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La
rvlation en chromatographie
surcouchemince
Paul Klee
PaulKlee
tudiant pharmacognosie
tudiantpharmacognosie
UNIVERSITEFRANCOISRABELAIS
TOURS
JolleDorat*.MichellePinault**.
JacquesPothier
Jacques Pothier*
laboratoireNutrition,CroissanceetCancerde
l i I
lquipeInsermU921delafacultde
U921 d l f l d
mdecinedeTOURS
Laboratoiredepharmacognosie
AvenueMonge37200tours
A
M
37200 t
R l ti
Rvlation,Drivatization
D i ti ti
Laphasedelachromatographiecouchemince
malmatrise.
Evaluationqualitative
Rvlationparpulvrisation
R l ti
l i ti
Rvlationparimmersion
Rvlationbiologique
EvaluationsouslampeUVetvido
Evaluation sous lampe UV et vido
t l
f
d t h
sombres.
lesUV(254nm) :enexposantlaplaqueune
sourcederadiationUV,certainscomposs
(systmesconjugusouaromatiques)
apparaissentsousformedetachesbrillantes.
IMPORTANCEDUSECHAGE
PREALABLE
il dpend des composs isoler et des luants
sii lluant
ll
t estt acide
id ou basique
b i
il faut
f t un schage
h
pralable avec chauffage pour viter une raction
luant
l ant rvlateur
r late r
Opiumiodoplatinate ractifpeuacidenondestructifdela
molcule
1mauvaisschage2bonschage
A viter ( proscrire)
Aviter(proscrire)
Lechauffagecow
h ff
b
boy
boy
Le chauffage
L
h ff
bonne
b
maman
Pulvrisation
Imprgnationdelacoucheparpulvrisationdune
substanceractive.
Reproductibilitdifficiletrslieloprateur
puissancedepulvrisation
puissance de pulvrisation
distance
dure
d re
balayage,homognitdufonddeplaque
Pulvrisateurs
Schmadevaporisation
Larvlationpar
immersion delaplaque
de la plaque
danslasolutionderactifs
estdeloinlameilleure
solution(nonpolluante,
reproductible,quantitative)
d tibl
tit ti )
maisattentionauxexcs
d chantillonsurlaplaque,
et aux rvlations
etauxrvlations
multiples.
Plaquedestrodes
rvlsauractif
phosphomolybdique
Chromatogrammestablissantunecomparaisonentre
pulvrisationettrempage
d H h D i t
daprsHahnDeinstrop
Mthodes de Drivation
MthodesdeDrivation
UV254et366nm
Pulvrisation
Trempage
Exposition aux vapeurs
Expositionauxvapeurs
Ractifsdanslesolvant
Ractifdansladsorbant
Acidesulfuriquepluschauffage
Vanillinesulfuriquepluschauffage
Acidephosphomolybdiquepluschauffage
Anisaldhyde sulfurique plus chauffage
Anisaldhydesulfuriquepluschauffage
SeldeBleusolideB
Iodoplatinate depotassium
((Couleursallantduroseaubleuintenseen
passantparleviolet)
R tif d Ht id fl
RactifsdesHtrosidesflavoniques
i
Potassealcoolique
Ractif au chlorure ferrique
Ractifauchlorureferrique
Ractifautrichloruredaluminium
RactifdeNEU(NP/PEG)
Mcanismeractionnelavec
leRactifdeNEU
+
O - NH2
B
+
OH
OH
- OH
2
HO
CH2
CH2
O
B
ChromatogrammesdeGinkgobiloba
DaprsWagner
Dichloroquinone4chlorimide(Phnols,indoles)
Di
hl
i
4 hl i id (Ph l i d l )
SeldeBleuSolideB(cannabinodes,phnols,tannins)
Rctif de Neu (NP/PEG) (Flavones)
RctifdeNeu(NP/PEG)
Vanillinesulfurique(Strodes,saponineshuilesessentielles)
TrichloruredAntimoine(terpnes,strodes,sapognines)
Acidetrichloractique+chloramineT(H.cardiotoniques)
Dinitrophnylhydrazine(Aldhydesetctones)
PDAB Para dimthylaminobenzaldhyde (Indoles)
PDAB=Paradimthylaminobenzaldhyde(Indoles)
Acidechlorhydrique acideactique
acidephosphomolybdique
1cannabis2ginkgo3ginseng
Diffrencesentredeuxrvlationsla
vanilline chlorhydrique et sulfurique
vanillinechlorhydriqueetsulfurique
Huileessentielleextraitdecranberry
Choix de la plaque
Choixdelaplaque
Expriencercente
Nepaschangerdefournisseurdeplaque
Ne pas changer de fournisseur de plaque
Plaque x
Plaquex
Mmeluantmmervlation
glycolipides
Exempledemiseaupointdunemthodede
rvlation
Diffrentsrvlateursutilissettestssurdes
glycolipides.
glycolipides
Cesmanipulationsonttralisesdansle
laboratoireNutrition,CroissanceetCancerde
lquipeInsermU921delafacultde
mdecine de TOURS avec laide
mdecinedeTOURS,avecl
aidedel
de lquipe
quipede
de
MonsieurBernardSavarydulaboratoire
Camag et les conseils de Monsieur Jacques
CamagetlesconseilsdeMonsieurJacques
Pothier
DeuxmolculesAetB, drivsglycolipidiques
p
diffrentparunesubstitutionensn3.
(Ractifs :Primuline,Berbrinesulfatede
cuivre avecacideorthophosphorique,Acide
avec acide ortho phosphorique Acide
sulfuriquediffrentsdosages.
Acidesulfurique10%danslthanol :20mLdacidesulfuriqueavec180mL
dthanol.Lesplaquessontchauffes130Cpendant5min.
ImageavecplaquedriveenWRT
Ractifaveclesulfatedecuivre
R
tif
l
lf t d
i
:20gdesulfatedecuivredissousdans200mLde
20 d
lf t d
i
di
d
200 L d
mthanolauquelonajoute8mLdacidesulfuriqueet8mLdacideortho
phosphorique(85%).Lesplaquessontchauffes140Cpendant30min.
UV 366
Berbrine
Remerciements
Les tudiants en pharmacognosie
Lestudiantsenpharmacognosie
MichellePinault
Joelle Dorat
Paul Klee
PaulKlee
Nicolasdestael
Nicolas de Stal
NicolasdeStal
Nous vous
remercions pour
votre coute
Acidesulfurique10%danslthanol :20mLdacidesulfuriqueavec180mL
dthanol.Lesplaquessontchauffes130Cpendant5min.
ImageavecplaquedriveenWRT
Ractifaveclesulfatedecuivre
R
tif
l
lf t d
i
:20gdesulfatedecuivredissousdans200mLde
20 d
lf t d
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d
200 L d
mthanolauquelonajoute8mLdacidesulfuriqueet8mLdacideortho
phosphorique(85%).Lesplaquessontchauffes140Cpendant30min.
.Les2ractifsensemblesontappropris.Les2molculesAetBsontsparesmaisilfaudrait
unemeilleureposition,ellesrestentbassessurlaplaque.
Lervlateurpeuttreutilis.