Faculté de médecine

Labotatoire de Biiochimie et Biologie moléculaire

CHU CONSTANTINE

Régulation de l’activité
enzymatique

Encadré par:Pr SEMRA

Présenté par:Dr AGUEZLANE
Plan du cours:
1. Introduction
2. Régulation par modification covalente irréversible:la
protéolyse
3. Mécanisme par modification réversible :
a) Phosphorylaion/Déphosphorylation
b) Adénylation et ADP ribosylation
c) Farnésylation
d) Glycosylation
4. Régulation par les isoenzymes
5. Régulation allostérique
6.Conclusion
Introduction
• L’activité enzymatique doit souvent être régulée afin qu’ils exercent leur
fonction en temps et lieu appriopriés.Cette régulation est essentielle pour la
coordination du vaste réseau de processus biochimiques qui ont lieu à tout
instant dans un organisme .Les deux principaux moyens de régulation sont:

 Le contrôle de la quantité d'enzyme: La quantité d'enzyme est dépendante du

taux de synthèse de l'enzyme et de son taux de dégradation. Des systèmes
complexes de régulation de la transcription et/ou de la traduction des gènes
codant pour des enzymes ont été développés pour moduler la quantité
d'enzyme en réponse à des conditions physiologiques changeantes.
 Le contrôle de l'activité enzymatique:L'activité catalytique des enzymes peut
être directement modifiée par des altérations structurales et
conformationnelles. Ainsi, la modulation de l'affinité de l'enzyme pour son
substrat permettra de changer le taux de catalyse. L'affinité d'association peut
être changée par la présence de protéines ou de sous-unités régulatrices.
Cette régulation est faite par cinq maniéres:

FORMES
CONTRÔLE
MULTIPLES
ALLOSTERIQUE
D’ENZYMES

MODIFICATIO
N REVERSIBLE

ACTIVATION CONTRÔLE DE
PROTEOLYTIQU LA QUANTITE
E PRESENT
1.Régulation par modification covalente
irréversible:protéolyse
De nombreux enzymes acquièrent leur pleine activité
enzymatique dès qu’ils se reploient spontanément en leurs
formes tridimensionnelles caractéristiques.En revanche ,les
formes reployées de nombreux autres enzymes sont
inactives jusqu’àce qu’elles soient activées par clivage d’une
ou de plusieurs liaisons peptidiques spécifiques .
Ce précurseur est appelé zymogène ou proenzyme.
Les caractéristiques de ce mécanisme:
Une source d’énergie n’est pas nécessaire pour ce clivage
C’est une modification qui ne peut avoir qu’une seule fois
dans la vie d’une molécule d’enzyme
La protéolyse spécifique est un moyen courant
d’activation des enzymes et d’autres protéines des
systémes biologiquses.Par example:
1. Les enzymes digestifs:qui hydrolysent les pr sont
synthétisés sous forme de zymogènes dans l’estomac et
le pancréas
2. La coagulation du sang:s’effectue par une cascade
d’activation protéolytique
3. Certaines hormones sont synthétisées sous forme de
précurseurs .ex:la calcitonine dérive de la
procalcitonine
4. Le collagène:pr fibreuse de la peau dérive du
procollagène
5. L’apoptose :est déclenchée par des enzymes
protéolytiques « caspases »
 Mécanisme de l’activation des zymogènes
digestifs:chymotrypsinogène

La première étape : est l'activation de la trypsine dans le duodénum.

Un hexapeptide est retiré de l'extrémité N-terminale du trypsinogène
par une entéropeptidase (une protéase sécrétée par les cellules
duodénales). Cela donne la trypsine active, qui active alors les autres
zymogènes par clivages protéolytiques spécifiques.
 La Trypsine active également d'autres molécules de trypsinogène par un
processus autocatalytique.

 Ensuite la chymotrypsinogéne est activée par la trypsine, cette

dernière clive la liaison peptidique entre Arg15 et Ile16 et convertit la
chymotrypsinogéne en une forme active appelée π
chymotrypsinogéne. Cette dernière agit à son tour sur d’autres
molécules de π chymotrypsine, coupant deux dipeptides Ser14- Arg15
et Thr147-Asn148.
 Le produit final de ce processus réactionnel et la protéase mature :l’α
chymotrypsine ,dans laquelle 3 chaines polypeptidiques :A,B,C sont
réunies pas deux pont dissulfures
Role de la protéolyse spésifique dans la
formation d’un site de fixation de substrat:
1. Le gr Nterminal de ILE16 formé par la coupure se tourne vers
l’intérieur et interagit avec l’aspartate 194 au sein de la molécule de
chymotrypsine
2. Cette interaction électrostatique déclenche de nombreux
changements de conformation spatiale :met192 se déplace de la
profondeur vers la surface ;et les résidus 187 et 193 deviennent plus
étirés.Ces changements entrainent la formation de spécificité pour le
substrat qui n’est pas totalement formé dans le zymogéne
3. L’état de transition tétrahédrique est stabilisé par des liaisons
hydrogènes entre l’atome d’oxygéne du carbonyl du substrat chargé
négativement et deux gr NH de la chaine principale de l’enz ;ce trou
oxyanion est incomplet dans le zymogène
4. Ces changements de conformation spatiale sont très localisés et
limités ;provoqués par l’hydrolyse d’une seule liaison peptidique
Inhibition de la protéolyse:

•La conversion d’un zymogène en une protéase par clivage d’une

unique liaison peptidique est un moyen précis de déclencher
l’activité enzymatique .Cependant ,cette étape est irréversible et
donc un mécanisme antagoniste est nécessaire pour créer
l’équilibre dans le processus biochimique les inhibiteurs
spécifiques des protéases.Par exemple:
Inhibiteur pancréatique de la trypsine:pr de 6Kd inhibe la trypsine
en se fixant ètroitement à son site actif
Alpha-1-antitrypsine:est une anti-protéase principale de la famille
des serpines(inhibiteur de la sérine protéase) qui protège le tissu
de la muqueuse de l'effet protéolytique de la trypsine et la
chymotrypsine par la formation de complexes molaires
Antithrombine Щ
• Le déficit en α1-antitrypsine a été associé
à de nombreuses maladies :
 Emphyséme
 Cirrhose
 Granulomatose de Wegener
 Pancréatite
 Calculs biliaires
Régulation par modifications covalentes:
A/La phosphorylation/Déphosphorylation:

• La phosphorylation est un mécanisme de régulation

pratiquement dans tous les processus métaboliques des
cellules eucaryotes
• Les enz qui catalysent cette réaction s’appellent :des
kinases(il ya plus de 550chez l’homme)
• Cette multiplicité d’enz permet aux régulations d’ètre
finement accordées à la spécificité
tissulaire,temporelle,ou de substrat.
• L’ATP est le donneur le plus commun du groupe
phosphoryl qui est transféré sur un groupe hydroxyl sur
l’un des trois AA (sérine,thréonine et thyrosine
 Les caractéristiques des réactions de
phosphorylation et déphosphorylation:
• Il est important de remarquer que la phosphorylation et la
déphosphorylation ne sont pas l’une l’inverse de l’autre.Toutes ces deux
sont irréversibles dans les conditions physiologiques.
• La phosphorylation n’aura lieu que grace à une kinase spécifique et
dépens de clivage de l’ATP;et la déphosphorylation ne s’effectura que
sous l’action d’une phosphatase les pr cibles se transforment d’une
maniére unidirectionnelle entre les deux formes.
• La vitesse des réactions dépend de l’activité de ces deux enz
protéine-OH+ATP

Protéine-OPO3+ADP E Libre
H2O

Protéine-OH+HOPO3
Les caractéristiques des réactions de phosphorylation et déphosphorylation :

• La phosphorylation est un moyen extrêmement efficace de contrôle de l'activité des protéines pour
plusieurs raisons:
1) Le groupe phosphoryle ajoute deux charges négatives et trois ou plusieurs liaisons
hydrogènes à la protéine modifiée. Ces fortes interactions peuvent modifier la
structure de la protéine, changer son activité de pleinement active à
complètement inactive ou vice-versa.
2) L'énergie libre de phosphorylation est grande. Cela signifie que l'équilibre peut être déplacé
presque complètement aux produits.
3) Phosphorylation et déphosphorylation peuvent avoir lieu dans moins d'une seconde ou sur
une période d'heures.
4) Phosphorylation évoque souvent des effets très amplifiés. Une seul kinase activée peut
phosphoryler des centaines de protéines cibles et ainsi de suite.
5) ATP est la monnaie de l’énergie cellulaire .l’utilisation de ce composé comme donneur de
groupe phosphoryle relie le statut énergétique de la cellule à la régulation du métabolisme.
6) La fixation de groupes phosphoryle sur des résidus d'acides aminés spécifiques d'une protéine
(sérine ,thréonine,tyrosine ) est catalysée par une protéine-kinase . La protéine
kinase est sous contrôle direct ou indirect d’une protéine kinase dépendante de
l’AMP cyclique(PKA), l’AMP cyclique étant le second messager d’une hormone H1
activatrice ou H2 inhibitrice de l’adénylate cyclase .
7) Ainsi, grâce à la phosphorylation –déphosphorylation, l’activité de l’enzyme est sous contrôle
hormonal.
• La glycogène phosphorylase existe sous deux formes interconvertibles :

La forme a , phosphorylée est active

la forme b,non phoshorylée est inactive

•  la glycogène phosphorylase a deux sous-unités, chacune avec un résidu

Ser spécifique qui est phosphorylée au niveau de son groupe hydroxyle
grâce a une phosphorylase kinase. Ces résidus de phosphate de serine
sont nécessaires pour une activité maximale de l'enzyme. Les groupes
phosphate peuvent être enlevés par hydrolyse par une enzyme appelée
phosphatase-phosphorylase:
• Phosphorylase a + 2H 2 O  phosphorylase b 2P +2P i
• (Plus actif) -------------------------------------- (Moins actif)
•  Dans cette réaction, la phosphorylase a est converti en
phosphorylase b par le clivage de liaisons covalentes de deux
sérine-phosphate.
•  La Phosphorylase b peut à son tour être réactivé par une autre enzyme,
la Phosphorylase kinase, qui catalyse le transfert de groupes phosphate
de l'ATP à des groupes hydroxyle des résidus Ser spécifiques dans
phosphorylase b:

• 2ATP + phosphorylase b  2ADP + phosphorylase a

• ------------- (Moins actif) --------------------------------- ----- (Plus actif)
• La phosphorylation (activation) de la glycogène phosphorylase kinase est
catalysée par une protéine kinase dépendante de l’AMP cyclique , dont
l’activité de l’AMP cyclique est sous contrôle hormonal, l’AMPc étant le
second messager de l’adrénaline et glucagon

•
En résumé :
 la phosphorylation / déphosphorylation est une :
modification covalente, réversible, soumise à un contrôle
hormonal et évoque souvent des effets amplifiés.
 B/ Adénylation:

•Adénylation, maintenant connu sous le nom AMPylation, est un procédé

dans lequel l'adénosine monophosphate (AMP) est fixée par
covalence à une chaîne latérale d'une protéine => modification de
la fonction de la protéine. Il s’agit d’une modification post-
traductionnelle qui est stable et réversible.

•Elle implique une liaison phosphodiester entre un groupe hydroxyle

de la molécule subissant l’adénylation et le groupe phosphate du
nucléotide monophosphate d'adénosine. Ce processus peut
intéresser des molécules telles que des résidus de la tyrosine.
•Les enzymes qui sont capables de catalyser ce processus sont
appelés « AMPylators » AMPylators (adényl transférases) sont des
enzymes qui catalysent AMPylation.
• Ces enzymes se sont révélées comparables aux kinases en raison de leur
activité d'hydrolyse de l'ATP et de transfert réversible du métabolite à une
chaîne latérale hydroxyle du substrat protéique. A ce jour, les AMPylators qui
ont été identifiés sont des protéines bactériennes
La glutamine synthétase (GS) est
une ligase qui catalyse la
réaction suivante :
Glutamate + ammonium + ATP-Mg
Glutamine + ADP + Pi
Le degré d’adénylation dépend du
rapport de la glutamine à α
cétoglutarate: plus ce rapport est
élevé plus le nombre de monomères
adenylés augmente, en produisant
ainsi la baisse d'activité de la
glutamine synthétase; plus le ratio
des monomères est moins adénylé
plus l'activité de la glutamine
synthétase est plus élevée. Un ratio
élevé est un signe de suffisance
d'azote cellulaire, tandis qu'un faible
rapport est la preuve d'un taux bas en
azote => nécessité de la fixation de
l'ammoniac par la glutamine
synthétase.
C/ ADP ribosylation:

• ADP-ribosylation est une modification post-traductionnelle potentiellement réversible, dans lequel

le fragment ADP-ribose est transféré à une protéine. On constate que dans quelques
protéines; l'ADP-ribose est dérivé de nicotinamide adénine dinucléotide (NAD).
• ADP ribosylation module l'activité de plusieurs enzymes impliqués dans le métabolisme d'ADN
(ADN ligase III , ADN topoisomérase,)
• Son mécanisme affecte des résidus particuliers : l'acide glutamique ou la lysine et l'arginine situés
au C-terminal de la protéine cible
• EXEMPLE:
1/Elle est responsable de l'action de certaines toxines bactériennes, telles que la toxine
cholérique, la toxine diphtérique ,Ces protéines de toxines sont des ADP-
ribosyltransférases qui modifient les protéines cibles dans les cellules humaines. Par
exemple, la toxine cholérique provoque une ADP ribosylation d'une protéine G
impliqué dans la régulation de l'adénylate cyclase , ce est une partie d'une voie de
signalisation, qui conduit à plusieurs réponses physiologiques et provoquant la
sécrétion de liquide massive de la muqueuse de l'intestin grêle, ce qui entraîne une
diarrhée mortelle et provoque parfois la mort
2/La résistance aux antibiotiques :Les bactéries, y compris les agents pathogènes et les
souches environnementales, ont une enzyme, « Arr », qui inactive la rifampicine par ADP
ribosylation et conférant ainsi la résistance aux antibiotiques
Mécanisme d’action:ex
Arginine adénosine-5'-
diphosphoribosylation (ADP-ribosylation)
est catalysée par une enzyme('ADP
ribosyltransférases) , qui se lient le NAD
dans une conformation étendue,
permettant à l'attaque nucléophile de l'un
des deux atomes d'azote terminaux du
groupe guanidino de l'arginine sur la
liaison β-N-glycosidique .
Le nicotinamide est libéré et une nouvelle
liaison N-glycosidique entre l'arginine et
l'ADP-ribose est généré avec une inversion
de la conformation à l'atome C1 'de l'ADP-
ribose à partir de bêta en alpha. Arginine
ADP-ribosylation peut être entièrement
inversée par des enzymes spécifiques ADP-
ribosylhydrolases. D'autres accepteurs
d'acides aminés, la cystéine ou asparagine,
sont ciblés par d'autres sous-familles de
ADP-ribosyltransférases via un mécanisme
de réaction similaire.
c/Farnésylation:
• C’est l’ajout d’un grp farnésyl ou géranyl-géranyl via une liaison
thioether,sur la fonction SH de Cys situés dans le domaine C-
terminal .Le résidu cys accepteur est localisé dans une séquence
consensus CA1A2X.
• Est une modification post-traductionnelle indispensable pour
assurer la bonne localisation des protéines impliquées dans la
transduction du signal de division et de survie cellulaire.
• Elle est catalysée par une enzyme appelée ; farnésyltransférase
(FTase) (EC 2.5.1.58) .c’est une métalloenzyme à zinc qui catalyse
l’introduction d’un groupement farnésyle à partir du
pyrophosphate de farnésyle (FPP) sur une . Cette enzyme a été
initialement étudiée pour trouver de nouveaux agents
anticancéreux et apparue alors comme une nouvelle cible
thérapeutique
• Les protéines RAS : jouent un rôle central dans la
transmission du signal qui font parti des facteurs de
croissance et de leur interaction avec des récepteurs
tyrosine kinases, aboutissants à la stimulation de la
transcription des gènes précoces.
• Le gène ras, dont la mutation activatrice est retrouvée
dans plus de 30 % des cancers humains, a fait l’objet
d’une attention particulière.
• La protéine Ras est une GTPase monomérique qui doit
être farnésylée pour exercer ses fonctions
transformantes. Aussi, des inhibiteurs de farnésyl
transférase (FTI) ont été développés afin d’inhiber
l’activité de Ras via l’inhibition de la farnésylation.
•  Les inhibiteurs de la farnésylation compte désormais
parmi les nouvelles cibles impliquées dans les maladies
parasitaires comme la maladie du sommeil ou le
paludisme
•  Les recherches sur les inhibiteurs de la FTase se sont
principalement orientées vers des inhibiteurs
compétitifs du motif CaaX terminal de la protéine ou du
motif FPP
•  En revanche, peu d’études ont été menées sur des
analogues de type bisubstrat c’est-
Les inhibiteurs de la farnésylation
compte désormais parmi les
nouvelles cibles impliquées dans
les maladies parasitaires comme la
maladie du sommeil ou le
paludisme et les cancers peu
évolutifs
 Les recherches sur les inhibiteurs
de la FTase se sont principalement
orientées vers des inhibiteurs
compétitifs du motif CaaX
terminal de la protéine ou du
motif FPP
 En revanche, peu d’études ont
été menées sur des analogues de
type bisubstrat c’est-à-dire
occupant les sites de liaison des
deux motifs.
D/Glycosylation:

• C’est la réaction dans laquelle un hydrate de carbone, à savoir un

donneur de glycosyle, est fixée à un groupe hydroxyle ou un
autre groupe fonctionnel d'une autre molécule (un accepteur de
glycosyle). En biologie, la glycosylation se réfère principalement
au procédé enzymatique ; La majorité des protéines synthétisées
dans le RE rugueux subissent une glycosylation. Celle-ci est la
plus importante modification post-traductionnelle d'une
protéine et est en outre un procédé très spécifique
• la modification de la structure des chaînes de glycane peut
conduire à une modification de l'activité de la glycoprotéine.
• Il existe différents mécanismes pour la glycosylation, bien que la
plupart partagent plusieurs caractéristiques communes
Les types de glycosylation:

N-glycosylation
N-glycosylation est le type le plus commun de liaison glycosidique ,C'est l'addition de
glucides aux chaînes peptidiques en croissance dès leur entrée dans la lumière du
réticulum endoplasmique. Au cours de cette réaction, un oligoside « N-acétyl-
glucosamine », se lie à un acide aminé asparagine (Asn). Cette réaction est catalysée par
une enzyme membranaire de type glycosyltransférase ,Le processus de N-glycosylation se
produit chez les eucaryotes dans la lumière du reticulum endoplasmique.
O-glycosylation
C'est l'addition de glucides au niveau des résidus -OH des acides aminés sérine et
thréonine des chaînes peptidiques présentes dans la lumière de l'appareil de Golgi. Cette
réaction est également catalysée par une enzyme de type glycosyl-transférase, et débute
en général par une N-acétyl-galactosamine.
C-glycosylation
C'est l'addition d'un mannose sur le carbone C2 du noyau indole du premier
tryptophane d'une séquence WxxW. Ce type de glycosylation a déjà été montré sur les
protéines suivantes : interleukine 12, ribonucléase 2, les fractions du complément C6, C7,
C8, C9.
• ChREBP Carbohydrate Response
Element-binding Protein
• , le médiateur des effets transcriptionnels
du glucose, a été récemment impliqué dans
le développement de la résistance à
l’insuline et de la stéatose hépatique chez
les souris obèse/diabétiques. L’activité de
ChREBP est stimulée par le métabolisme
du glucose qui contrôle sa localisation
nucléaire et son activité transcriptionnelle
en modulant sa phosphorylation.
Cependant, des données récentes
suggèrent que d’autres modifications post-
traductionnelles seraient nécessaires.
Notre hypothèse est que la O-glycosylation
(O-GlcNAc) dont les niveaux dépendent du
glucose et qui module l’activité de
nombreux facteurs de transcription, serait
impliquée dans la régulation de ChREBP
Régulation par les isoenzymes:

Les isoenz sont des enz qui différent par des

séqueces d’AA;mais qui catalysent la méme réaction.
Ils présent des paramétres cinétiques différentes .Ils
sont codés par des génes différents
Ils peuvent étre distingués généralement les uns des
autres par leur propriétés biochimiques telles que la
mobilité éléctrophoritique.
L’existence de ces isoenz permet une régulation fine
du métabolisme qui répondre aux besoins d’un tissu
ou d’un stade de dévelopemment donné
Exemple :l lactate déshydrogénase LDH
Elle est formée de deux chaines
polypeptidiques
isoenzymatiques:l’isoenzume H est
fortement exprimé dans le ceour alors que
l’isoenzymes M est fortement exprimé dans
le muscle squelettique (séquences d’AA
sont identiques à 75% et plusieurs
combinaisons sont possibles)
Les deux isoenz différent par le fait que
des taux élevés de pyruvate inhibe
allostériquement isoenz H4 mais pas
l’isoenz M4.Les autres combinaisons ont
des propriétés intermidiaires
L’isoenz M4 fonctionne de façon optimale
dans le milieu anaérobique du muscle
squelettique en exersice intense;tandis que
l’isoenz H4 fonctionne de façcon optimale
dans le milieu aérobie du muscle cardiaque
Régulation allostérique:

• Dans la régulation allostérique, un métabolite de la voie

réactionnelle peut se fixer de façon non-covalente à l'enzyme et
ainsi moduler son activité catalytique. Ainsi, dans ces systèmes
multi-enzymatiques, le produit final de la chaîne de réactions sert
d'inhibiteur spécifique à une enzyme du début de la chaîne.
• Le taux de catalyse dans la cascade est déterminé par la
concentration du produit final, dans un phénomène appelé rétro-
inhibition. L'enzyme ainsi modulée est appelée enzyme
allostérique. L'enzyme allostérique possède un site actif et un site
modulateur sur lequel vient se fixer l'effecteur. Les enzymes
allostériques sont en général complexes, formées de plusieurs
sous-unités, régulatrices et catalytiques
Exemple, l’aspartate transcarbamoylase (ATCase)
L'ATCase catalyse la formation de N-carbamoyl aspartate à
partir de carbamoyl phosphate et d'aspartate.

C'est la première étape dans la cascade de synthèse

du nucléotide cytidine triphosphate (CTP).
L'ATCase est constituée de 6 sous-unités
régulatrices et de 6 sous-unités catalytiques.
L'analyse cinétique de l'activité enzymatique a
montré 3 caractéristiques :
1) La coopérativité positive du substrat, c'est-à-
dire que la fixation d'un premier substrat dans un
des 6 sites actifs de l'enzyme facilite la fixation du
substrat dans les 5 autres sites actifs. Ceci génère
une courbe sigmoïde – voir la cinétique de la page
suivante. Ainsi, une faible augmentation dans la
concentration du substrat provoque une forte
augmentation du taux de catalyse
La courbe hyperbolique
correspond à celle de la
cinétique michaelienne (n=1)
tandis que les courbes
sigmoïdes montrent la
cinétique correspondante à
l’enzyme sous forme de dimère
(n=2), trimère (n=3), et
tétramère (n=4).
2
2) Une régulation allostérique
(rétro-inhibition) par le
nucléotide CTP. CTP réduit le
taux de catalyse.
3) Une régulation positive par
le nucléotide ATP, qui
augmente le taux de catalyse.
Il semble que l’ATP
compétitionne avec le CTP
pour se fixer au site
modulateur.
L'interaction allostérique change la conformation des sites de
liaison du substrat. Selon la théorie de l'allostérie, chaque
sous-unité catalytique peut exister sous une forme T (basse
affinité pour le substrat) ou sous forme R (haute affinité pour
les substrats ou des analogues comme phospho-noacetamide
(PAM) et malonate (MAL)).
Lors de la transition T en R, la séparation entre les rimères
catalytiques et par les sous-unités régulatrices est de 12Å et
4Å respectivement le long de l'axe 3 et elle est couplée à une
légère réorientation des trimères et des sous unités
régulatrices.
- NB : la transition T en R conserve la symétrie D3 du
complexe
Le CTP maintiendrait les sous-unités à l'état T (inhibition),
alors que l'ATP les maintiendrait à l'état R (stimulation)
Les deux états sont dus à une transition de la structure
quaternaire de l'enzyme qui modifie la structure du site actif
et ainsi change la capacité de liaison du substrat et sa
catalyse.
Les changements tertiaires (dans une sous-unité) et
quaternaires (entre les sous-unités) manifestés ne sont pas
indépendants; ils sont fortement couplés dû à des contacts
étroits entre sous-unités.
L’état T et R représentent un équilibre contrôlé par la force
de la liaison de chacun des ligands.
Deux modèles expliquent cette transition : le modèle
concerté (ou symétrique) et le modèle séquentiel.

Dans le modèle concerté, toutes les sous-unités d'une

enzyme doivent conserver la symétrie moléculaire et par
conséquent elles sont toutes en même temps au même état T
ou R, à un moment précis. L'enzyme globale existe donc sous
forme T ou R, puisque c’est seulement dans cette
configuration qu'il y a la conservation de symétrie par toutes
les sous-unités. Ainsi, la fixation du substrat dans un
premier site actif provoque une transition telle que toutes les
sous-unités de l'enzyme deviennent sous forme R et ceci
représente l’état de compétence catalytique. L’effecteur se lie
à l’état T ou R de préférence et ainsi exerçant son rôle
d’inhibiteur ou d’activateur
Dans le modèle séquentiel, chaque sous-unité à la possibilité d'être sous forme R
ou T, indépendamment des autres sous-unités. L'enzyme est constituée d'un
mélange de sous-unités sous forme T et R. La liaison d'un premier substrat
change la structure de la sous-unité à laquelle il s’est fixé (R), alors que les autres
sous unités acquièrent une affinité intermédiaire entre celles observées à l'état T
et R.
La liaison du ligand induit donc progressivement des changements
conformationnels dans les sous-unités, les changements les plus importants se
produisant au niveau des sous-unités qui ont lié le ligand. Le couplage entre les
sous-unités n’est pas nécessairement assez fort pour préserver la symétrie de
l’oligomère comme c’est le cas dans le modèle symétrique.
PKA:example d’intégration de régulation
allostérique et de phosphorylation
• Dans les situations dangereuses les muscles sont préparés à l’action.Cette
préparation est le résultat de l’activité de la protéine kinase A sous l’action de
l’adrénaline qui induit la formation de l’AMPc(un messager intracellulaire
formé par la cuclisation de l’ATP)qui active ensuite la PKA par le mécanisme
suivant:
• La protéine kinase A des muscles est constituée deux types de sous unités:
R sous unité régulatrice de 49kd; et C sous unité catalytique de 38kd.
Enl’absence de l’AMPc la PFKA forme un complexe R2C2 enzymatiquement
inactif.Alors que la fixation de deux molécules d’AMPc conduit à la
dissociation du complexe R2C2 en une sous unité R2 et deux sous unités C
libres enzymatiquement actif.La fixation du AMPc à la sous unité régulatrice
lève l’inhibition par cette derniére sur la sous unité catalytique.
La PKA et la plupart des autres kinases possédent des formes isoenzymes qui
permettent une régulation finement adaptée pour satisfaire les besoins
cellulaires.
 Conclusion:

Régulation de l’activité enzymatique

Conditions locales Modification structurale de l’enz

Modofication Modification non

Température
covalente: covalente:
Ph
Irréversible:protéolys Ribosylation
Concentration en subsrat
e Farnésylation
Co-facteurs
Réversible:phosphory glycosylation
activateurs:/inhibiteurs
lation