Dépôt des échantillons

1 d’ADN dans les puits 2 Migration des fragments

Comment d’un gel d’agarose

ça marche ? - +

- 100 V

100 V Les fragments se déplacent dans

le gel en fonction de leur taille vers
le pôle positif, car l’ADN est chargé
négativement. Plus le fragment est
+ petit, plus il migre vite (et donc
Exemple Fragments loin), car il est moins freiné par le
d’ADN gel.
d’électrophorèse
sur fragments d’ADN Révélation de la migration
Les fragments 3 sur table UV ou lumière bleue
peuvent provenir : Un produit spécifique
– soit de digestion par se fixe à l’ADN et le rend
des enzymes de restriction La position de chaque bande est fluorescent sous les rayons
(cf fiche enzymes spécifique à chaque échantillon UV ou la lumière bleue.
de restriction), et permet de caractériser leur
en criminalistique, contenu en ADN. B
ou recherche (analyse, Indicateurs de taille ;
construction d’ADN la longueur est donnée
recombinant)… en paire de bases (pb). D
– soit de réaction de PCR
(cf fiche PCR) pour
les tests de paternité, Puits de A
départ 10 000 Tous les fragments
le séquençage, C
6 000 d’une même taille
la recherche…
4 000 forment une ligne
repérable sur le gel.
2 000

1 000

500

financée grâce aux dons du Téléthon Front de migration

Autres types • électrophorèse sur gel de polyacrylamide • électrophorèse capillaire, pour le séquençage
d’électrophorèse : pour séparer les fragments qui diffèrent (nécessite de séparer les fragments qui diffèrent
de quelques paires de bases. d’une paire de base).
 Le Southern blot
Nommé ainsi d’après le nom de analyser   
Pour affiner les résultats de l’électrophorèse son inventeur, le biologiste Edwin
d’ADN sur gel d’agarose, on peut réaliser l’adn
Southern, le Southern Blot (1975)
un Southern blot. Cette technique permet est une méthode pour repérer la
de localiser une séquence d’ADN parmi présence d’une séquence précise
les fragments ayant migrés, grâce à d’ADN à l’intérieur d’un échantillon

l’électrophorèse
une sonde (morceau d’ADN) marquée d’ADN. “ Blot ” signifie buvard.
(luminescence ou radioactivité).

Le gel utilisé lors On récupère

1 2
de l’élèctrophorèse la membrane électrophorèse :
est placé entre différentes sur laquelle les technique utilisée en biologie
couches absorbantes. fragments d’ADN moléculaire pour analyser
et caracteriser les molécules
ont été transférés. (protéines, ADN ou ARN) d’un
école Estienne, école de l’ADN, 2008

échantillon. Sous l’effet

d’un champs électrique,
la séparation des particules
feuilles se fait en fonction de leur
de papier
absorbant
3 La membrane charge et/ou de leur taille.
est mise en
présence de sonde
membrane
complémentaire
d’un fragment
gel spécifique.
éponge
Illustrations : isabelle.aguilar@hotmail.fr

solution
saline

Révélation sur film

4 radiographique.
Par capillarité le liquide de la cuve Seules les bandes
remonte et transfert les fragments marquées par la sonde
d’ADN sur la membrane. imprimeront le film.

à partir du principe du Southern blot, d’autres techniques ont été developpées comme ecole-adn @ genethon.fr
le Northern blot pour l’analyse des ARN ou encore le Western blot pour l’analyse des protéines. 01.69.47.11.70