Licence Génétique et Amélioration des Plantes

Département des Sciences Biologiques de l’Environnement

Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie
Université Abderrahmane Mira de Bejaia

BIOTECHNOLOGIES VÉGÉTALES
CRÉATION DE VARIABILITÉ
TRANSGÉNÈSE

Génie génétique, caractéristiques,

stratégies, étapes de la transgénèse
et applications

Enseignant : Benadjaoud ali Année universitaire 2023/2024

 Introduction de nouveaux caractères
• L’amélioration génétique d’une espèce cultivée repose sur l’exploration et
l’utilisation de la diversité naturelle au sein de l’espèce afin d’associer des
caractères intéressants. Toutefois, cette variabilité intraspécifique est
limitée

• Ainsi, pour l’amélioration de caractères de résistance aux maladies, de

rusticité, d’adaptation aux conditions de milieu, le sélectionneur a
souvent recours à des croisements avec les formes sauvages ou voisines
de l’espèce cultivée. Ces croisements interspécifiques sont utilisés chez
des espèces comme le colza, le tournesol, le blé, la betterave, la tomate, le
melon, le haricot, la laitue…
 Augmenter l’accès à la diversité
• Parfois ces croisements intra ou interspécifiques se heurtent à des
problèmes d’incompatibilité ou ne permettent pas toujours de travailler
des caractères intéressants. Le sélectionneur dispose de techniques
permettant de contourner ces difficultés

• Ainsi, le sélectionneur augmente la source des caractères transmissibles

aux plantes en cherchant des gènes chez les êtres vivants de plus en plus
éloignés génétiquement de l’espèce à améliorer, tout en introduisant ces
caractères de façon plus précise.
 Génie génétique - Transgénèse
• Le génie génétique désigne l’ensemble des techniques permettant
d’introduire et de faire exprimer dans un organisme vivant un ou des
gènes provenant de n’importe quel autre organisme.
• Les organismes ainsi obtenus sont dits organismes génétiquement
modifiés (OGM)
• On distingue entre 2 techniques :

Technique qui permet de préparer les

Construction génétique
séquences d’ADN qui seront introduites

Transgénèse Technique qui permet de transférer le gène

 Génie génétique - Transgénèse
• La première plante transgénique est obtenue en 1983
grâce à la compréhension des mécanismes responsables de
la maladie de la galle du collet, qui a permis la mise en
évidence d’un transfert génétique naturel.
Van Montaigu

• C’est Braun en 1941, qui en étudiant ces tumeurs végétales

(galle de collet ou crown-gall), provoquées par Agrobactérium
tumefaciens, a amorcé les travaux qui ont conduit aux
premières manipulations génétiques végétales (OGM).

Braun A.C.

Galle provoquée par A. tumefaciens

sur une racine de pacanier
 Caractéristiques du génie génétique
• Les deux principales caractéristiques du génie génétique en comparaison
de la sélection classique basée sur la reproduction sexuée sont :

Une source de gènes étendue

On peut franchir la barrière des espèces, des genres

et des règnes. Il est donc possible d’introduire des
caractères qu’il ne serait pas possible
d’introduire par sélection classique

Transfert d’un gène précis

Permet de transférer le seul gène désiré et non de

transférer plusieurs gènes comme lors de la
reproduction sexuée
 Stratégies de la transgénèse 1/2
• Stratégie 1 : Introduire un nouveau caractère. C’est un cas où le transfert
de gènes s’accompagne d’un transfert de caractère

Introduction d’une copie du gène d’intérêt

Transcription sous forme d’ARNm

Traduction en une protéine

Applications de la technique : Expression du nouveau caractère

- Résistance aux insectes, pathogènes, herbicides
- Amélioration de la qualité des graines
- Production de molécules d’intérêt
 Stratégies de la transgénèse 2/2
• Stratégie 2 : Inactiver un caractère. Pas de transfert de gènes, on agit sur
l’expression d’un gène déjà présent dans la plante. Dans ce cas, on utilise
couramment la stratégie antisens, qui consiste à bloquer l’expression d’un
gène cible

Introduction d’une copie inversée du gène cible

Transcription sous forme d’ARNm (sens et antisens)

Hybridation complémentaire entre

Les 2 ARNm sens et antisens

Applications de la technique : Blocage de l’expression du gène cible

- Obtention d’espèces à teneur en lignine réduite
- Tomates et melons à maturation retardée
- Pomme de terre à teneur faible en amidon
 Etapes de la transgénèse 1/4
• Etape 1 : Identifier (a), isoler (b), intégrer (c) et multiplier (d) un gène
d’intérêt

Identification du gène d’intérêt, provenant de n’importe quel organisme vivant.

Cet organisme est soit une plante, un animal ou une bactérie. Le code génétique est universel

Le gène d’intérêt est isolé de l’organisme donneur

Le gène d’intérêt est intégré dans une construction génétique associant un gène marqueur.
Le gène marqueur permet de sélectionner les cellules qui ont intégré le gène d’intérêt

La construction est ensuite multipliée (clonée) afin de disposer d’une quantité

suffisante d’ADN pour son introduction dans les cellules que l’on veut transformer
 Etapes de la transgénèse 1a,b/4
• Etape 1 : Identifier (a) et isoler (b) le gène d’intérêt
La construction d’un transgène débute par le repérage du gène codant pour un caractère intéressant

Exemple d’un gène de Bacillus thuringiensis qui Ce gène d’intérêt est isolé à l’aide
code pour une protéine, qui se transforme d’enzymes de restriction
en toxine dans le tube digestif de la pyrale
 Etapes de la transgénèse 1c/4
• Etape 1 : Intégrer (c) le gène d’intérêt dans une construction génétique
Le gène d’intérêt seul ne peut pas s’exprimer dans la cellule végétale, on lui rajoute :

Des signaux de régulation :

- Promoteur : situé en amont, responsable de la transcription de l’ADN
- Terminateur : situé en aval, signale la fin de la séquence codante

Des gènes marqueurs : permettent de repérer et de sélectionner le gène d’intérêt.

Il s’agit de gènes marqueurs de résistance à des antibiotiques ou à des herbicides

Gènes d’intérêt + signaux de régulation + gènes marqueurs

sont d’origine différentes et sont assemblés in vitro
= construction génétique
 Etapes de la transgénèse 1d/4
• Etape 1 : multiplication (d) de la construction génétique : le clonage
Pour insérer un gène dans une cellule végétale, il est nécessaire d’avoir de nombreuses copies : Clonage

Les plasmides sont choisis pour héberger la construction génétique car :

- Il est plus facile de travailler sur cette petite molécule d’ADN circulaire
- Il possède de nombreux sites de restriction

Ce plasmide dit recombiné est réintégré dans

des bactéries hôtes comme Escherichia coli.

Une culture de la bactérie permet de multiplier rapidement

le plasmide et disposer de nombreuses copies de ce gène
 Etapes de la transgénèse 2/4
• Etape 2 : Transférer le gène. Il existe plusieurs méthodes pour introduire
un gène dans une cellule

Transformation biologique : par Agrobacterium (rendue

avirulente au préalable) qui a la propriété de réaliser
naturellement la transformation génétique d’une plante.

Transfert direct : cette technique fait intervenir

Une projection d’ADN par l’utilisation

d’un canon à particules (biolistique)

Une introduction d’ADN dans des protolastes

par l’action d’un champ électrique (électroporation)

Remarque : on peut soumettre différents types de tissus végétaux à la transformation :

disques foliaires, des sections de tiges, des embryons, des microspores ou des protoplastes
 Etapes de la transgénèse 2/4
• Etape 2 : Transfert naturel de l’ADN-T par Agrobactérium, responsable de
la galle de collet

Transfert naturel : par parasitisme, Agrobacterium ne transfère qu’une partie de son plasmide dans
les chromosomes de la plante. Cette partie qui est transmise au génome de la plante est dite ADN-T.

Structure de l’ADN-T : délimité par 2 bordures (gauche et droite), constituées par des séquences
de 25 nucléotides. C’est la région comprise entre ces 2 frontières qui est transférée à la plante.

ADN-T : se caractérise par la présence de :

- Gènes qui confèrent à la plante des propriétés tumorales
- Gènes entraînant la synthèse d’opines, qui détournent une
partie de l’activité photosynthétique de la plante
 Etapes de la transgénèse 2/4
• Etape 2 : Transfert naturel de l’ADN-T par Agrobactérium, responsable de
la galle de collet
Structure de l’ADN-T : délimité par 2 bordures (gauche et droite), constituées par des séquences
de 25 nucléotides. C’est la région comprise entre ces 2 frontières qui est transférée à la plante.

ADN-T : se caractérise par la présence de :

- Gènes qui confèrent à la plante des propriétés tumorales
- Gènes entraînant la synthèse d’opines, qui détournent une
partie de l’activité photosynthétique de la plante
 Etapes de la transgénèse 2/4
• Etape 2 : Transfert naturel de la construction génétique par
Agrobactérium
Transfert naturel ou biologique de gènes : c’est ce transfert à l’aide d’Agrobacterium tumefacien qui est
utilisé pour transformer les végétaux. Le principe est de modifier son plasmide afin qu’il n’y ait pas de
formation de la galle de collet, mais qu’il y ait quand même transfert et intégration des gènes désirés

- Les gènes responsable du pouvoir pathogène de la bactérie sont éliminés.

Plasmide Ti désarmé : - Les 2 bordures gauche et droite de l’ADN-T doivent êtres intactes
- Les fonctions de virulence ne sont pas éliminées

La construction génétique est insérée entre les 2 bordures de l’ADN-T, puis introduite dans le végétal
 Etapes de la transgénèse 2/4
• Etape 2 : coculture et transformation biologique
La transformation génétique est réalisée par mélange d’une culture d’une souche d’Agrobacterium
transformée, mise en suspension en milieu liquide, avec des explants de la plante, c’est la coculture

La sélection des cellules transformées est réalisée par un agent sélectif : herbicide, antibiotique …
Seules les cellules végétales transformées, exprimant le gène marqueur de sélection, comme la
résistance à un herbicide ou la résistance à un antibiotique, pourront se développer
 Etapes de la transgénèse 3/4
• Etape 3 : Régénérer et évaluer les plantes transformées
Régénération de plantes transgéniques
- Callogenèse L’aptitude à la régénération dépend
- Caulogenèse - Génotype
- Rhizogenèse - Type de tissu
- Repiquage en pots - Conditions de culture
- Acclimatation en serre

• Lors de la transformation génétique, 1, 2 ou plusieurs copies du gène

peuvent s’insérer à différents endroits sur les chromosomes. Ainsi,
chaque cellule transformée pourra donner une plante différente. Ce sont
donc autant d’événements de transformation, qu’il faut :

Caractériser sur le plan

moléculaire et biochimique

Évaluer la valeur
agronomique de la plante
 Etapes de la transgénèse 4/4
• Etape 4 : Introgression dans une lignée commerciale élite

La plante ayant intégré le gène d’intérêt

et satisfaisant le mieux à l’évaluation
agronomique est retenue. Il s’agit de la
lignée mère

Le gène d’intérêt est ensuite transféré

dans une lignée commerciale élite par
rétrocroisements

Le résultat de ce processus de rétrocroisements est l’obtentions d’une lignée quasiment

identique à la lignée élite, mais contenant le nouveau caractère transgénique
Récapitulatif
 Applications
• Les applications de la transgénèse peuvent être regroupées dans 4 grands
domaines