NUTRITION ET CROISSANCE BACTERIENNE

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 OBJECTIFS

1. Définir les termes mésophile, microaérophile

2. Présenter les méthodes d’évaluation de la biomasse
3. Décrire les phases de la courbe de croissance

4. Décrire le phénomène de diauxie

2
 PLAN

INTRODUCTION

1. NUTRITION

2. CROISSANCE

3. APPLICATIONS

CONCLUSION
 INTRODUCTION

• Les bactéries, comme tout être vivant ont besoin de

se nourrir, de croître et de se reproduire.
• Elles doivent trouver dans le milieu extérieur les
composés nutritifs nécessaires et les conditions
favorables.
• Pour assimiler ces nutriments, les bactéries doivent
les métaboliser grâce à une variété de processus.
• Applications: bactériologie médicale, microbiologie
alimentaire et industrielle
 1. NUTRITION

1.1 Besoins nutritifs

1.2 Conditions physico-chimiques

1.3 Milieux de culture

 1. 1 Besoins nutritifs: types

Elémentaires
Spécifiques
•eau ( 80 % de la masse)
(=facteurs de croissance)
•macroéléments : C, O, H, N, S, O
•Bactérie auxotrophe
•ions : K+,Ca2+,Mg2+, Fe2+/Fe3+
(incapable de synthétiser)
Na+, Cl-
•Bactérie prototrophe
•oligo-éléments : Co, Cu, Zn, Mo
(capable de synthétiser)
 Besoins nutritifs: Sources

Source de carbone
•Autotrophe = CO2 la seule ou principale source de carbone
•Hétérotrophe = divers molécules organiques (sucres, AA)

Source d'énergie
•Phototrophe = grâce à la lumière
•Chimiotrophe = oxydation de composés organiques et
inorganiques

Source d'H+/e-
•Lithotrophe = molécules inorganiques réduites
•Organotrophe = molécules organiques réduites
Besoins nutritifs: Sources
 1. 2 Conditions physico-chimiques: oxygène

Besoin en oxygène
•Aérobie stricte : présence d'oxygène
•Microaérophile : besoin de peu d'oxygène
•Aéro-anaérobie facultative : présence ou non d'oxygène
•Anaérobie stricte : absence d'oxygène
 1. 2 Conditions physico-chimiques: température

Température: température optimale/croissance maximale

•Psychrophile : température optimale < 15°C (1)
• Mésophile : 15°C < température optimale < 45°C(2)
(plupart des bactéries pathogènes chez l’homme )
•Thermophile : température optimale > 45°C (3)

1 2 3
 1. 2 Conditions physico-chimiques:
pH, Pression osmotique

pH
•pH neutre: plupart des bactéries
•alcalophile ( pH > 8 ): Pseudomonas, Vibrio
•acidophile ( pH < 6 ): Lactobacillus

Pression osmotique (=concentration en sels/ions)

• tolèrent des variations des concentrations en sels,
certaines ont une affinité pour la salinité (milieux
sélectifs/Chapman/Staphylocoques
•halophile (plus de 2% de NaCl): Vibrio
•hyperhalohile ( NaCl 20-30%)
 1. 3 Milieux de culture

•Composition

•Nature

•Utilisation
 1. 3 Milieux de culture: composition

Empiriques
•Milieux complexes
•Dérivés du bouillon de viande
•Composition impossible à définir
•+é de sang (gélose au sang/bactéries exigeantes)
•+é colorants ou ATB (milieux sélectifs/inhibe espèces
indésirables)
Ex: Gélose nutritive (gélose ordinaire); bouillon nutritif, gélose VCN, milieu SS

Synthétiques
•Composition exacte connue
•Pour étude du métabolisme
Ex: Milieu Kligler-Hajna, mannitol-mobilité, milieu Lysine-Fer
 1. 3 Milieux de culture: nature
Liquide (bouillon) Solides: Liquide +é d’agar-agar

Colonie
trouble (S, R, M)

trouble : visible à l’œil nu

colonie: amas de cellules bactériennes visibles à l’œil nu issues

de la multiplication d’une seule cellule (clone)
 1. 3 Milieux de culture: utilisation
Milieu d’isolement: orientation, sélectif
En général milieu solide, produit polymicrobien
étalé donne naissance à autant de colonie/espèces
(milieu EMB) ou +é inhibiteurs/sélectif (milieu SS)

Milieu d’enrichissement
En général milieu liquide, multiplication de bactéries
rares dans un produit pathologique qui seront
ensuite isolées (Ex Milieu de Mueller Kauffman)

Milieu d’identification
Destiné à mettre en évidence des activités
métaboliques (ex: Kligler-Hajna) ou des enzymes
bactériennes (ex: milieu LDC) Milieu Kligler-Hajna
 Résumé 1
• Pour se nourrir la bactérie doit trouver les nutriments
(différentes sources) et les conditions physicochimiques
favorables.

• Deux éléments sont réunis dans les milieux de culture

• Plusieurs types de milieux: orientation, enrichissement,

sélectif
 2. CROISSANCE

2. 1 Méthodes de mesure

2.2 Courbe de croissance

2.3 Variations

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 2. 1 Méthodes de mesure

2.1.1 Mesure du nombre de cellules

2.1.2 Mesure de la biomasse

2.1.3 Mesure des constituants cellulaires

2.1.4 Mesure de l’activité cellulaire

 2.1.1 Mesure du nombre de cellules

Microscope
Compteur de particules
•numération/cellules hématimétrique
•cytométrie de flux
(Malassez, Thoma, etc.)
•bactéries vivantes+ mortes
•bactéries vivantes+ mortes

Epifluorescence
•marquage des bactéries par des
fluorochromes (acridine)
•bactéries vivantes/mortes

Dénombrement après culture

•bactéries vivantes/mortes
•1 colonie=1 cellule bactérienne
 2.1.2 Mesure de la biomasse
• Détermination du poids sec
 bactéries lavées, séchées et pesées
• Mesure du trouble (Méthode optique, turdimétrie)

 Mesure de l‘absorbance (1/DO) d'une suspension bactérienne

à une longueur d’onde donnée ou sur une région spectrale
donnée.
 Selon la loi de Beer-Lambert, l'absorbance d'une solution est
proportionnelle au nombre de cellules bactériennes
 2.1.3 Mesure des constituants cellulaires

• Dosage de l’azote cellulaire

méthode de Kjeldal ou Bradford (facile, peu sensible)
minéralisation
• Dosage des nucléotides
ATP, FAD, FMN
bioluminescence (luciférase)
• Activité enzymatique
phosphatase, décarboxylase
 2.1.4 Mesure de l’activité cellulaire

• Consommation de substrat:
source de C, N, O ou un facteur spécifique de croissance

• Excrétion des produits

CO2, 14CO2 ( à partir d’un substrat radiomarqué)

• Variation physico-chimiques du milieu

pH, Potentiel RedOx
 2.2 Courbe de croissance

2.2.1 Obtention

2.2 2 Expression mathématique

2.2.3 Aspects de la courbe

2.2.4 Variations
 2.2.1.Obtention
•milieu non renouvelé, un seul substrat
•division des cellules en même temps

Numération viable/temps Turbidimétrie/temps

(CFU/ml) 650 nm (DO)
 2.2.2 Expression mathématique (1)
•La croissance se fait selon une
progression géométrique : 1, 2, 4,
8, etc... ou 20, 21, 22, 23,.....2n (où n
= nombre de générations). Il s'agit
d'une croissance exponentielle
•Si on part d'une population initiale
N0, au bout de n divisions, on aura un
nombre théorique de bactéries:
N = 2nNO (1).

•Le temps qui sépare deux divisions

successives (ou temps nécessaire au
doublement d'une population) est
appelé temps de génération θ.
θ = t / n (2)
 2. 2. 2. Expression mathématique (2)

•Le taux de croissance () exprime la vitesse de

multiplication des bactéries; c'est le nombre de
divisions effectuées par unité de temps.
 = n / t  n = t (3)

•(1) et (3)  N = 2t N0 (4)

•Pour la simplifier (linéarisation), on va lui faire

subir une transformation logarithmique:
log N = t log 2 + log N0 (5)
 2.2.2 Expression mathématique (3)

•Si on travaille dans la base 2, log2 2 = 1, donc

log2N = t + log2N0 (6)

µ=(log2N2 - log2N1) / t2 - t1
 2.2.2. Expression mathématique (4)

•Le taux de croissance est très variable selon les

espèces et les conditions de culture.

•Le temps de génération peut être déterminé comme

suit : θ = 1 / (h)

Température (°C) Temps de génération (h)

Bacillus stearothermophilus 60 0,14

Escherichia coli 40 0,35
Mycobacterium tuberculosis 37 6
 2.2.3. Aspects de la courbe: Différentes phases

•Phase de latence (I) • Phase de ralentissement (IV)

•Phase d’accélération (II) •Phase stationnaire (V)
•Phase exponentielle (III) •Phase de déclin (VI)
Phase de latence (1)
 Phase de latence (2)

 taux de croissance est nul (µ=0)

 durée de cette phase dépend de plusieurs facteurs :

-importance de l'inoculum : plus l'inoculum est important,
plus le temps de latence est court
- âge des bactéries : plus la culture ayant servi d'inoculum est
vieille, plus la durée de cette phase est longue
- composition du milieu : les bactéries doivent synthétiser
les enzymes adaptées au nouveau milieu de culture
(adaptation enzymatique)
.
 Phase d’accélération

Le taux de croissance µ tend vers son maximum

(µ>>>) et la biomasse augmente
Phase de croissance exponentielle (1)
 Phase de croissance exponentielle (2)

 taux de croissance µ est constant et maximum (µmax).

majorité des bactéries sont dans un bon état
physiologique et se divisent de façon exponentielle.
 temps de génération des bactéries pendant cette phase
est le plus court.
 presque totalité de la masse cellulaire est représentée par
des cellules viables (mortalité nulle).
 Obtention d’ une droite (µ= pente de la droite)
Phase de ralentissement ou de décélération (1)
 Phase de ralentissement ou de décélération (2)

• milieu devient de moins favorable à la croissance

et le taux de croissance µ diminue.

• phase correspond au début d’épuisement du

milieu

• nutriments commencent à manquer et les

déchets deviennent toxiques.
Phase stationnaire (1)
 Phase stationnaire (2)

taux de croissance µ redevient nul (µ=0)

• compensation entre les bactéries qui meurent, par

autolyse, et celles qui continuent à se multiplier.

phase est déclenchée par l'épuisement du milieu et

l'accumulation de déchets toxiques (ex.: acides
organiques) libérés dans le milieu par les bactéries.
Phase de déclin (1)
 Phase de déclin (2)

• taux de croissance µ devient négatif ( < 0)

• bactéries ne se divisent plus

• Beaucoup d’entre elles meurent et sont lysées

par les enzymes protéolytiques endogènes
(autolyse).
 2.3 Variations

•Phénomène de diauxie

•Culture en milieu renouvelé ou culture continue

 Phénomène de diauxie

Obtention
Monod (1940), prix Nobel (1965)
•milieu non renouvelé
•02 substrats
(glucose, lactose)

Lorsque des bactéries sont cultivées en présence de glucose et de

lactose, elles commencent par l'utilisation du glucose jusqu'à son
épuisement. On observe ensuite un temps de latence, durant lequel les
bactéries vont synthétiser les enzymes nécessaires à l'utilisation du
lactose, avant la reprise de la multiplication bactérienne.
 Culture en milieu renouvelé ou culture continue
•apport de milieu neuf
•épuisement des nutriments •élimination des déchets
•diminution du pH •aération
•accumulation de déchets (CO2) Bioréacteur (turbidostat,
chémostat)
ralentissement de la croissance maintien de la croissance en
phase exponentielle

turbidostat-chémostat Aspects de la courbe

 Résumé 2
• La croissance bactérienne peut être mesurée par
différentes méthodes. Celle utilisant la turbidimétrie
reste la plus adaptée (automatique,
quantifiable/mathématique).

• Au cours de la croissance, on décrit six phases dont

la phase exponentielle est essentielle

• Cependant l’aspect de la courbe de croissance peut

subir des variations: diauxie, culture continue
 3. Applications

3. 1 Bactériologie médicale

3.2 Bactériologie de l’environnement

3.3 Bactériologie des aliments

3.4 Au niveau de l’industrie

 3. 1 Bactériologie médicale

Isolement Identification Sensibilité aux ATB

Automate
 3.2 Bactériologie de l’environnement

Contrôle de stérilité ou de densité microbienne

air des blocs opératoires surface

impacteur boîte contact
 3.3 Bactériologie des aliments, eaux

Contrôle qualité

aliments Eau
Taux de contamination Filtration sur membrane
 3.4. Au niveau de l’industrie

Dosage microbiologique Production microbiologique

vitamines, facteurs de croissance ATB, enzymes, acides aminés
Facteur limitant Bioréacteur
 Conclusion
 Les bactéries comme tout être vivant ont besoin de se maintenir, de
croître et de se reproduire. Les conditions favorables à leur croissance et
leur métabolisme sont apportées par les milieux de culture.

• En plus de favoriser la croissance, les milieux de culture selon leur

spécificité permettent d’isoler et d’identifier les bactéries avec des
applications nombreuses et diverses.

• Une meilleure connaissance des milieux de culture et des

métabolismes bactériens permettra d’améliorer les approches
diagnostiques de l’infection bactérienne et d’isoler les bactéries
jusqu’alors difficilement ou non cultivables.