Groupage HLA en sérologie

Immunologie Phase socle

Module 5 : HLA
Coordinateurs du module : JL Taupin et J Visentin
Rédacteur du chapitre : JL Taupin
Rédacteurs du module: M Labalette, S Caillat-Zucman, JL Taupin, J
Visentin, O Toutirais, N Congy-Jolivet, G Bernard, P Rouzaire
 Chronologie de la connaissance du système HLA
Notion de groupes
leucocytaires (J. Dausset) Présentation du peptide
par le HLA
Leuco-agglutination
Clonage
Microlymphocytotoxicité gène de
NGS
(P. Terasaki) HLA-B7 PCR PCR-SSP

1948 1964 1980 1985 1987 1992 2005

1958 1975 1983 1986 1993 2009

HLA-A2 Hybridomes et Hybridation PCR-SSO Séquençage HLA NGS

Ac monoclonaux (Southern, RFLP) (Sanger) HLA

Depuis la découverte du système HLA aux début des années 1950, avec les travaux
précurseurs du Pr Jean DAUSSET, la détermination du groupe HLA d’un patient a
continuellement évolué vers plus de précision et d’exhaustivité.
La figure ci-dessus localise sur une échelle de temps les principales découvertes (en jaune),
évolutions technologiques (en orange) et applications techniques (en bleu) qui ont permis
d’atteindre la connaissance actuelle de ce système.
Ce cours explore les méthodes reposant sur l’analyse sérologique des antigènes HLA.
La découverte du système HLA

sérum négatif sérum positif

hématies
leucocytes
Agglutination érythrocytaire et leucocytaire
pour la mise en évidence d’allo-anticorps

Leuco-agglutination
 Ag ‘MAC’ = futur HLA-A2
 Le groupage sérologique moderne
En microplaque Terasaki, en révélation par fluorescence (vert = cellules vivantes, rouge = cellules mortes)
Exemple du groupage classe I et II en panel d’anticorps monoclonaux en cytotoxicité au complément de lapin

Images : réactifs
One Lambda®
 Les CREGs
La classification des antigènes HLA a constamment été compliquée par l’existence de réactions
croisées entre des molécules proches mais cependant partiellement différentes. Ces réactions
croisées s’expliquent par l’existence d’épitopes communs à plus d’un antigène HLA (voir cours
nomenclature).
Ces groupes de réactivités croisées ou cross-reacting groups peuvent être complexes, selon :
- la distribution de l’épitope au sein de l’ensemble des allèles HLA existants
- l’intensité (ou la “force”) de la réaction croisée

Ces deux points sont décrits dans les 3 diapositives suivantes pour les CREGs en classe I.

Des CREGs transversaux existent aussi. Par exemple les épitopes appelés Bw4 et Bw6, qui sont
localisés au même endroit dans la séquence des gènes HLA-B (et quelques A), séparent la
famille des antigènes B en deux CREGs (Bw4 en rouge et Bw6 en bleu).

CREGs, super-types, antigènes, allèles et épitopes ont tous une influence sur la compatibilité en
transplantation et greffe. Par exemple un receveur hétérozygote Bw4/Bw6 ne s’immunisera
contre aucun donneur pour ces épitopes, alors qu’un homozygote recevant une incompatibilité
pour cet épitope s’immunisera contre la majorité des donneurs (s’il s’immunise contre cet
épitope) et sera le cas échéant fortement pénalisé en cas de besoin d’un nouveau greffon.

Tous les allèles d’un antigène donné ne sont pas nécessairement inclus dans les mêmes CREGs :
par exemple, l’allèle B*27:08 (quelques % des B27 qui eux-mêmes représentent quelques % des
individus) est Bw6 alors que les autres allèles B*27 sont Bw4…
 Une classification des CREGs
CREG A2
(elle dépend du panel d’anticorps utilisés)
A2
CREG A1 A28 CREG A19
A1 A68(28) CREG A9 CREG A10
A19
A3 A69(28) A9 A10
A29(19)
A11 A23(9) A25(10)
CREG B7 A30(19)
A36 A24(9) A26(10)
B7 A31(19)
A34(10)
A80 B13 A32(19)
A43
B22 A33(19)
A66(10)
B27 A74(19)
B37
B40 CREG B15
CREG B5 B41 CREG B8 B15
B5 B42 B8 CREG B12 B17
B18 B47 B14 B12 B62(15)
B35 B48 B16 B21 B63(15)
B51(5) B54(22) B38(16) B44(12) B75(15)
B52(5) B55(22) B39(16) B45(12) B76(15)
B53 B56(22) B64(14) B49(21) B77(15)
B70 B65(14) B50(21) B57(17)
B60(40)
B71(70) B61(40) B58(17)
B72(70) B67 B59
B46 B73 B78
B81
Les
9- réactions croisées entre
Les Groupes deantigènes HLA sont
REactivité nombreuses
Croisée et complexes (1)
(CREG)
HLA-A
36 1 11 3 Réaction croisée forte

Réaction croisée faible

80
CREG

9
23 24 26 43

2403

203 2 69 66
29
28
210 68 34 31 30
33

25 32 74 19
10
Les réactions croisées entre antigènes HLA sont nombreuses et complexes (2)
HLA-B Réaction croisée forte
CREG
Réaction croisée faible

46 57 58 45 50 4005 61
41
17
12 21 40
76 62 63
44 49 37 13 60 48
15
47 81

72 75 77 27 7 703

2708 73
70
59 67 55 42

71 35 53 18 22
3901 56 54

78 51 52 8 39
3902
5
5102 5103
16
14
64 65 38
 Limites et contraintes du groupage sérologique

Un anticorps est une grosse molécule

Un anticorps ne peut « voir » que les

variations de surface de la molécule HLA (et
les conséquences à la surface de variations
internes le cas échéant)

Le polymorphisme est essentiellement

localisé dans la poche à peptide

La sérologie n’explore qu’une petite partie du

Hülsmeyer et al. JBC 2005,280: 2972-80
polymorphisme HLA, celui du monde du
lymphocyte B donc de la réponse humorale
 L’épitope HLA, véritable cible de l’anticorps anti-HLA
 Épitope structural versus épitope fonctionnel

Épitope structural
700-900 Angströms2
paratope 15 à 25 aminoacides

épitope Épitope fonctionnel ou éplet

20-40 Angströms2
1 à quelques aminoacides
surtout CDR3 (ch lourde)

L’affinité de l’interaction dépend surtout

de l’éplet, qui est la zone différant
entre l’antigène et l’organisme
produisant l’anticorps, mais l’anticorps
contacte l’antigène sur une surface
plus grande, l’épitope. L’épitope
structural peut être identique entre
l’antigène et l’organisme produisant
l’anticorps
 Avantages et inconvénients du groupage HLA en sérologie

Méthode rapide (<2h) et simple, pour une détermination en urgence en classe I (A

et B) et II (DR et DQbeta)

MAIS

Les réactions croisées ne permettent pas toujours d’atteindre le niveau

« antigène » : difficile de distinguer DQ8/DQ9 en DQ3, et DQ5/DQ6 en DQ1

Absence de détection des allèles non exprimés à la surface cellulaire (allèles nuls)
suite à une mutation induisant une troncation de la molécule avant la région
transmembranaire. A l’inverse, possibilité de vérifier la présence d’un allèle nul
suspecté.

Pas de trousses disponibles pour étudier C, DP et DQalpha

Son intérêt dépend donc de l’objectif fixé : niveau de résolution requis, loci et/ou
antigène(s) à étudier

Un lien utile concernant les épitopes HLA: http://www.epregistry.com.br/terms/index