Les milieux de culture en bactriologie

1- Dfinition
Un milieu de culture est une prparation au sein de laquelle des micro-organismes peuvent se multiplier. Il doit donc satisfaire les exigences nutritives du micro-organisme tudi ce qui implique : - couvrir les besoins en ions minraux, en facteurs de croissance, apporter la source de carbone et dnergie ; - prsenter un pH voisin du pH optimal ; - prsenter une force ionique optimale le milieu peut !tre isotonique mais ce nest pas obligatoire".

2- Les diffrents types de milieux

Il existe une grande varit de milieux de culture en rapport avec la diversit des exigences nutritives des microorganismes. #n distingue gnralement : les milieux synthtiques de composition exactement connue, qualitativement et quantativement. $es milieux sont surtout utiliss pour ltude des bactries autotrop%es ou pour tudier les besoins nutritifs dun germe. Ils sont rarement utiliss en routine & lexception de quelques uns : $itrate de 'imons, $itrate de $%ristensen, Ure-(r)ptop%ane* Les milieux empiriques de composition connue seulement avec approximation car dpendant des mati+res premi+res utilises : extrait de viande ou de levure, peptones, sucres et ventuellement liquides biologiques srum, sang*" mais qui conviennent aux micro-organismes tudis. $e sont les milieux les plus emplo)s au,ourd%ui. -xemple : ./, $olumbia, 0assner, (r)pt)case so,a, $%ocolat, *

Une autre distinction de milieu se fait par la consistance de ceux-ci. -n effet, les micro-organismes se dveloppent parfaitement dans les milieux liquides mais lisolement bactrien ncessite des milieux solides afin de sparer les diffrents germes prsents dans un prl+vement. #n obtient les milieux solides en a,outant un agent glifiant & un milieu liquide. .e glifiant le plus utilis est lagar-agar ou glose : il sagit dun pol)galactoside sulfat prsentant la proprit de former avec leau un gel solide & une temprature infrieure & environ 12 3$ tout en tant liqufiable par bullition, auquel cas, il reste en surfusion liquide" ,usquaux environs de 453$. 6autre part, tr+s peu de micro-organismes sont capables d%)drol)ser lagar. Il sagit donc du procd le plus utilis pour fabriquer des milieux solides, laddition de diverses autres molcules ne posant aucun probl+me particulier dans ce milieu aqueux. .es milieux solides destins & !tre couls en bo7te de 8tri ou en tube ont une teneur en glose asse9 leve :5 g.. -:" tandis que les gloses molles ou semi-solides sont peu gloses ; & 5 g..-:" et prsentent une consistance intermdiaire.

3- Description de quelques milieux 3-1 Les milieux non slectifs

#n regroupe sous ce vocable tous les milieux ne contenant aucune molcule in%ibitrice. Ils sont en gnral de prparation asse9 simple et gnralement peu co<teux. $es milieux contiennent une base nutritive constitue de molcules a9otes acides amins, facteurs de croissance diverses*" provenant de l%)drol)se de produit dorigine vivante animale, vgtale, m)clienne" comme les peptones, les extraits de viande ou de levure. 'ouvent, les milieux non slectifs comportent une molcule et son s)st+me de rvlation sucre le plus souvent" ce qui permet une premi+re discrimination des genres mais ce nest pas obligatoire. -xemple : La glose Mueller-Hinton
Infusion de viande de b=uf 8eptone de casine ?midon de ma@s ?gar ;22 ml..-: :>.5 g..-: :.5 g..-: :> g..-:

$e milieu ric%e est la glose de rfrence pour la ralisation dantibiogramme selon la mt%ode de Airb)-/auer. 'a composition notamment la concentration en magnsium, en calcium, en t%)mine et en t%)midine", son paisseur sont standardises norme standards B1-8 du C$$.'". Il permet la pousse de nombreux micro-organismes

3-2 Les milieux non slectifs enrichis

Ils sont obtenus en incorporant & un milieu de base adquat des liquides ou suspensions ric%es en molcules organiques diverses : du sang, du srum, du liquide dascite, de lextrait globulaire, des supplments pol)vitaminiques* .es qualits nutritives peuvent !tre amliores par dnaturation t%ermique des constituants, en particulier pour le sang. Ils permettent la pousse de nombreux germes exigeants ou tr+s exigeants. .es plus utilises sont les gloses au sang frais ou au sang cuit, et la glose c%ocolat. -xemple Les gloses au sang frais et chocolat .addition de sang au milieu de base peut avoir plusieurs buts : - apporter des facteurs de croissance ncessaire au micro-organisme tudi - neutraliser certains in%ibiteurs contenus dans les petones des milieux - neutraliser, du fait de laction perox)dasique et catalasique de l%moglobine, des ions superox)des ou des perox)des toxiques produits par le micro-organisme intressant en particulier pour les bactries catalase D comme les Streptococcaceae" 8ar ailleurs, il permet la lecture dun caract+re important lors de la dtermination du germe : l%mol)se. .e sang peut !tre dorigines diverses : c%eval, mouton, lapin, %omme, b=uf attention certains germes prsentent un t)pe d%mol)se sur un sang et un autre t)pe d%mol)se avec un autre sang". Il est & a,outer & raison de 5 & :2E au milieu de base $olumbia, (r)pt)case so,a, Bueller Hinton, c=ur cervelle". $elui-ci ne doit pas contenir de glucose, car il in%ibe les %mol)sines.

0lose au sang

0lose $%ocolat

3-3 Les milieux slectifs

.es milieux slectifs sont des milieux emp!c%ant la culture de certains micro-organismes. Ils sont utiliss pour lisolement bactrien dans des produits pol)microbiens. .a slection peut !tre c%imique ou antibiotique. $e sont des milieux ric%es ou non et donnant souvent un ou plusieurs caract+res bioc%imiques dorientations permettant une identification plus simple des germes. La glose Gassner .a glose de 0assner est une glose slective des germes 0ram ngatifs non exigeants Enterobacteriaceae, ibrionaceae, !seu"omonaceae, #lcaligenaceae" 'on activit slective est due au Faune mtac%rome. 8ar ailleurs, il contient du lactose et du /leu & leau indicateur pH" qui permettent de diffrencier les germes .?$(#'- G bleu" des germes .?$(#'- D ,aune".

'ouc%e .actose G

'ouc%e .actose -

Il existe de nombreux milieux a)ant le m!me pouvoir slectif que la 0lose de 0assner. $ertain utilise les m!me indicateurs dautre non. #n peut citer la glose rouge neutreHvert brillant, la glose Bac$onIe), le milieu de .vine ect*..

3-$ Les milieux "%enrichissement

.a prsence de certaines bactries & pouvoir pat%og+ne spcifique dans un prl+vement, a une signification pat%ologique indiscutable, m!me si elles sont peu reprsentes. $est le cas par exemple des 'almonella, des biot)pes entropat%og+nes, de &ersinia enterocolitica, des vibrions c%olriques ou encore des .isteria ou des -nterocoques. Juelques fois, leur proportion peut !tre minime par rapport & celle de la flore commensale et leur prsence ne peut !tre rvle par un isolement slectif". .absence de colonies suspectes sur lisolement slectif ne suffit pas pour affirmer labsence de ces bactries dans le prl+vement. $est pourquoi un enric%issement est mis en route en m!me temps que lisolement slectif". Enrichir cest augmenter la reprsentation !proportion" dun sous-groupe de micro-organismes dans un ensemble plus #aste$ Un milieu denric%issement runit deux caractristiques : il contient des molcules % action slecti#e in%ibant totalement ou partiellement la culture des micro-organismes non rec%erc%s ou utilise une temprature dincubation particuli+re, ou encore une atmosp%re particuli+re ; il est liquide bouillon" afin que son action slective sexerce sur une population importante et %omog+ne.