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Quest-ce que la spectromtrie de masse ?

Cest une mthode de mesure des rapports masse-sur-charge (m/z) de molcules individuelles et ionises

Pr. CHRAIBI (FSSM)


Spectro de masse
resum du cours

Vocabulaire et Units : Unit de masse


me
Unit de masse atomique : u m a, note u dfinie comme 1/12 masse d un atome de carbone 12
-3
-1
23
-27
1 u = 1 Da = 1/12 .12 . 10 kg.mole / N (N = 6, 022045 . 10 )
Et donc:
1 Da = 1,66054 . 10 kg
Isotopes / Abondances isotopiques

Massif isotopique

Profil isotopique

Elments chimiques existent sous forme de


diffrents isotopes
12
C
= 12,000000 (98,90%)

Sur un spectre de masse, on observe plusieurs pics m/z


correspondant la combinaison des diffrents isotopes,
soit plusieurs possibilits massif isotopique

Il reflte labondance isotopique de la molcule.


+ les masses des peptides augmentent + la quantit
dincorporation des isotopes augmentent.
Le pic monoisotopique diminue

13

= 13,003355 (1,10%)

= 1,007825 (99,98%)

= 2,014100 (0,02%)

16

17

O = 16,999131 (0,04%)

= 15,994915 (99,76%)

18

O = 17,999160 (0,20%)
14
N
= 14,003074 (99,63%)
15

= 15,000108 (0,37%)

Le massif isotopique donne une information de


- masse exacte : en mesurant le pic
monoisotopique
- masse moyenne : en mesurant la masse du
barycentre du profil isotopique
En fonction de la rsolution du spectrometre de
masse, ce massif peut tre dtecter

Dtermination de ltat de charge :


Mesure de lcart entre les pics du massif
1 da : 1+
0.5 da : 2+
0.33 : 3+

Schma dun spectromtre de masse

Ionisation des peptides et protines


Mode MS
Mode dionisation

MALDI
Matrix Assisted Lazer Desorption Ionization
Ionisation base sur lutilisation dune matrice :
Les peptides sont co-cristalliss avec la matrice (en
large excs) sur une cible. Peptides sous forme solide
Les ions se forment lors de tir laser sur le dpt:
La matrice absorbe lnergie du laser puis dsorption et
ionisation par protonation des molcules.

ESI
Electrospray Source Ionization
Les peptides ou protines arrivent sous forme liquide. A
lentre de la source, un sprayeur vaporise le liquide.
Sous laction conjugue de la pression dazote et du
chauffage, les goutelettes sont vapores, puis
explosent pour crer des ions multichargs

Type dions

En mode positif
MH+
Lensemble des peptides peuvent tre vus en une seule
analyse.

Gamme de masse

700 5000 da en m/z En rsolution mono-isotopique


Lionisation massive de matrice limite la mesure des
petites masses < 700 Da

En mode positif
Multichargs : (M+nH)n+
Principalement des MH2 2+ et MH3 3+
un mme peptide ou protine peut tre vu sous
diffrents tat de charge sur le mme spectre.
complexit de lanalyse ncessit de sparer la
mixture en amont : par gradient dhydrophobicit nano
HPLC
400- 2500 dalton en m/z En rsolution mono-isotopique
Ce qui correspond une masse de
800 Da pour un compos dicharg 2+
Et 4500 Da pour un compos 3 x charg 3+

Fragmentation des peptides


Mode MSMS
Les ions chargs peuvent tre fragments Information de squence et de PTM

Nomenclature lors de la fragmentation :


La charge va soit du cot Nter, soit du cot Cter : ceci
dtermine le type dions.
Le morceau charg est visible sur spectre

Ions y : charge positive cot Nter


et b : charge positive cot Cter
A noter :
Des ions Y-H2O et Y-NH2 peuvent tre observs.
Ions x : charge positive cot Nter
et a : charge positive cot Cter

Ions c : charge positive cot Nter


et z : charge positive cot Cter

Ions immonium

Ions internes

Ions satellites

A retenir
Fragmentation prfrentielle en fonction du
type dionisation

MALDI

ESI

Y, b, Y-NH2,Y-H2O,x,z,a,c,ions immoniums, d, v, w, et

Y, b, Y-NH2, Y-H2O, fragments internes, ions

fragments internes

immoniums