
Solide (mécanisme d’adsorption)  Chromato Gaz/Solide.

III-Principales grandeurs :

 Chromatogramme :

 Grandeurs de rétention :
 Nombre de plateaux théoriques :
  Coefficient de sélectivité :

IV-Appareillage :

 Un chromatographe est constitué de:

 Un four
 Un système d’injection
 Une colonne (remplie ou capillaire)
 Un système de détection
 Alimentation en gaz vecteur
 Enceinte thermostatée :

Une enceinte à température contrôlée à bain d’air pourvue de:

-Résistante chauffante .
-Système de ventilation et de brassage.
-Alimentation cryogénique.
-Couple thermoélectrique (régulation de la T° à 0.2°C près).
On peut soit:
- Maintenir la température constante (régime isotherme).
- Faire varier la température.

Systéme d’injection :

Rôle de vaporisation et de transfert de l’échantillon vers la colonne.

-Température de l’injecteur > Température de la colonne.
-Vaporisation instantanée de l’échantillon.

 Injecteurs pour colonnes à remplissage :

- Vannes d’injection
- Chambres d’injection pour liquides ou solutions

 Injecteurs pour colonnes capillaires

- Système à division de flux
- Système sans division
- Injection dans la colonne

1-INJECTEURS POUR COLONNES A REMPLISSAGE :

- Echantillon introduit par l’intermédiaire d’une microseringue à travers une pastille auto-
obturante appelée septum.
- Solutés vaporisés entrainés à travers un tube en verre appelé liner (ou insert) par le gaz
vecteur jusqu’à la tête de la colonne.
2-INJECTEURS POUR COLONNES CAPILLAIRES

 Système à division de flux (Splitter)

Échantillon vaporisé et dilué par le gaz porteur puis le mélange est divisé en deux parties.

Avantage: Injecter de petites quantités concentrées sans dilution préalable.

Inconvénients: risque de ségrégation.

 Système sans division (Split-splitless)

Le mélange n’est pas divisé en deux parties mais reste quelques secondes dans le liner.
95% dans la colonne et 5% est évacué.

Application: Echantillons très dilués.

Avantage: Pas de ségrégation de l’échantillon.
Inconvénient: Transfert plus long vers la colonne.
Elargissement des premiers pics.

 Injection on-column

Pas d’étape de vaporisation; injection à froid du mélange gaz-échantillon dans la colonne.

Avantages:
- injecter l’échantillon sous forme liquide
Volume d’injection plus précis.
- Température d’injection = température de la colonne.

Inconvénient:
Accumulation de composés non volatils dans la colonne.
 ESPACE DE TETE STATIQUE :

Phase gazeuse au-dessus d’un échantillon contenu dans un vial.

- Vial scellé contenant: échantillon (6-20ml) + Gaz (air ou gaz inerte).
- Placé dans l’enceinte thermostatée.
- Analyte en équilibre entre gaz/échantillon.
- Prélèvement d’un aliquote de gaz et injection dans le CPG avec seringue à gaz.

ESPACE DE TETE DYNAMIQUE : PURGE AND TRAP

Substances volatils en solution, entrainées vers une colonne-piège maintenue à basse

température, où elles sont adsorbées.
Désorption des substances retenues vers le GV par chauffage rapide de la colonne-piège
 Système de détection :

-Classification :

Gaz vecteur :

Très pur et inerte vis-à-vis de la phase stationnaire et du soluté.

He H2 N2 Ar
Alimentation en gaz vecteur par des générateurs ou des bouteilles pressurisées.
Eviter H2O et O2 pour les colonne polaire et O2 pour les ECD.
Pas d’influence sur la rétention du soluté ou la sélectivité, seul le débit joue un rôle..
Le choix dépond de:
*La nature du détecteur
*Dynamique des fluides :
- La viscosité.
- La diffusion.
- La vitesse du gaz dans la colonne.

Colonnes :

1-Classification des colonnes :

2-Phase stationnaire :

Les plus utilisées: Liquide peu volatil

Réparti en film mince sur la paroi interne (colonne capillaire)
Réparti sur un support particulaire (colonnes remplies)
Caractéristiques :
- Inertie chimique
- Solubilité dans les solvants organiques (fabrication)
- Bonne qualité de recouvrement et de mouillabilité
- Grande résistance à la température:

T°min → cristallisation
T°max continue opérationnelle → 72h de résistance sans altération
T°max → volatilisation ou décomposition (bleeding*)
V- Derivatisation

Application:
- Composés non ou peu volatils (produits ionisés);
- Composés thermolabiles (stéroïdes);
- Composés polaires (sucres, acides, dérivés OH).
R éactifs utilisés :

V-Applications :

- Alcoolémies
- Analyse de triglycérides
- Analyse d’hydrocarbures
- Analyse de pesticides organophosphorés
- Dosage et identification des constituants des huiles essentielles
- Analyse de solvants résiduels dans les produits pharmaceutiques …………