Travaux Pratiques de Mycologie L3 Dr. CHERAK Z.

TP N° 01 : Observation microscopique de Saccharomyces cerevisiae

(Bourgeonnement, Granules de réserve et vacuole)

1. Introduction

Les champignons sont un groupe d'organismes diversifié et très répandu qui comprend

des groupes bien connus tels que les moisissures, les champignons macroscopiques et les

levures.

Une levure est un champignon unicellulaire avec un seul noyau qui se reproduit soit

de manière asexuée par bourgeonnement et division transversale, soit de manière sexuée par

formation de spores. Chaque bourgeon qui se sépare peut devenir une nouvelle cellule.

Généralement, les cellules de levure sont plus grosses que les bactéries et sont généralement

sphériques à en forme ovale. Elles manquent de flagelles et de cils mais ont la plupart des

autres organites eucaryotes comme le noyau ou les vacuoles cytoplasmiques, ainsi que des

granules de réserve cytoplasmiques le plus souvent sous forme de glycogène.

La levure Saccharomyces cerevisiae est la cellule eucaryote la mieux connue. Elle a

été un organisme modèle précieux dans l'étude de la biologie cellulaire, de la génétique et du

cancer, et elle est très utilisée dans le domaine agro-alimentaire.

2. Objectif

L’objectif de ce travail pratique est la caractérisation microscopique de la levure

Saccharomyces cerevisiae afin de :

- Observer le phénomène de la reproduction asexuée par bourgeonnement ;

- Mettre en évidence la vacuole cytoplasmique ;

- Mettre en évidence les granule de réserve de glycogène.

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3. Matériel

- Levure de boulangerie « Saccharomyces cerevisiae » déshydratée

- Solution de glucose à 10% stérile

- Solution de rouge neutre à 1%

- Lugol

- Eau physiologique stérile

- Huile de cèdre

- Lames porte objet

- Lamelles

- Pipette Pasteur

- Microscope optique

4. Mode opératoire

La première étape est de mettre la levure en suspension dans la solution glucosée puis

l’incuber pendant 8 heures à 37°C.

4.1. Mise en évidence du bourgeonnement

Pour observer les cellules bourgeonnantes (en cours de division), nous préparons un

examen direct entre lame et lamelle. Sur une lame porte objet, déposer une goutte de la

suspension de levure après incubation puis recouvrer par une lamelle. Observer au microscope

en utilisant les objectifs à sec, ou déposer une goutte de l’huile de cèdre sur la lamelle et

observer en utilisant l’objectif à immersion (100X) pour une meilleure observation des

bourgeons.

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4.2. Mise en évidence des granules de réserve

Sur une autre lame porte objet, déposer une goutte de la suspension de levure et une

goutte du lugol. Recouvrir d’une lamelle et observer à l’objectif à immersion après l’ajout

d’une goutte de l’huile de cèdre.

4.3. Mise en évidence de la vacuole

Sur une troisième lame porte objet, déposer une goutte de la suspension de levure et

une goutte de la solution du rouge neutre. Recouvrir d’une lamelle, déposer une goutte de

l’huile de cèdre et observer au microscope en utilisant l’objectif à immersion.

5. Résultats

- Sur la première lame, nous observons des cellules en division produisant des bourgeons.

Nous pouvons observer plusieurs bourgeons sur la même cellule.

- Les granules de réserve apparaissent en couleur brune à l’intérieur des cellules.

- La vacuole prend une couleur rouge clair. Les cellules mortes sont totalement vacuolisées

et apparaissent en couleur rouge foncé.

Résultats des trois observations.