TECHNIQUE DE CHROMATOGRAPHIE

Rapport des travaux pratiques

Préparé par : Encadré par :

- AZRIOUIL HALIMA Mr. EL KAOUA
-AGAOU ZINEB
- ABDELILAH AIT BENAKKOUCH

Licence biotechnologie des plantes

2021/2022

Faculté des sciences et technique Marrakech

112 Bd Abdelkrim Al Khattabi, Marrakech 40000

 I. INTRODUCTION
La chromatographie est une technique de séparation parmi les techniques les plus utilisé dans
les différent domaines (physique, chimique, biologique.......) .

C'est une méthode de séparation des différents substances présentes dans un mélange
(échantillon en phase homogène liquide ou gazeux) dans lequel on utilise une appareil quand
nomme le chromatographe qui composé principalement d'un four, système d'injection, une
colonne, système de détection, un système de détendeur-régulateur.

On a plusieurs types de chromatographie , on cite parmi eux :

 chromatographie sur couche mince.

 chromatographie en phase liquide.
 chromatographie en phase gazeux
 chromatographie en phase liquide a haute performance ....

Ils sont basés sur plusieurs types d'interaction et de support.

But de TP :

L’objectif de ce TP est de permettre aux étudiants de bien maîtrisé l'utilisation de cette technique
notamment l'appareil chromatographe pour que l'étudiant seront capable de manipuler
facilement et aussi savoir les différents principes qui permet d'obtenir des chromatogrammes
corrects.

Or, cette technique nous a fournit deux type d’analyse :

 Analyse qualitative
 Analyse quantitative

II. ANALYSE QUALITATIVE

1. Etude des grandeurs de rétention d'un mélange :

La méthode la plus simple pour l'identification d'un composé en GPC consiste à utiliser des
échantillons témoins dont la présence dans le mélange à analyser est suspecté et comparer les
temps de rétention a ceux des constituants de ce mélange

2. Protocole expérimentale :

Analyse se fera sur une colonne polaire

• Débit de gaz vecteur : 20ml/mn

• Débit du gaz vecteur : 20ml/mn

• Volume injecté : 1 ųl
a-effectuer un chromatogramme des alcools suivants pour une température de la colonne de 70
et 130°C ( pour l’étude de l’effet de température sur les résultats obtenus) .

 Méthanol
 Ethanol
 Isopropanol
 Butanol

b-effectuer le chromatogramme du mélange inconnu X à 70°C et une autre fois avec une
température de 130°C (pour l’étude de l’effet de température sur les résultats).

3. Résultats et interprétation :

Les chromatographes des alcools : T= 70 °C

 Le méthanol :

Temps de rétention : 1,12 min

 L’éthanol :

Temps de rétention : 1,25 min

  Le butanol :

Temps de rétention : 2,9 min

 L’isopropanol :

Temps de rétention : 1,20 min

Le chromatographe de mélange inconnu : T= 70°C

Temps de rétention :

Premier pic : 1.20 min

Deuxième pic : 2.90 min

Le chromatographe de mélange inconnu : T= 130 °C

Temps de rétention :

Premier pic : 0,80

Deuxième pic : 1,1

Interprétation des résultats :

 Pour le mélange inconnu, on a un chromatogramme avec deux pics le première montre un

temps de rétention égale 1.20 min et l'autre de 2.90 min Donc on compare avec les
solutions connues est en trouve que le pic 1 c'est l'isopropanol et le 2éme correspond au
butanol.
 L'effet de température sur le temps de rétention :

Dans le chromatogramme en 130°C on observe une diminution de temps de rétention chez le

butanol de 2.2 à 1.1 min.

Chez l'isopropanol de 1.20 a 0.80 min car la température augmente la phase gazeuse qui devient
très volaté et par conséquence il arrive rapidement au détecteur d’où la diminution de temps de
rétention.

Donc, plus qu’on augmente la température plus que le temps de rétention de temps diminue.

III. ANALYSE QUANTITATIVE : du titre d’une solution par

la méthode de l’Etalon Interne.
1. Principe :
On introduit une quantité connue d'un corps pur E dans un volume choisi de solution contenant
le constituant à doser. Le dosage se fait par rapport à cet étalon interne ajouté, en utilisant une
courbe d'étalonnage précédemment construite à traves des volumes connues et des surfaces
connues.

2. Protocole expérimentale :
 Dosage :

Soit Va le volume de A pur contenu dans une prise d'essai, de volume V donne de la solution à
doser % A en volume = Va/V x 100 A ce volume V de solution on ajoute Ve cm3 d'étalon interne E
(pur). Ce mélange est alors chromatographie et le rapport des surfaces SA/SE = f (Va /Ve), or tire
Va/Ve = z

D’où % A en volume dans la solution = z x Ve/V x 100.

 Titrage d'une solution de méthanol dans l'acétone :

L'étalon interne doit être tel que son temps de rétention soit voisin de celui du benzène mais
suffisamment différent. Toutefois, pour que son pic chromatographique n'interfère pas avec celui
du produit à doser, nous utiliserons l'éthanol. On dispose de 5 solutions étalons dont des rapports
Va/Ve sont connus.

 Dosage du méthanol :

On injecte 1 ul de la solution inconnue. Cette solution a été préparé en mélangeant 10 cm3 de la

solution contenant A et 0.5 cm3 d'étalon E (elle est prête à l'emploi)et on effectue le
chromatogramme de chaque solution étalon.

3. Résultats et interprétation :

Les chromatographes de la gamme étalon a préparé :

Pour Va/Ve = 0,5 Pour Va /Ve =1

Pour Va/Ve = 2 Pour Va/Ve =4

Le chromatographe de mélange où Va/Ve inconnue :

 Calcule de Sa/Se :

Pour les solutions de la gamme étalon :

Va/Ve 0,5 1 2 4

Sa/Se 0,15 0,44 0,82 2,7

Pour la solution ayant un Va inconnue :

Sa/Se = 0,63

 La gamme étalon :

3
2,5
2
Sa/Se

1,5
Sa/Se
1
Linéaire (Sa/Se )
0,5
0
0 2 4 6
Va/Ve
D’après la gamme étalonne on a :

Le Va/Ve = z=1,12 (qui correspond par projection sur la gamme étalon à Sa/Se = 0,63)

Or Ve=0,5 et Va=1,12xVe

Donc Va =1,12 x 0,5 =0,56

Calcule de pourcentage de A dans la solution : Va/V x100 = 0,56 /10 x100 = 5,6%

IV. CONCLUSION