Centre Universitaire NourBachir

Faculté des sciences

Département S.N.V.
Master 2 Biotechnologie microbienne
Module d’Ecologie microbienne

TP N°=01

Isolement des bactéries à partir d’un milieu aquatique

-Prélèvement d'un échantillon à partir d'une flaque d'eau stagnante.

-Exécution des dilutions décimales: dans un tube à essai contenant 9ml d’eau distillée stérile.Ajouter
1 ml d’eau diluée, agiter pour homogénéiser.
- Dilutions suivantes :10-1 ,10-2 ,10-3 ....etc. On opère toujours de la même façon : C'est-à- dire que
l’on place 1ml de la dilution précédente dans 9ml d’eau distillée stérile, on obtient ainsi une nouvelle
dilution.
- Le choix de nombre de dilutions dépend de la nature et la richesse microbienne de l’eau
-Faire fondre la gélose nutritive dans le bain marie.
- Couler la gélose dans les boites de Pétri contenant les inocula.
- Agiter doucement par un mouvement circulaire pour assurer un mélange et éviter la formation des
bulles.
-Prélever 20 µl d’un 'échantillonà l'aide d'une micropipette, Déposer le au centre de la boite et faite
un ensemencement avec une pipette pasteur.
- Laisser refroidir sur un plan parfaitement horizontal.
-Incuber les boites de chaque dilution à 37°C dans l’étuve.
-Lecture : Elle se fait après (24 à 48) h.