Microbio Chapitre 2 Structure Et Analyses Des Bactéries

Chapitre 2
Structure et analyse des bactéries

Généralités – microorganismes
• Acellulaires : virus – virologie & protéines Prions

• Unicellulaires
– Procaryotes : bactéries – bactériologie
– Eucaryotes :
• Levures & mycètes – mycologie
• Protozoaires – protozoologie (parasitologie)
• Pluricellulaires : parasites – parasitologie
– Microscopiques ou macroscopiques
– Helminthes = vers
– Arthropodes : insectes & arachnides
Microbiologie générale 2
Généralités : bactéries
• Généralement :
– Diamètre < 1 µm
– Microscope optique : à frais ou après coloration
– Détails de structure : microscopie électronique
Généralités : nomenclature des
bactéries
• Nomenclature internationale
• Nécessaire <> communication scientifique
• 2 mots latins - italique :
– 1er : majuscule - Genre
– 2ème : minuscule - espèce
– Exemple
• En pratique : termes communs
Généralités : classification des
bactéries
• Sur base de caractères phénotypiques :
– Morphologie
– Propriétés biochimiques
– Nature des Ag de surface
– Sensibilité aux ATB
– Autres
• Sur base de caractères génotypiques : étude du
génome bactérien
Morphologie générale des
bactéries
• 4 formes principales :
– Arrondies, sphériques ou coccoïdes = coques
– Allongées & droites = bacilles
– Allongées & incurvées = vibrions
– Allongées & sinueuses = spirilles & spirochètes
• Différentes possibilités d’arrangements
Morphologie générale : coques
• Formes arrondies, sphériques ou coccoïdes :

– Coccus = grain, baie
– = nom générique
– Multiplication selon 1, 2 ou 3 plans de division
– Taille moyenne : 0,8 à 1 µm avec des extrêmes de
0,5 à 2 µm
• Arrangements :
– Diplocoques : 2 coques
• Streptococcus pneumoniae, Neisseria spp
– Streptocoques : chaînettes <> plusieurs ÷ dans 1 plan
• Streptococcus spp., Enterococcus spp
– Tétrades : amas de 4 bactéries <> 2 plans de ÷
– Sarcines : amas réguliers, en 3 dimensions, de 8
bactéries <> 3 plans de ÷ ordonnées
– Staphylocoques : amas irréguliers <> 3 plans de ÷
anarchiques
• Staphylococcus spp., Micrococcus spp.
Morphologie générale
Morphologie générale : bacilles
• Formes allongées & droites :

– 1 seul plan de division
– Pas toujours limite franche entre bacilles & coques
– Différents types
• Différents types de bacilles :

– Coccobacilles
– Bacilles corynéformes
– « Vrais » bacilles
– Bacilles filamenteux
– Bacilles fusiformes
– Bacilles ramifiés
• Coccobacilles :
– Forme typique
– Grand nombre de bactéries pathogènes
– Ex.: Pasteurelles, entérobactéries (Escherichia coli,
Proteus, Klebsiella, …)
• Bacilles corynéformes :
– Coryne = massue
– Bacilles courts de forme irrégulière
– 1 extrémité en forme de massue ou de baguette de
tambour
– Ex. : Corynebacterium diphteriae
• « Vrais » bacilles :
– Forme régulière
– Longueur > largeur
– Taille variable
– Ex. : Clostridium spp., Bacillus spp., Listeria spp.,
Bacteroides spp., Pseudomonas spp.
• Bacilles filamenteux
– = très longs bacilles comme des fils
• Bacilles fusiformes
– Fusus = fuseau
– Bacilles ± longs avec extrémités effilées
• Bacilles ramifiés :
– Ressemblent à des mycéliums
– Ex. : Mycobacterium spp., Nocardia spp.,
Bifidobacterium spp.
• Arrangements :
– Diplobacilles
– Chaînettes (streptobacilles)
– En amas plus ou moins irréguliers (en lettres
chinoises)
Morphologie générale : vibrions
• Formes allongées & incurvées :

– Vibrio = qui bouge rapidement
– Bâtonnets recourbés en virgule/vis
– Courts (< 5 µm)
– 1 à 2 tours de spire
– Ex. : Vibrio spp., Campylobacter spp., Helicobacter
spp
Morphologie générale : spirilles &
spirochètes
• Formes allongées & sinueuses :
– Spirillum = petite spirale
– Spirilles : bacilles en longues spirales - nombreux
tours de spires lâches
– Spirochètes : spires serrées
• Spira = un tour ; chaeta = un cheveu
• Treponema spp., Brachyspira spp. & Serpulina spp. à spires
étroites & régulières
• Borrelia spp. à spires larges & régulières
• Leptospira spp. à spires étroites & irrégulières
Structure bactérienne
• Cellules eucaryotes <> procaryotes
Cellule
eucaryote
animale
Cellule
eucaryote
végétale
• Éléments constants ou obligatoires

• Éléments inconstants ou facultatifs
• Éléments constants ou obligatoires :

– Sauf exceptions
– Cytoplasme
– Membrane cytoplasmique
– Génome
– Paroi
– Autres
Structure bactérienne :
cytoplasme
• Limité par la membrane cytoplasmique
• Ribosomes
• Vacuoles
• Granulations
• Génome ou matériel génétique
– 1 chromosome : ADN double brin circulaire
– Parfois des plasmides
membrane cytoplasmique
• Proche de celle des cellules eucaryotes
• Rôles :
– Contient le cytoplasme
– Contrôle les échanges avec l’extérieur – barrière
sélective
– Siège de processus métaboliques
– Molécules - récepteurs
Structure bactérienne : paroi
• Chez toutes les bactéries sauf les Mycoplasmes

• Structure rigide
– <> forme de la bactérie
– Résistance à la lyse osmotique
• Constitué de peptidoglycane (PDG)

– Enorme macromolécule réticulée
– Chaines polysaccharidiques reliées par de courts
peptides
– Alternance N-acétylglucosamine & acide N-acétyl-
muramique
• Structure variable <> bactéries

• Différence à l’origine d’une coloration
primordiale en microbiologie
– Coloration de Gram
• Bactéries Gram+
• Bactéries Gram-
coloration différentielle - Gram
• Principe
• Mode opératoire
• Bactéries Gram+ :
– Cytoplasme – membrane cytoplasmique
– Paroi épaisse riche en PDG
– Coloration violette au Gram
• Bactéries Gram- :
– Cytoplasme – membrane cytoplasmique
– Paroi plus fine – peu de PDG
– Espace périplasmique
– Membrane externe riche en lipides
– Coloration rose au Gram
coloration différentielle - Gram
• Action contre le PDG :

– Lysozyme  coupure des chaines
polysaccharidiques
– Cible de certains ATB : inhibition de la synthèse
• Éléments inconstants ou facultatifs :

– Autres membranes : capsule
– Organes locomoteurs : cils, flagelles
– Pili
– Spores
Structure bactérienne : capsule
• Entoure la bactérie & recouvre la paroi

• Souvent épaisse
• Nature polysaccharidique – polypeptidique
• Rôle important dans le PP <> phagocytose
Structure bactérienne : cils –
flagelles
• Chez bactéries mobiles
• Appendices locomoteurs fins
• À l’extérieur de la membrane plasmique
• Distribution <> identification
– 1 seul à 1 extrémité : monotriche polaire
– 1 à chaque extrémité : amphitriche
– Touffe à 1 ou chaque extrémité : lophotriches
– Toute la surface : péritriche
fimbriae ou pili
• Eléments rigides + courts <> flagelles
• Nature protéique
• Pili I : adhésion
• Pili F = pili sexuels – rôle essentiel dans la
conjugaison
Structure bactérienne : spores
• Ou endospores
• Formes de résistance particulière
– Dormantes avec métabolisme inactif
– Si conditions favorables  forme végétative =
bactéries
– Extrêmement résistantes <> chaleur, dessiccation,
antiseptiques
– Totalement résistantes <> ATB
– Destruction par stérilisation à fortes T°
– Persistance dans l’environnement
– Ex.: Bacillus, Clostridium
Structure bactérienne : spores
• Position variable dans la bactérie

– Centrale
– Subterminale : proche d’une extrémité
– Terminale : extrémité
– Parfois spore déformante
Comment étudier les bactéries ?
• Soit avec un microscope

– Classique : morphologie
– Électronique : structure fine
• Soit observation des colonies en culture
Microscope
• Importance fondamentale pour étudier les

microorganismes
• Pour la théorie : optique du cours de Physique
• Pour la pratique : TP
Microscope optique
• Lentilles
– Concaves
– Convexes
• Focalise les rayons en un point spécifique = foyer
• Distance entre le centre de la lentille & foyer = distance
focale
Microscope optique
• 2 lentilles convergentes :
– Oculaires (loupe)  image agrandie
– Objectifs
• Distance focale très petite - proche de l’objet
•  image réelle renversée fortement agrandie
–  objet observé = image virtuelle renversée
• Grossissement total :
– Grossissement objectif x grossissement oculaire
Microscope optique
Microscope optique
• Description de la partie mécanique :

– Statif :
• Pied/socle
• Platine
• Potence
– Tube optique : porte-oculaire & porte-objectifs
– Vis de mise au point : vis macrométrique & vis
micrométrique
Microscope optique
Microscope optique
• Description de la partie optique :

– Objectifs sur le revolver : côté objet
– Oculaires : côté œil
– Condensateurs ou concentrateurs.
– Système d’éclairage
Microscope optique
• Technique d’utilisation du microscope

– 1) Réglage du champ lumineux
– 2) Mise au point – huile à immersion
– 3) Causes d’insuccès
– 4) Entretien
Microscope optique
• Différents types de microscope <> utilisations :
– À fond clair
– À fond noir
– À contraste de phase
– À fluorescence
– …
Microscope optique à fond clair
• Préparation colorée ou non  image foncée sur
fond brillant Lumière visible
660-780 nm
610-660 nm
560-610 nm
510-560 nm
450-510 nm
410-440 nm
380-410 nm
Microscope optique à
contraste de phase
• <> fond clair : améliore la visibilité des
préparations non colorées
Microscope optique à fond noir
• Préparation non colorée
fluorescence
• Objet vu <> émission de lumière
• Lumière fluorescente – fluorochrome
• Principe : échantillon + lumière UV
fluorescence
Lumière visible
660-780 nm
610-660 nm
560-610 nm
510-560 nm
450-510 nm
410-440 nm
380-410 nm
Observations microscopiques
des bactéries
• 2 possibilités :
– Observation directe = examen à frais
– Observation après fixation & coloration pour
•  visibilité
• Accentuer les particularités morphologiques spécifiques
• Conserver l’échantillon
Examen à frais
• Mode opératoire
• Lecture & conclusions
– Forme
– Mobilité
• Précautions spécifiques
Préparation des échantillons :
fixation
• Buts :
– Conservation et durcissement des structures
– Inactivation des enzymes
– Microorganismes tués & fixés à la lame
• Méthodes :
– À la chaleur
– Chimique
– Applications
– Avantages/inconvénients
coloration des échantillons
• Avec des colorants

• Différents types de colorations :
– Colorations simples
– Colorations différentielles
– Colorations de structures spécifiques
Les colorants
• Propriétés :
– Molécules colorées <> groupes chromophores
– Liaison aux cellules : interactions ioniques,
covalentes ou hydrophobes
• Colorants ionisables :
– Basiques : BM, CV, …
– Acides : éosine, fuchsine acide, …
Les colorants
• Ionisables basiques (BM, CV, ….) :

– Cationiques – charges +
– Fixation aux molécules chargées -
– Utilisation en bactériologie <> surface des bactéries
chargées -
Bactéries de la muqueuse buccaleMicrobiologie

- BM générale 69
Les colorants
• Colorants ionisables acides (éosine, fuchsine

acide, …) :
– Anioniques – charges - (-COOH, -OH)
– Fixation aux molécules chargées +
Hémalun-éosine Microbiologie générale 70

Les colorations simples
• 1 seul agent colorant

• Souvent utilisées pour les microorganismes
•  forme & arrangement
– Exemple : coloration au BM
Les colorations différentielles
• Coloration de Gram
• Coloration de Ziehl-Neelsen
Colorations différentielles :
Gram
• Bactéries Gram + & bactéries Gram-
Colorations différentielles :
Ziehl-Neelsen
• Pour bactéries nécessitant un traitement sévère
comme les mycobactéries
• Principe :
– Coloration : fuchsine phéniquée avec chauffage
– Décoloration : acide + alcool
– Contre-coloration : BM
• Lecture :
– Mycobactéries : bacilles rouges
– Autres : bleues
colorations de structures
spécifiques
• Capsule : colorations négative/positive
spécifiques
• Spores (Schaeffer-Fulton : vert de malachite –
safranine)
spécifiques
• Flagelles (Leifson, Gray)
Autres méthodes de recherche
• Capsule
• Spores
• Flagelles
• Applications – avantages/inconvénients

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Structure et analyse des bactéries

• Acellulaires : virus – virologie & protéines Prions

• Formes arrondies, sphériques ou coccoïdes :

• Formes allongées & droites :

• Différents types de bacilles :

• Formes allongées & incurvées :

• Cellules eucaryotes <> procaryotes

• Éléments constants ou obligatoires

• Éléments constants ou obligatoires :

• Chez toutes les bactéries sauf les Mycoplasmes

• Constitué de peptidoglycane (PDG)

• Structure variable <> bactéries

• Action contre le PDG :

• Éléments inconstants ou facultatifs :

• Entoure la bactérie & recouvre la paroi

• Position variable dans la bactérie

• Soit avec un microscope

• Soit observation des colonies en culture

• Importance fondamentale pour étudier les

• Description de la partie mécanique :

• Description de la partie optique :

• Technique d’utilisation du microscope

• Avec des colorants

• Ionisables basiques (BM, CV, ….) :

Bactéries de la muqueuse buccaleMicrobiologie

• Colorants ionisables acides (éosine, fuchsine

Hémalun-éosine Microbiologie générale 70

• 1 seul agent colorant

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