Sérodiagnostic Des Chlamydioses VF

UNIVERSITE CHEIKH ANTA DIOP DE DAKAR
FACULTE DE MEDECINE, DE PHARMACIE ET D’ODONTOLOGIE
Sérodiagnostic des
chlamydioses
1
Présenté par:
Dr Zaki YOUSSEF
Dr Patrick J. BOLEGA E.
Dr Amine ALLAL
2
Objectifs
 Citer les différentes espèces de Chlamydia pathogènes pour l’homme
 Décrire le pouvoir pathogène des espèces de Chlamydia pathogènes pour l’homme
 Décrire les techniques de sérodiagnostic des chlamydioses
 Interpréter les résultats sérologiques

3 Plan
I. Généralités II. Diagnostic sérologique

1. Définition 1. Indications
2. Intérêt 2. Etape pré-analytique
3. Classification
3. Techniques
4. Caractères bactériologiques
4. Interprétation
5. Pouvoir pathogène
4
I. Généralités
5
I. Généralités
1) Definition
 Les chlamydioses: maladies infectieuses provoquées par des bactéries à tropisme oculaire et
génital du genre Chlamydia, responsables:
 Infections sexuellement transmissibles (IST la plus répandue)
 Infections oculaires
 Infections pulmonaires
 Bactéries à multiplication intracellulaire obligatoire formant une inclusion intracytoplasmique

caractéristique, rencontrée chez l'homme et l'animal
I. Généralités
6
2) Intérêt
 Bactéries difficilement cultivables, leur recherche fait appel à des techniques de biologie moléculaire
(grande sensibilité et spécificité)
 Intérêt du sérodiagnostic:
 Suspicion d’infections génitales hautes, de LGV (ulcération génitale, rectite)
 L’évaluation de l’extension de la maladie
 Bilan d’hypofertilité du couple
 Diagnostic d’une arthrite réactionnelle
 Chez nouveau-né ou nourrisson, en cas de suspicion de pneumopathie atypique

I. Généralités
7
3) Classification
Tableau I: Classification du Genre Chlamydia
Famille Genre Espèces Hôte
C. trachomatis Homme
C. pneumoniae Homme ( souche TWAR )

C. Psittaci Oiseaux,
Accidentellement Homme
C. muridarum Souris, hamster
C. suis Porc
Chlamydiaceae Chlamydia C. pecorum Mammifères
C. abortus Mammifères
(Responsables d’avortement)
C. felix Chat
C.caviae Cochon d’inde
I. Généralités
8 3) Classification
Image 1: Classification des sérovars de Chlamydia

9
I. Généralités
4) Caractères bactériologiques
 Caractères morphologiques
 Bactéries de petites taille
 Intracellulaire obligatoire
 Paroi mince ressemble à celle des bacilles à Gram négatif Image 2: Cellule infectée par Chlamydia
 Caractérisée par l’absence de peptidoglycane (PG)

I. Généralités
10
 Caractères morphologiques
Bactérie existe essentiellement sous 2 formes

Corps élémentaire (CE)
200-400
Adapté au transit nm
extracellulaire est
incapable de se multiplier et constitue
la forme infectieuse
Corps réticulé (CR) Image 3 Inclusion dans une

Adapté au milieu intracellulaire,
800-1000 nm est cellule McCoy. Microscopie
non infectieux, constitue la forme électronique (× 10 000),
métaboliquement active de la visualisant les 2 stades de
bactérie développement de C.
trachomatis
NB: Corps aberrant, forme de persistance responsable d’infection

chronique, morphologiquement anormal, viable mais non cultivable
I. Généralités
11 4) Caractères bactériologiques
 Caractères antigéniques
Antigènes spécifiques genre Antigènes spécifiques d’espèce
 Ag LPS ( antigène lipopolysacharidique )  Protéiques , thermostables
 Ag de groupe commun a toutes les espèces  Présents à tous les cycles de développement
 Présent a tous les stades thermostables , à tous  Permettent de différencier les trois espèces de
les cycles de développement chlamydia
 Responsable de réactions immunologiques

croisées entre les trois espèces
Tableau II: Caractères antigéniques des Chlamydia

12
I. Généralités
 MOMP (Major Outer Membrane Protein)
 Antigène prédominant, 40 kd
 Puissant immunogène, porte des épitopes ayant des spécificités de genre, d’espèce et de sérovar.
 Retrouvé surtout à la surface externe de CE de C. trachomatis
 Constitué de 4 domaines variables hydrophiles encadrés par 5 domaines constants hydrophobes
• Au niveau des domaines constants : épitopes spécifiques de l’espèce
• Au niveau des domaines variables : épitopes spécifique des sérovars

13
I. Généralités
 POMP (polymorphic outer membrane protein)
 Protéine de membrane exposés à la surface du CE
 Responsable de variation antigéniques en réponse a une pression immunologique
 Rôle probable dans phénomène de persistance
 Hsp 60 et hsp 70 (heat shock protein)
 Protéines de stress, présent au niveau du corps aberrant

I. Généralités
14 4) Caractères bactériologiques
Image 4: Cycle de développement des Chlamydia

15 I. Généralités
 Caractères culturaux
 Bactéries incultivables sur milieux synthétiques
 L'examen de référence est la culture cellulaire sur cellules HeLa 229 ou Mac Coy (puis recherche
d’inclusions caractéristiques)
 Excellente spécificité, une sensibilité de 80 à 90 %
 Reste réservée à quelques laboratoires spécialisés

5) Pouvoir pathogène
 Chlamydia trachomatis
 Infections oculaires: trachome +, conjonctivites à inclusions
 Infections sexuellement transmissibles (IST)
 Lymphogranulomatose vénérienne (LGV) ou Maladie de Nicolas-Favre
 Chez l’homme: urétrite, épididymite
 Chez la femme: cervicite, endométrite, salpingite
 Infections pulmonaires
17
I. Généralités
 Trachome (sérovars A, B, Ba, C)
 Cause d’environ 1,4% des cécités dans le monde
 Plus fréquent: enfants âgés de 3 à 6 ans
 Transmission: contact main-œil, manipulation des objets contaminés (serviettes, mouchoirs, draps…)
ou par les mouches ayant été en contact avec des secrétions nasales ou oculaires des personnes
contaminées
 Kérato-conjonctivite chronique contagieuse avec formation de follicules au niveau du tarse palpébral

18
I. Généralités
Image 5: Inflammation trachomateuse intense

+ follicules
 Trachome (sérovars A, B, Ba, C)
 Evolution
Image 6 : Cicatrices et opacités cornéennes
• Guérison
• Cicatrisation de la conjonctive tarsienne avec incurvation de la paupière et

trichiasis Opacification de la cornée Cécité
19
I. Généralités
 Conjonctivites à inclusions (sérovars D à K) Image 7: Conjonctivite à inclusion muco-

purulente
 Plus fréquentes chez l’adulte; transmission sexuelle
 Clinique: hyperhémie conjonctivale chronique, unilatérale + écoulement muco-purulent,

œdème palpébral, possibilité d’une atteinte génitale associée
 Nouveau-nés : contamination lors du passage de la filière génitale à partir de l’infection

cervicale maternelle
I. Généralités
20
 Lymphogranulomatose vénérienne (sérovars L1, L2 et L3)

Image 8: Lymphogranulomatose
vénérienne (homme)
 Transmission par contact sexuel
 Se développe en 3 stades:
 Stade 1 (après environ 3jours d’incubation) petite lésion cutanée au site d’entrée ayant tendance
à évoluer vers l’ulcération
 Stade 2 (environ 2 à 4 semaines après la contamination)
- Chez l’homme: adénopathies inguinales douloureuses parfois fluctuantes (bubons), fièvre…

21
I. Généralités
Image 9: Adénite inguinale
 Lymphogranulomatose vénérienne (sérovars L1, L2 et L3)
 Se développe en 3 stades:
 Stade 2 Image 10: Rectite aigue
- Chez la femme: lésions cervicales et vaginales, lombalgies, inflammation des ganglions inguinaux, péri-
rectaux et pelviens profonds, parfois écoulement de pus et de sang
 Stade 3: cicatrisation de certaines lésions, parfois fistulisation
NB: Rectite aigue (douleur, ténesmes, écoulement muco-purulent) si contamination par rapport sexuel anal
I. Généralités
22
 Infections génitales
 Chez l’homme: urétérites, urétrites non gonococciques (écoulement séreux peu abondant),
prostatite, épididymite…
 Chez la femme: cervicite (col œdématié, congestif et friable), salpingite +++ grossesses
extra-utérines, stérilité
 Chlamydia pneumoniae
 La souche TWAR = seule souche responsable d’infections chez l'homme
 Transmission strictement interhumaine (gouttelettes en suspension)
 Responsable d’une atteinte respiratoire haute ou basse
 Manifestations cliniques (le plus souvent bénignes): pharyngites, sinusites, bronchites,

pneumonies communautaires…
24
I. Généralités
 Chlamydia psittaci
 Transmission accidentelle à l'homme (contact avec des oiseaux contaminés)
 Responsable de psittacose (contamination par les perroquets)/ d’ornithose (contamination:

oiseaux sauvages ou oiseaux de la basse-cour)
 Clinique:
 Syndrome pseudo-grippal avec de la fièvre, une toux sèche, hypersudation, une photophobie et
une atteinte brochopulmonaire, myalgies, adénopathies médiastinales, spénomégalie,
 Formes graves: cytolyse hépatique, atteintes cardiaques, rénales, neurologiques…

25
II. Diagnostic sérologique

26
 Permet la mise en évidence d’Ac circulants (IgG, IgA…) au décours d'une infection à
Chlamydia
 Mise en évidence d’Ac spécifiques de genres, d’espèces et de sérovars
 A une place limitée dans le diagnostic des infections à Chlamydia
 Limites: pas disponible pour toutes les espèces, diagnostic plus tardif
 Utilisation de plus en plus des techniques moléculaires (PCR) +++

27
1) Indications
 Suspicion de lymphogranulomatose vénérienne
 Suspicion de pneumopathie atypique (nouveau-né/nourrisson +++)
 Tableau clinique évoquant un trachome
 Ulcérations génitales
 Bilan d’hypofertilité du couple
 Bilan étiologique de Grossesses extra-utérines

28
2) Etape pré-analytique
 Prélèvement
 En dehors de toute antibiothérapie
 Ponction veineuse Tube sec (bouchon rouge)
 Ne doit être ni hémolysé, ni lipémique
 Réaliser 2 prélèvements à 3 semaines d’intervalle (surveillance de la cinétique des Ac)

29 II. Diagnostic sérologique
2) Etape pré-analytique
 Transport et conservation
 Transport: immédiat au laboratoire (délai optimal de 30 minutes)
 Conservation
• 24H à température ambiante
• Une semaine, entre +2 et +8ºC
• Plusieurs mois à -20°C

30
3) Techniques
 ELISA
NB: L'intensité́ de la
coloration mesurée au
spectrophotomètre à 450 nm,
proportionnelle à la quantité́
d'anticorps spécifiques présent
dans l’échantillon
Image 11: Principe de la technique ELISA

31
3) Techniques
 ELISA
 Avantages
• Plus spécifique
• Rapide (4h)
• Facile
• Automatisée
32
3) Techniques
 CHLAMYCHECK
 Utilise des protéines recombinantes spécifiques des 3 espèces
 Protéines qui seront purifiées et fixées sur des bandelettes de nitrocellulose
 Chaque bandelette est incubée avec le sérum dilué
 Les Ac spécifiques des protéines recombinantes sont alors fixés et l’excès d’Ac non fixé est
éliminé par lavage
 Un conjugué anti-IgG ou anti-IgA humaine couplé à la peroxydase est ajouté et la réaction Ag-Ac
est révélée par une réaction colorimétrique catalysée par la peroxydase (apparition d’une bande
colorée)
33
3) Techniques
 CHLAMYCHECK
 4 contrôles sont fixées sur chaque bandelette :
• Contrôle de réaction qui doit être positif avec tous les sérums Image 12: CHLAMYCHEK
• 2 contrôles de conjugués IgG/IgA qui permettent de confirmer la classe d’Ac détectés
• Contrôle seuil pour l’évaluation de la réaction colorimétrique et le contrôle de la bandelette

3) Techniques
 Micro-immunofluorescence indirect (MIF)
 Adjuvant précieux dans le diagnostic des infections à Chlamydiae et particulièrement au cours

des complications
 Utilise des particules chlamydiennes isolées : corps élémentaire (CE) et corps réticulaire (CR)
obtenues et partiellement purifiées:
• Soit à partir de membranes vitellines d’œufs de poules embryonnés infectés
• Soit à partir de cultures de cellules infectées

35
3) Techniques
Image 13: Principe de la MIF

36
3) Techniques
Image 15: Réaction négative

Image 14: Réaction positive
37
4) Interprétation
 Infection à Chlamydia trachomatis
 Techniques d’immunofluorescence: utilisent des antigènes des CE purifiées de C. trachomatis,

C.pneumoniae, C.psittaci (méthode sérologique de référence, car détecte des AC spécifiques d’espèces )
=>Mais manquent de spécificité: une réactivité croisée élevée entre (C. trachomatis et C. pneumoniae), de plus
pas adaptée aux grandes séries, et dépend de qualité de l’expérimentateur
 Trousses Elisa utilisant des peptides spécifiques d’espèces. Elles présentent l’avantage d’une lecture
objective et de l’adaptation aux grandes séries
=> Mais les réactions croisées entre les espèces de Chlamydia sont toujours possibles
38
4) Interprétation
 L’interpretation de la sérologie (délicate)
On observe l’apparition par ordre chronologique: IgA, IgM puis IgG:
 IgA: marqueur d’infection profonde et active, aigue ou persistante
• Un taux IgA et IgG = infection profonde; IgA = bon marqueur d’efficacité thérapeutique
IgM: infection aigue ou récente (apparition précoce), mais leur absence n’exclue pas une
infection active
IgG: un taux (> 1/64): infection ancienne ou présente:
• On réalise un deuxième prélèvement à 15j d’intervalle; si +4 fois infection récente
• Si taux reste stable infection ancienne ou chronique
4) Interprétation
 La recherche d'anticorps anti-Chsp60 spécifiques de C. trachomatis permettrait de préciser le
passage à la chronicité
• Un marqueur d’infection haute chronique (infection pelvienne, obstruction tubaire Indication de
cœlioscopie
• Un marqueur du passage à la chronicité  une indication de traitement ATB de longue durée

40
4) Interprétation
 Infection à Chlamydia pneumoniae
 Sérologie MIF avec l'antigène Chlamydia pneumoniae (TWAR) a fourni la méthode la

plus sensible et la plus spécifique pour le diagnostic de l'infection aiguë TWAR
DES BC IV
41
4) Interprétation
 IgA : la présence ou non d’IgA n’est pas une aide au diagnostic car les IgA ne permettent
pas de dater l’infection
 IgM : témoignent d’une infection récente chez le nouveau-né et l’enfant
DES BC IV
42
4) Interprétation
o Lors d’une Primo-infection :
 IgM: - apparaissent 2 à 3 semaines après début maladie
- diminuent entre le 2 et 3e mois
 IgG et IgA: -Taux élevés entre la 6e et 8e semaines
- diminuent ensuite lentement (3ans)
DES BC IV
43
4) Interprétation
o En cas de réinfection, IgM n’apparaissent pas et IgG augmentent rapidement 1 à 2 semaines;

nécessité d’un deuxième sérum, observation augmentation x 4 taux Ac
o Le diagnostic d’infection aigue repose sur une augmentation significative du taux des AC sur 2
prélèvements distincts de 2 mois (et non 15 jours), sur la présence d’IgM ou d’un taux d’IgG
supérieur ou égal a 512 en IFI
NB: Titre isolé IgG > 512 n'est significatif qu'associé à une recherche directe positive
DES BC IV
4) Interprétation
 Limites du sérodiagnostic :
- Séroprévalence élevée dans la population générale
 (75 % des adultes : taux d'anticorps anti- C. pneumoniae entre 1/16 et 1/256)
 Réactions croisées avec C. trachomatis dans presque 50 % des cas
DES BC IV
45
4) Interprétation
 Infection à C. psittaci
 La psittacose s'accompagne souvent de titres élevés d'anticorps (>= 128)
 Mais des réactions croisées avec les deux autres antigènes gênent souvent l'interprétation
DES BC IV
46
4) Interprétation
 Cas suspect:
• Tableau clinique compatible avec une psittacose
• Exposition à des oiseaux
DES BC IV
47
4) Interprétation
 Cas confirmé
• Recherche directe positive
• Séroconversion
• Augmentation significative du titre des anticorps (× 4) sur deux échantillons prélevés à

2 semaines d'intervalle en présence ou non d'IgM (≥ 1/16) est observée
DES BC IV
48
4) Interprétation
 Cas probable
• Titre d'anticorps IgG est ≥ 1/128
• Ou s'il est < 1/128 associé à des IgM
• Un cas est possible s'il est lié épidémiologiquement à un cas confirmé avec un titre d'IgG
< 1/128 sans IgM
DES BC IV
49 Conclusion
 Sérodiagnostic a amélioré le diagnostic des chlamidioses en clinique
 Ne peut remplacer la détection directe
 Pour le diagnostic en laboratoire des infections à C. trachomatis , la détection de

l'organisme par isolement ou PCR est considérée comme la norme de référence.
 Plusieurs sérotypes ont été reconnus chez C. trachomatis et C. psittaci , un seul sérotype a
été reconnu pour l'organisme TWAR
 Le diagnostic de certitude d'une infection à C. pneumoniae repose sur l'association de

l’amplification génique et de la sérologie
DES BC IV
50
Merci de votre aimable attention!!!

51
Références
 Pilly E., infection à Chlamydia. In: Maladies infectieuses et tropicales, Edition CMIT, 2004;
334-335.
 Hammerschlag M. R., Chlamydia pneumoniae and the lung, Eur Respir J. 2000; 16: 1001-
1007.
 https://www.msdmanuals.com
 C. Cazanave, Infections humaines à Chlamydiae, EMC - Maladies infectieuses, mise à jour
2020
 M. Cosse, Thèse de doctorat , Identification et caractérisation d’un nouvel effecteur précoce
de Chlamydia trachomatis, 15 juin 2016
 Saadouni A, Tbai N, Takourt B. Comparaison de deux techniques de diagnostic sérologique
des infections à Chlamydia : MIF et immunoblot. Ann Biol Clin 2013 ; 71(6) : 663-6
doi:10.1684/abc.2013.0911
 The Microimmunofluorescence Test for Chlamydia pneumoniae Infection: Technique and
Interpretation : San-pin Wang Department of Pathobiology, University of Washington,
Seattle
52
 De Barbeyrac B, Obeniche F, Ratsima E, Labrouche S, Moraté C, Renaudin H,

Pereyre S, Bebear CM, Bebear C. Limites et perspectives du diagnostic sérologique à
l’ère de l’amplification génique in vitro : infections génitales à Chlamydia
trachomatis et infections respiratoires à Chlamydia pneumoniae et Mycoplasma
pneumoniae. Ann Biol Clin 2006 ; 64:409-419. InVS. Numéro thématique :
Chlamydia trachomatis : études de prévalence dans des structures de médecine à
vocation préventive. BEH – Bulletin épidémiologique hebdomadaire 2006 ; No 37-38
: 275-290.

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 Citer les différentes espèces de Chlamydia pathogènes pour l’homme

 Décrire le pouvoir pathogène des espèces de Chlamydia pathogènes pour l’homme

 Décrire les techniques de sérodiagnostic des chlamydioses

 Interpréter les résultats sérologiques

I. Généralités II. Diagnostic sérologique

 Infections sexuellement transmissibles (IST la plus répandue)

 Bactéries à multiplication intracellulaire obligatoire formant une inclusion intracytoplasmique

 Suspicion d’infections génitales hautes, de LGV (ulcération génitale, rectite)

 L’évaluation de l’extension de la maladie

 Bilan d’hypofertilité du couple

 Diagnostic d’une arthrite réactionnelle

 Chez nouveau-né ou nourrisson, en cas de suspicion de pneumopathie atypique

Famille Genre Espèces Hôte

C. pneumoniae Homme ( souche TWAR )

Image 1: Classification des sérovars de Chlamydia

 Bactéries de petites taille

 Caractérisée par l’absence de peptidoglycane (PG)

Bactérie existe essentiellement sous 2 formes

Corps réticulé (CR) Image 3 Inclusion dans une

NB: Corps aberrant, forme de persistance responsable d’infection

Antigènes spécifiques genre Antigènes spécifiques d’espèce

 Ag LPS ( antigène lipopolysacharidique )  Protéiques , thermostables

 Responsable de réactions immunologiques

Tableau II: Caractères antigéniques des Chlamydia

 MOMP (Major Outer Membrane Protein)

 Retrouvé surtout à la surface externe de CE de C. trachomatis

 Constitué de 4 domaines variables hydrophiles encadrés par 5 domaines constants hydrophobes

• Au niveau des domaines constants : épitopes spécifiques de l’espèce

• Au niveau des domaines variables : épitopes spécifique des sérovars

 POMP (polymorphic outer membrane protein)

 Protéine de membrane exposés à la surface du CE

 Responsable de variation antigéniques en réponse a une pression immunologique

 Rôle probable dans phénomène de persistance

 Hsp 60 et hsp 70 (heat shock protein)

 Protéines de stress, présent au niveau du corps aberrant

Image 4: Cycle de développement des Chlamydia

 Bactéries incultivables sur milieux synthétiques

 Excellente spécificité, une sensibilité de 80 à 90 %

 Reste réservée à quelques laboratoires spécialisés

 Infections oculaires: trachome +, conjonctivites à inclusions

 Infections sexuellement transmissibles (IST)

 Lymphogranulomatose vénérienne (LGV) ou Maladie de Nicolas-Favre

 Chez l’homme: urétrite, épididymite

 Chez la femme: cervicite, endométrite, salpingite

 Trachome (sérovars A, B, Ba, C)

 Cause d’environ 1,4% des cécités dans le monde

 Plus fréquent: enfants âgés de 3 à 6 ans

 Kérato-conjonctivite chronique contagieuse avec formation de follicules au niveau du tarse palpébral

Image 5: Inflammation trachomateuse intense

 Trachome (sérovars A, B, Ba, C)

• Cicatrisation de la conjonctive tarsienne avec incurvation de la paupière et

 Conjonctivites à inclusions (sérovars D à K) Image 7: Conjonctivite à inclusion muco-

 Clinique: hyperhémie conjonctivale chronique, unilatérale + écoulement muco-purulent,

 Nouveau-nés : contamination lors du passage de la filière génitale à partir de l’infection

 Lymphogranulomatose vénérienne (sérovars L1, L2 et L3)

à évoluer vers l’ulcération

 Stade 2 (environ 2 à 4 semaines après la contamination)

- Chez l’homme: adénopathies inguinales douloureuses parfois fluctuantes (bubons), fièvre…

 Lymphogranulomatose vénérienne (sérovars L1, L2 et L3)

 Stade 2 Image 10: Rectite aigue

 Stade 3: cicatrisation de certaines lésions, parfois fistulisation