TD II : CELLULE BACTÉRIENNE

structures et fonctions
I.
1 . Suspension A :
Bacillus subtilis dans eau + lysozyme
éclaircissement rapide avec une diminution d’absorbance atteignant 97%
Lysozyme → détruit le peptidoglycane,
bactérie sans paroi en milieu hypotonique → gonflement de la cellule
puis éclatement → lyse cellulaire

Suspension B :
Bacillus subtilis dans une solution aqueuse de saccharose + lysozyme
une diminution d’absorbance atteignant 20%
Lysozyme → détruit le peptidoglycane,
bactérie en milieu isotonique → formes sphériques : Protoplastes

2. Rôles de la paroi mis en évidence :

- Forme
- Résistance à la pression osmotique
II.
Deux cultures de Corynebacterium diphteriae, bactérie à Gram
positif.
Culture A en bouillon tryptose
Culture B en bouillon tryptose + lysozyme

1. A l’examen microscopique on observe :

- Pour la culture A, des bacilles à Gram positif aux extrémités -
renflées : forme normale de ces bactéries.
Elles évoluent dans un milieu de culture favorable à leur
croissance
- Pour la culture B
Présence du lysozyme → destruction du peptidoglycane
→ dans milieu hyper ou isotonique
→ formes sphériques : protoplastes
 Structure du peptidoglycane

Lysozyme hydrolyse la muréine au niveau des liaisons ß osidiques (1→4)

2. Placées dans un milieu hypotonique
les bactéries de la culture A → rien
les bactéries de la culture B → lyse de la bactérie
explication……..
III. Lequel des énoncés suivants n’est pas vrai concernant la paroi
des bactéries à Gram-négatif
(Mettez x en face de votre choix).
- Elle contient une membrane externe
- Elle contient une mince couche de peptidoglycane
- Son peptidoglycane est hydrolysé par le lysozyme
- Elle contient des acides teichoïques
- Elle contient un lipopolysaccharide
 
III. Lequel des énoncés suivants n’est pas vrai concernant la paroi
des bactéries à Gram-négatif
(Mettez x en face de votre choix).
- Elle contient une membrane externe
- Elle contient une mince couche de peptidoglycane
- Son peptidoglycane est hydrolysé par le lysozyme
X - Elle contient des acides teichoïques
- Elle contient un lipopolysaccharide
 
IV
1.Traitement de la culture bactérienne : 80°C pendant 10 minutes
→ mort des cellules végétatives.
Seules des spores résistent à ce traitement.
Ces spores stimulées par ce traitement germent → Cellules végétatives
Cellules végétatives → se multiplient → colonies

2.
- Bacillus → bactéries aérobies facultatives ou aérobies strictes
- Clostridium → bactéries anaérobies strictes;
- Sporosarcina → bactéries aérobies strictes
- Sporolactobacillus → bactéries aérobies facultatives ou mircoaérophiles
V.
Interprétez cette observation

A Endospore

En 72 h :
les conditions du milieu de culture devenues défavorables:
épuisement des nutriments, accumulation de produits toxiques,
évolution défavorable de l’environnement.
Ce qui déclenche le phénomène de sporulation → endospores
.
Que montre cette observation ?

B phase exponentielle
de croissance

En 18 h :
Il s’agit d’une culture de la même espèce bactérienne
Cellules végétatives de Bacillus subtilis
Les bactéries sont en phase exponentielle de croissance…..
VI . Différencier entre chacun des termes des paires
suivantes :
- Flagellation péritriche et flagellation amphitriche
- Pili communs et pili sexuels
 Flagellation péritriche
(présence des flagelles sur toute la surface cellulaire :
déplacement hélicoïdal)

Flagellation amphitriche
(présence d’un flagelle à chaque pole :
déplacement oscillant)

Pili communs sont : Pili sexuels sont

- plus courts - plus longues
- plus nombreux - Moins nombreux
- Adhérent aux surfaces - Présentent un renflement à l’extrémité
- propriétés hémagglutinantes - fixation des bactériophages
VII . Compléter les propositions suivantes :

Les pili sexuels sont plus longs et beaucoup moins nombreux que
les pili communs ( fimbriae)

leur extrémité est …………………………………………………

........................................................................................................
Ils interviennent …..........................................................................
…………………………………………………………………….
VII . Compléter les propositions suivantes :

Les pili sexuels sont plus longs et beaucoup moins nombreux que
les pili communs ( fimbriae)

leur extrémité est renflée

Ils interviennent au cours de la conjugaison bactérienne qui se

fait par fixation de extrémité du pilus de la bactérie male car seuls
les males en possèdent sur la bactérie femelle suivie de transfert
de L’ADN bactérien du male à travers le canal du pilus
A l’extrémité renflée de ces pili peuvent se fixer spécifiquement
certains phages qui injectent leur matériel génétique par le canal
du pilus

(cours page 35 paragraphe II 6.3 les pili)

STOP
Lequel des énoncés suivants ne s'applique pas au peptidoglycane
de la paroi bactérienne?
(Mettez x en face de votre choix).
Le peptidoglycane :
 est composé d’osamines et d'acides aminés ;
 est présent chez les mycoplasmes;
 est hydrolysé par le lysozyme;
 empêche la lyse de la bactérie en milieu hypotonique.
Parmi les bactéries suivantes, laquelle ou lesquelles
produisent des spores ?
( Mettez x en face de votre ou vos choix)

Streptococcus
x Clostridium
x Bacillus
Escherichia coli
Pili communs sont :
- plus courts
- plus nombreux
- Adhérent aux surfaces
- propriétés hémagglutinantes
Pili sexuels sont :
- plus longues
- Moins nombreux
- Présentent un renflement à l’extrémité
- fixation des bactériophages
Conversion lysogénique et lysogénie
apparition de ppté (s) nouvelle (s)

Prophage et plasmide
•origine: (ADN) virale ( ADN) bactérienne
•Généralement intégré au extrachromosomique, circulaire
Chromosome bactérien
•Apparition de nouvelles pptés supporte des déterminants génétiques
Seulement qd il y a conversion lysogènique
• se multiple au même temps que le chromos. Se multiple indépendamment du
chromosome
1.1/Action du tryptophane
2.1 a - S.Typhi nécessite le tryptophane
b- facteur de croissance
Définition:
c- auxotrophe

3.2 9ml +0,9ml + 0,1ml solution tryptophane de concentration 0,3g/l

0,3g/l → 300mg/l
On ajoute 0,1ml
300mg → 1000 ml
X mg → 0,1 ml => X= 0,03mg
Ces 0,03 mg → 10ml
donc dans 1000ml on a : (0,03x1000)/10 = 3mg
[try] = 3mg/l
Voir page 11 TDVI : NUTRITION ET
METABOLISME
I. On se propose d’étudier expérimentalement l’action de deux substances, le
tryptophane et le chloramphénicol, sur la croissance d’une souche de Salmonella
typhi.
I.1/ Action du tryptophane
1. On ensemence, en parallèle avec une suspension de S.typhi, un milieu minimum dépourvu de
tryptophane, un milieu minimum contenant 30 mg/l de tryptophane et un milieu minimum contenant 1ml
d’un hydrolysat protéique. Au bout de 24 heures d’incubation, on observe une croissance sur le milieu
contenant le tryptophane et celui contenant l’hydrolysat protéique.
Que peut-on déduire ?
Comment appelle-t-on une substance telle que le tryptophane ? En donner une définition précise.
Comment qualifie-t-on le comportement nutritionnel de S.typhi vis-à-vis du tryptophane ?
2. On ensemence un inoculum de 105 bactéries dans un tube contenant 9 ml de milieu minimum
liquide auquel on ajoute 0,1 ml d’une solution de tryptophane à la concentration 0,3 g/l et 0,9 ml d’eau
distillée.
Calculer la concentration du tryptophane en mg/l de milieu.
A Endospore

En 72 h., les conditions du milieu de culture devenues défavorables:

Épuisement des nutriments, …
Ce qui déclenche le phénomène de sporulation → endospores
2.
3. Quels sont les rôles et les propriétés de cet élément ?
1.Thermorésistance
2. Résistance aux agents physicochimiques
3. Dès le début de la sporulation, de nombreuses bactéries se
mettent à synthétiser des antibiotiques et d'autres substances
comme les protéases et les rubonucléases
B - Il s’agit d’une culture de 18 h de la même espèce bactérienne.
Que montre cette observation ?

Cellules végétatives de Bacillus subtilis

 IV – NUTRITION ET CROISSANCE BACTERIENNE

I - Proteus vulgaris est repiqué sur différents milieux de culture

liquides M1, M2, M3 et M4 dont la composition est la suivante :

Ingrédients communs :

NH4CL ------------------ 1g
K2HPO4 ----------------- 1g
MgSO4 7H2O ---------- 200 mg
FeSO4 7H2O ----------- 10 mg
CaCL2 ---------------- 10 mg
Oligo-éléments --------- 0,15 mg
Eau ------------------ 1000 ml
Ingrédients ajoutés :

Milieu M1 : aucun

Milieu M2 : glucose (5 g)
Milieu M3 : glucose (5 g), acide nicotinique (0,1 mg)
Milieu M4 : glucose (5 g), extrait de levure (5 g)
Au bout de 24 heures d’incubation, on observe une culture sur M3 et
M4 mais
rien sur M1 et M2.
1. A quels types de milieux appartiennent M1, M2, M3 et M4 ?
2. Précisez le ou les rôle(s) des constituants de ces milieux.
3. Donnez la définition, la nature chimique et les propriétés des
substances jouant le même
rôle que l’acide nicotinique.
4. Quel est le rôle joué par l’extrait de levure dans M4 ?
1 M1, M2 et M3 sont des milieux de culture synthétique
M4  semi synthétique
2 Glucose  → source de carbone et source d’énergie
NH4Cl → source d’azote  pour synthétiser les protéines ….
K2HPO4 ……… CaCL2 : sont des sels minéraux
Le soufre est présent dans certains acide aminés et donc dans les
protéines
sous formes de groupements thiols (-SH)
Le phosphore fait partie des acides nucléiques, de nombreuses
coenzymes et de l’ATP.
Le sodium, le potassium, le magnésium et le chlore jouent un
rôle dans l’équilibre physico-chimique de la cellule.
Oligo-éléments  jouent un rôle de cofacteurs ou d’activateurs
enzymatiques.
Acide nicotinique  : Facteur de croissance
Extrait de levure : Apporte le facteur de croissance.
3. Définition : Substance organique indispensable à la croissance
bactérienne et que la bactérie est incapable de synthétiser.
Nature chimique :  a.a., bases puriques et pyrimidiques et
vitamines.
Propriétés : action à de faibles concentrations et étroite
spécificité
4 Rôle de l’extrait de levure : Apport de l’acide nicotinique.
A- Mesure de la croissance
1- Méthodes directes par mesure du nombre de cellules.
a - Numération totale en dénombrant au microscope ou avec des
compteurs spéciaux les individus viables ou non.
b - Numération viable
- Ex 1 : en dénombrant les colonies auxquelles ont donné
naissance les bactéries viables présentes dans les dilutions
successives du milieu nutritif étalées sur un milieu solide; en
partant du principe qu'une bactérie viable donne naissance à
une colonie (voir TP)
- Ex 2 : Epifluorescence
 2 - Méthodes indirectes
a - Mesure de la biomasse par :
- Détermination du poids sec
- Mesure du trouble
L’absorbance A (ou densité optique) mesure la capacité d'un
milieu à absorber une partie de l’intensité d’un faisceau de la
lumière qui le traverse en ligne droite.
la loi de Beer-Lambert A (sans unité) = log (I0/I)  = k .C
k : coefficient d’absorption
C: concentration cellulaire
Technique
- inapplicable avec des milieux très troubles ou très colorés.
- incapable également de mesurer des concentrations faibles
(inférieures à106 bactéries/ml
 
b- Mesure de l'activité cellulaire.

Exemples :
- Mesure de la consommation du substrat
- Mesure des constituants de la cellule
- Mesure des produits d'excrétion
- Mesure des variations physicochimiques du milieu
 Croissance bactérienne en fonction du temps
8
7
6
5
log N

4
3
2
1
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
temps en heure

Nombre élevé de bactéries

La phase exponentielle est représentée par une droite, ce qui permet d’en tirer les paramètres
caractérisant la croissance (r et G)
b. Caractériser chacune des phases de la croissance d’E.coli dans le milieu utilisé

Phase de latence de t0 à t2 caractérisée par r = 0 et N = N0

Phase d’accélération
r↗ et N ↗
Phase exponentielle ou logarithmique  caractérisée par
log N est proportionnel à t
N augmente de façon exponentielle
r maximal et constante
G minimal et constant
 Phase de décélération
faible augmentation de N et r↘
Phase stationnaire maximal :
N est à son maximum et s’y maintient
N=N max. =cte. et r=0 ou…….
Phase de déclin
N ↘ de façon exponentielle
r = taux horaire de croissance
µ = taux népérien de croissance µ = r.log2
r = µ / log 2
C . Calculer le taux horaire de croissance pendant la phase
exponentielle.
En déduire la valeur du temps de génération pendant cette
même phase.
On prendra : log102= 0,30

logN6 - log N5 4,4 -3,5 0,9

r = ──────── = ───── = ── = 3 divisions / h.

(t6 - t5) log 2 1. log2 0,3

h 60
G = ─── = ── = 20 min.
n 3
 B variation de r en phase exponentielle en fonction
de la concentration de guanine

4
3.5
3
2.5
2 Series1

1.5
1
0.5
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9

concentration de guanine ( µg/ml)

a) Lorsque [ guanine ] augmente , r augmente jusqu’à une valeur limite où [ guanine ] = 0,7 µg/ ml
 variation de r en phase exponentielle en fonction de la
concentration de guanine
4
3.5
3
2.5
2 Series1
1.5
1
0.5
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9

concentration de guanine ( µg/ml)

b) On a trouvé au paragraphe A : r = 3div/h. ce qui correspond [ guanine ] =0,37 µg/ml

Commenter l’allure des courbes
Figure1
E.coli sur milieu synt. + glucose → croissance
E.coli sur milieu synt. + xylose → croissance
E.coli prélevée en phase exponentielle sur milieu synt. + glucose
(milieu semblable) → pas de phase de latence ,
elle continue de se x avec r max.
E.coli prélevée en phase exponentielle d’un milieu clucosé → sur
milieu synt. + xylose → présence d’une phase de latence nécessaire
à la synthèse d’enzymes pour l’utilisation du xylose
Figure2
E.Coli utilise le glucose
→ après épuisement de ce sucre adapte son métabolisme à

l’utilisation du xylose
c'est le phénomènes de Diauxi
STOP
 Croissance d'E.coli → série 1
Croissance d' E.coli en présence à t = 6h de bactériophages spécifiques
de cette souche bactérienne → série 2

5
Series1
logN

4
Series3
3

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18

Temps en heure

b) L’action du bactériophage utilisé sur E.coli est une action lytique

On appelle ce bactériophage , bactériophage virulent
 Les milieux de cultures

Sommaire
1 Notion de milieu minimum 
2 Milieu de culture empirique 
3 Milieu de culture sélectif 
4 Milieu de culture enrichi 
5 Milieu ordinaire 
6 Milieu synthétique 
7 Milieu semi-synthétique 
8 Voir aussi 
 Milieu minimum
C’est un milieu comportant les éléments chimiques strictement
nécessaires à la croissance bactérienne, sous une forme utilisable
par des bactéries n'ayant pas d'exigence particulière.
Composition d'un milieu minimum : 
Une source de carbone et d'énergie, généralement le glucose. 
Une source de potassium et de phosphore : K2HPO4 
Une source d'azote et de soufre : (NH4)2SO4 
Une source de magnésium : MgCl2 
Une source de calcium : CaCl2 
Une source de fer : on emploie le citrate de fer (le citrate a pour rôle de
maintenir le fer en solution)
Une source d'oligo-élements : sels de Cu, Zn, Co, Ni, B, Ti 
Une source d'eau, indispensable à toute forme de vie : on utilise l'eau
distillée (stérile) 
Un tampon Ph : il permet de maintenir un pH correct voire optimum :
KH2PO4 par exemple 
En l'absence de l'un de ces composants, les bactéries ne se développent
pas, car elles ne peuvent synthétiser ces produits. 
C'est l'adjonction de facteur(s) de croissance approprié(s) qui permet à
des bactéries exigeantes de se développer. 
Milieu empirique 
C’est un milieu dont on ne connaît pas exactement la composition.
Ainsi, dans le milieu type cœur-cervelle, il y a :
- l'eau,
- l'agar-agar,
- l'hydrolysat de cœur et de cerveau sans que l'on en
connaisse les aspects qualitatifs et quantitatifs.
Il sera donc utilisé uniquement pour la croissance des bactéries,
il n'a pas d'effet sélectif.
Milieu sélectif 
C'est un milieu qui permet la culture uniquement de certains genres
de micro- organismes.
Pour cela on ajoute des éléments qui inhibent la croissance des
micro-organismes indésirables comme :
- le chlorure de sodium à forte concentration,
- le thiosulfate de sodium,
- le cristal violet...
Les éléments ajoutés sont sélectionnés selon les caractéristiques du
micro-organisme recherché.
Ces milieux sont utilisés pour l'analyse d'un prélèvement
polybactérien.
Exemples de milieux sélectifs :
- milieu S-S : il ne permet la croissance que des Salmonelles et
des Shigella 
- milieu de Sabouraud : il permet la pousse des champignons 
- gélose Kanamycine - Vancomycine, dite "Kana-Vanco" ou KV :
elle empêche la pousse des bactéries à Gram positif (action de la
vancomycine) et de la plupart des entérobactéries (action de la
Kanamycine). Sur ce milieu, poussent préférentiellement des
bactéries anaérobies strictes. 
Milieu enrichi 
Il contient, outre les composants de base, des composants
indispensables aux bactéries, que celles-ci ne peuvent pas synthétiser.
Ce sont des milieux utilisés pour l'obtention des bactéries dites
exigeantes.

Exemple :
- milieu au sang frais (le sang est riche en nutriments divers).
- milieu avec du sérum,
- mileiu avec du jaune d'œuf.
Milieu ordinaire 
Ils permettent la culture des bactéries qui n'ont pas d'exigence
nutritive particulière, (bactéries non exigeantes).
La composition de ces milieux est simple et sans effet de sélection.
Ex : la gélose nutritive,
Milieu synthétique 
Ce sont des milieux dont on connaît bien la composition chimique,
de point de vue qualitatif que quantitatif.
Ils sont utilisés dans la recherche d'une réaction enzymatique précise.
Ce sont les milieux les plus couramment utilisés.
Ex : tryptophane pour révéler la présence de tryptophanase
(enzyme) par la production d'indole.
Le tryptophane y est en quantités suffisantes pour permettre un
résultat interprétable.
il n'en aurait pas été de même si le milieu n'avait contenu que de
l'hydrolysat de viande de bœuf.
Milieu semi-synthétique 
On ne connaît leur composition exacte que pour certains
composants (d'un point de vue quantitatif, pour les produits ayant
un intérêt, comme les facteurs de croissance.)
Les autres composants étant présents de manière empirique. 
Milieu d’enrichissement 
Il favorise la croissance du germe recherché.
cette étape se réalise en milieu liquide avec qui possède des
agents sélectif du germe recherché et des inhibiteurs des autres