Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Groupe 3 - Équipe 8
Groupe 3 - Équipe 8
BCG-S4
2023- 2024
1
SOMMAIRE:
I. INTRODUCTION GENERALE.
IV. CONCLUSION
2
I. INTRODUCTION
3
Phongycyles : défensent aux champignons
Dans le domaine agronomique on peut isoler des microorganismes de fertiliser le sol
Importance de la fertilisation : augmente le rendement et la qualité des agricultures
Dans le domaine de l'environnement : on peut isoler des micro-organismes qui peuvent
intervenir dans la dépollution (élimination des polluants) pour maintenir les composants
biotique "être vivant" et abiotiques "facteurs globales"
Construction de la salle:
Protection de manipulateur
_Installer haut inspirant en jaune (aspire les microbes les acides....) _ Les postes de travail
avec les barrières
La protection de manipulation
_installer les paillasses avec surface lisse pour faciliter le nettoyage
_installer les espaces de circulation _ Les Méthodes microbiologique :
4
C'est la stérilisation de l'asepsie c'est à dire l'absence totale des germes se fait paria facteurs
physiques ou chimiques
La stérilisation à la chaleur humide(le cas d'autoclave vapeur d’eau)
La stérilisation sèche (la forme pasteur dessiccateur bec Bunsen)
La stérilisation par filtration (des substances thermolacines)
La stérilisation par les rayons ultras violet (α X UV VISIBLE IR
RADIAUX)
La stérilisation par les substances chimiques (eau de javel +alcool
5
Mise en évidence des microorganismes de l'environnement
Le but :
-recherche des microorganismes retrouvés dans l'environnement
-comparer l'abondance et le type de micro-organismes mis en évidence
-savoir les sources éventuellement de contamination des milieux de culture utilisée aux
séances de TP
Procédure :
Source de prélèvement
Corps humain : les mains, les cheveux muqueux buccaux...
L'environnement : paillasse, poignée de porte, eau, air
Manipulation :
Cheveux : secouer les cheveux avec les doigts à la surface de la boîte contenant la gélose
nutritive
Muqueuse buccale: frotter avec un coton-tige stérile la muqueuse et inoculer la gélose par
striation
Palliasse : mouiller un coton tige à la surface de paillasse
Incubation ;
Après le prélèvement des microorganismes on met la boîte de gélose nutritive dans l'étuve
6
*Stériliser l'ensemencer au-dessus de la flamme en positif vertical, jusqu'à ce que le fil
devienne rouge et stériliser la tige de l'ensemencement en la passant
2 à3 fois sur la flamme du bec Bunsen
*Laissee refroidir l'ensemenceur à l'intérieur du tube et prélever un inoculum microbien en
s'assurant que l'extrémité du fil est bouclé
Puis flamber et boucher le tube et remettre le tube dans le portoirs
*prendre le tube de bouillon nutritif et la secouer 2 à3 fois
*Stériliser l'ensemenceur sur la flamme
*Met les tubes dans l'étuve
TP2
LES MATERIELS
7
Suspension microbienne
Solution désinfectante.
Portoir de tubes.
Pilan et mortie : pour libéré la charge microbien
Dessicateur : pour protéger des substituions contre l’humidité
Agitation magnétique et barreau magnétique : agitation
8
_Désinfecter la paillasse avec l'eau de javel
_désinfecter les mains avec de l'alcool
_allumer le bec benzène pour avoir une flamme bleue
_prendre boîte de gélose nutritive et partage en 3
_prélever à l'aide de l'ensemenceur stérile la suspension microbienne
-met des stries dans la surface 1 puis des stries de la surface 2 à partir de 1, des stries de la
surface 3 par 2
Ensemencement de masse
Prélever 1 ml à l'aide d'une pipette et déposer l'inoculim dans boîte vide
-couler le milieu gélosé dans la boîte
-mélanger doucement et laisse dans le paillasse
10
TP 3
LES MATERIELS
11
Nature du milieu de culture
Le milieu de culture sélectif utilisé pour la culture des staphylocoques est le milieu de
Chapman .il contient un inhibiteur tel que le chlorure de sodium à une concentration de 75 g/l
cet agent inhibe la croissance de la plupart des bactéries gram négatif et gram positive il
contient également le mannitol comme source de carbone et d'énergie.il est mis en évidence
grâce à un indicateur coloré de ph : le rouge de phénol.
Si le milieu reste rouge, les colonies sont mannitol cas elles ne ferment pas le mannitol avec
une légère alcalinisation du milieu par utilisation de peptones dans leur métabolisme
énergétique
_si le milieu devient jaune les colonies sont mannitol car elles fermetent le mannitol dans leur
métabolisme énergétique avec acidification du milieu
Mode opératoire
Après la préparation du milieu Chapman, on fait la technique d'ensemencement, on divise la
boîte de pétri en 3 puis on stérilise l'ensemenceur puis on prend la suspension microbien on
met des stries dans les 3 partie de la boîte puis on incube dans l'étuve
-isolement de coliformes :
Les coliformes appartiennent à la famille des Entérobactériaceae en forme de bâtonnet
gram négative non sporulé anaérobie facultatif
_nature du milieu de culture
Le milieu de culture sélectif utilisé pour la culture des coliformes est le milieu à
l'éosine et au bleu de méthylène (EMB agar).ce milieu contient deux colorants l'éosine
et le bleu de méthylène qui sont inhibiteurs partiels de la plupart de la flore gram
positif ces colorants assurent aussi la différenciation entre les germes lactose +et les
germes lactose _
Mode opératoire
Après la préparation du milieu EMB(agar) ,on fait la technique d'ensemencement, on
divise la boîte de pétri en 3 puis on stérilise l'ensemenceur puis on prend la suspension
microbien on met des stries dans les 3 partie de la boîte puis on incube dans l'étuve
_isolement des bacillus
Les Bacillus forment un genre de bactéries à gram positif appartenant à la famille
bacillaceae .ces bactéries sont aérobies ou aéro-anaérobies facultatif et tirent leur
énergie par la respiration et la fermentation. Elles sont capables de produire les
endospores on distingue 3;
Bacillus à spore ovale ou arrondie non déformante
Bacillus à spore ovale déformante
Bacillus à spore ronde déformante
Mode opératoire
Après la préparation du milieu gélose nutritive, on fait la technique d'ensemencement,
on divise la boîte de pétri en 3 puis on stérilise l'ensemenceur puis on prend la
suspension microbien on met des stries dans les 3 partie de la boîte puis on incube
dans l'étuve
12
TP 4
LES MATERIELS
13
Coloration de gram(frottis sec)
But
C'est une coloration qui permet de mettre en évidence les propriétés de la paroi
bactérienne et d'utiliser ces propriétés pour les distinguer et les classifier .on distingue
les bactéries gram -et les gram
*Mode opératoire
La coloration de gram est réalisé en 4 étapes suivantes
_étalement : c'est la préparation du frottis bactérien qui est basé sur l'étalement des
microorganismes sur une lame
_séchage: sécher la lame en la posant sur une plaque chauffante ou sur flamme du bec
Bunsen
La fixation :passer la lame 2 à 3 fois sur la flamme du bec bensun afin de tuer les
microorganismes et laisser de refroidir
14
III. RESULTAT DES MANIPULATIONS.
TP1
Mise en évidence des microorganismes de l'environnement
Bactéries : Les colonies de bactéries présentent toujours une variété de couleurs, de formes et
de tailles.
Actinomycètes : Ce sont des bactéries filamenteuses dont les colonies deviennent jaunes et
crémeuses avec le temps, à mesure qu'elles forment des spores (fructification). Généralement,
les actinomycètes exercent une pression sur la gélose et dégagent une odeur discrète.
Moisissures : Les colonies de moisissures se présentent en amas, cotonneuses, soyeuses,
linéaires ou poudreuses, avec des filaments aériens intra-métriciens et une odeur de moisi.
Levures : Les colonies de levures sont souvent cireuses, avec des colonies généralement
terminées par des filaments, caractérisées par une consistance filamenteuse et une odeur
essentiellement spécifique.
• Notre résultat :
Punie de porte
15
• Les résultats d’autre équipe :
16
Les résultats de group 3
TP2
Techniques d’ensemencement d’un milieu solide par: Méthode dequadrant
Notre résultat
Punie de porte
17
Les résultats de l’autre équipe
Résultat de l’équipe 8
E.S 10ˉᵌ
18
Les résultats de toutes les équipes
Ensemencement de masse
Les résultats de notre équipe
E.M 10ˉ⁴
19
Les résultats de l’autre équipe :
20
Ensemencement de masse
Nbr(B)=4,16×10⁶ UFC/ml=4,16×10⁶/0,076=5,47×10⁷ UFC/g.Ps
TP3
A prés la préparation des trois milieux de cultures et met dans les boites de pétri on trouve les
résultats suivants :
CHAPMAN (staphylocoques)
Les résultats de l’autre équipe
21
b) Résultats de coliformes ;
*Les colonies de diamètre de 2 à 3 mm, plates à centre noir et qui présentent un éclat
métallique verdâtre en lumière réfléchie sont des Escherichia coli
* Les colonies convexes et tendance à conclure sont des klebsiella pneumonie
*Les colonies de diamètre de 4 à 6 mm et qui présentent un centre gris marron par
transparence sont des Entérobactérie
*Les colonies de diamètre à 1 à 2 mm transparent et grises sont des salmonella
*les colonies de diamètre de 2 à 4 mm plates et bleuâtre pour les ouches pigmentées sont des
Pseudomonas
*Les colonies de diamètre de 2 mm environ et grisâtre des Proteus
*Les colonies très petites et grises sont des Enterococus
Notre résultat :
VRBL (coliforme)
22
Autre résultat de l’autre équipe
GN (Bacillus)
23
TP4 :
24
IV. CONCLUSION
Pendant les quartes séances nous réalisons les objectifs pédagogiques et applique, nous
sommes bien capables d’analyser, interpréter, préparer, dénombrer les microorganismes En
utilisant plusieurs techniques.
25