Exercices chapitre 7

Question sur les stratégies d’isolement

Vous voulez isoler différentes espèces bactériennes possédant les caractéristiques suivantes.
1. Décrivez brièvement une stratégie d’isolement pour chacun des microorganismes décrits ci-
dessous
2. Indiquez les principales composantes des milieux de culture utilisés et leurs concentrations
approximatives (ordre de grandeur):

a. un microorganisme du sol non-sporulant, retrouvé en faible concentration et possédant les

caractéristiques suivantes : bâtonnet Gram+, Oxydase -, motile, hétérotrophe, capable
d’utiliser les sources de carbone suivantes : arabinose, dextrose, raffinose, sucrose et
tréhalose. Son intervalle de croissance se situe entre 25 et 45°C pour la température et
entre 6,5 et 8 quant au pH. Il est de plus auxotrophe pour l’alanine et la vitamine D.

b. un microorganisme retrouvé en concentration élevée dans l’air. Il s’agit d’un coque Gram+,
non-motile, résistant à la dessiccation, aux UV et à la bacitracine.

c. Un microorganisme de provenance aquatique retrouvé à haute altitude dans l’eau d’un

ruisseau des Alpes françaises. Cet organisme est un bâtonnet gram négatif, oligotrophe,
capable de produire un pigment rose lorsqu’exposé à la lumière, incapable de croître à
37°C, sensible à l’ampicilline et à la tétracycline et capable de division asymétrique.

d. Un microorganisme photosynthétique anaérobie strict retrouvé dans les sédiments du

fleuve St-Laurent, capable de pousser en absence de lumière dans un milieu riche
supplémenté en glucose, utilisant préférentiellement une longueur d’onde de 415 nm pour
croître, produisant un pigment rouge et utilisant le H2S comme donneur d’électrons.

Réponses

a.:

- stratégie d’isolement: méthode non intact (cuillère), puis l'utilisation des milieux sélectifs et différents
capables d’inhiber les bactéries Gram -. incuber à température de 42°C et pH proche de 6,5 ou 8 pour
sélectionner les microorganismes spécifiques (mésophile et neutrophile).

- composition milieu culture et concentration approximative: arabinose, dextrose, raffinose, sucrose et

tréhalose, vitamine 1 mg/L, alanine 50 mg/L, extraits de sol et sels minéraux (ng à g/L).

- étape de confirmation de pureté: Isolement répété sur des milieux sélectifs suivis d'un examen
microscopique des colonies isolées pour vérifier leur morphologie et leur Gram, puis réalisation de tests
biochimiques spécifiques.

- nature d’isolat: Culture pure de bâtonnets Gram+ hétérotrophes.

b.:
- stratégie d’isolement: une méthode par filtration ( cassette IOM 25 mm) puis l’utilisation de milieux
sélectifs comme le milieu Mannitol Salt Agar (MSA) ou le milieu Nutrient Agar (NA) contenant de la

bacitracine pour inhiber la croissance d'autres microorganismes et l’exposition à des conditions d'UV et de
dessiccation pour éliminer ces microorganismes sensibles .faire toujours le blanc et l’échantillon contrôle
pour l’air.

- composition milieu culture et concentration approximative: milieu MSA par exemple en g/L.

- étape de confirmation de pureté: Isolement répété sur des milieux sélectifs et des tests biochimiques
pour confirmer l'identité de l'isolat.

- nature d’isolat: Culture pure de coques Gram+ résistantes.

c.:

- stratégie d’isolement: methode de prelevement par la bouteille par exemple puis l’utilisation d’un milieu
d’enrichissement comme le bouillon nutritif ensuite l’utilisation de milieux pauvres en nutriments comme le
milieu R2A avec des suppléments de tétracycline et d'ampicilline pour inhiber la croissance d'autres
organismes. Incubation à des températures entre 10°C - 25°C par exemple et sous lumière pour favoriser

la croissance du pigment rose. faire le blanc.

- composition milieu culture et concentration approximative: sels minéraux (ng à g/L), milieu R2A par
exemple en g/L.

- étape de confirmation de pureté: Isolement répété sur des milieux sélectifs et des tests biochimiques
spécifiques pour confirmer l'identité de l'isolat.

- nature d’isolat: Culture pure de bâtonnets Gram- oligotrophes.

d.:

- stratégie d’isolement: méthode intact (carottier) prélèvement en profondeur de 30 cm par exemple puis
l'utilisation des milieux sélectifs enrichi de glucose (bouillon nutritif), de H 2S et adapté à la longueur
d'onde de 415 nm. Exposition à des conditions anaérobies strictes, à l'obscurité ou à la lumière ( pour
produire ce pigment rouge). faire le blanc.

- composition milieu culture: les milieux (g/L) utilisant les bactéries sulfo-réductrices produisant du H 2S,
l’utilisation de vaspar et gélose bouchon.

- concentration approximative: g/L pour glucose.

- étape de confirmation de pureté: Isolement répété sur des milieux sélectifs et des tests spécifiques de
pigment et de croissance anaérobie. Microscopie pour vérifier la morphologie.
- nature d’isolat: Culture pure de microorganismes photosynthétiques anaérobies .