1- Introduction :

Microbiologie, est un domaine d’études s’intéressant aux organismes de taille

microscopique, en particulier aux bactéries, aux protozoaires, aux virus ainsi
qu’à certains champignons (levures) et algues unicellulaires de petite taille.
Types de micro-organismes On groupe sous le nom de micro-organismes les
êtres vivants constitués d'une seule cellule et, dans la majorité des cas, invisibles
à l'œil nu. Au sens strict, cette définition rassemble les bactéries, les algues, les
champignons unicellulaires et les protozoaires (« animaux unicellulaires »). Par
extension, on y ajoute les virus qui, incapables de se reproduire seuls (sans
parasiter une cellule vivante), ne font pas à proprement parler partie du monde
vivant. Par commodité, et bien qu'ils n'appartiennent pas au vivant, on peut
également ranger dans le groupe des micro-organismes les prions, de simples
protéines défectueuses, ainsi que les viroïdes (non illustrés dans ce tableau),
composés de matériel génétique (ARN) dépourvu de protéines.
La microbiologie englobe l’ensemble des disciplines biologiques qui concernent
ces micro-organismes, notamment la bactériologie, la virologie et la
parasitologie. La microbiologie, qui s’est développée de concert avec la
microscopie, étudie non seulement la morphologie des micro-organismes, mais
également leur mode de vie, leur métabolisme, leur structure moléculaire, leurs
éventuelles propriétés pathogènes et leurs caractéristiques antigéniques (propres
à susciter une réponse du système immunitaire).
La naissance de la microbiologie correspond à la découverte, grâce au
microscope, de l’existence d’une vie minuscule, notamment dans des gouttes
d’eau ou autres surfaces : c’est le naturaliste hollandais Antonie Van
Leeuwenhoek qui, le premier, en 1683, observe de tels micro-organismes
(bactéries et protozoaires), qu’il baptise « animalcules ».

2- But :

L’isolement de micro-organismes à partir du sol.

 3- Principe :

L’isolement consiste à réaliser a partir d’un échantillon des suspensions dilution.

Ces dernières sont ensemencées sur milieu de culture solide. Au terme de
l’incubation, les germes contenus dans le sol seront développés. Chaque germe
sera à l’origine d’une colonie, le comptage des colonies permet par méthode de
calcul simple d’estimer la quantité de germes contenue dans le sol étudié.

4- Mode opératoire :

Précautions générales de travail :

- Tous les objets utilisés doivent être stériles.
- Les mains lavées a l’alcool.
- La paillasse doit être lavée à l’eau de javel.
- Le travail doit s’effectuer dans la zone de protection du bec benzène, à
l’abri des courants d’air.
- Il faut flamber les goulots des tubes et flacons après leur ouverture et
avant leur fermeture.
- Les boites de pétri doivent être ouvertes en maintenant le couvercle a
l’oblique avec ouverture du coté de la flamme.
On prenne deux échantillons différents de sol le premier est de sol cultivé (E1)
et le deuxième de sol nu (E2) et on faire pour tous les deux manipulations
suivantes :

a- Dilution :
Le sol est très riche en micro-organismes c’est pour ça on faire cette dilution
pour facilité le comptage de ces micro-organismes, lorsque la dilution augmente
le pourcentage de colonies diminué.
- 10g de sol tamisé est pesé et mélangé à 90ml d’eau distillé la dilution 10
1
est ainsi réalisée.
- 1ml de cette dilution est prélevé et mélangé à 9ml d’eau distillé stérile, la
dilution 10 2 est ainsi réalisée jusqu'à la dilution 10 8 .
b- Ensemencement :
- L’ensemencement a 0.1ml de chaque dilution de10 1 ,10 4 et 10 8 est
prélevé a l’aide d’une pipette et déposée dans une boite de pétri. Le milieu de
culture maintenu en surfusion a l’état liquide a 70°c est refroidie et coulé dans la
boite de pétri. Après solidification du milieu les boites sont retournés et mises a
incuber a 27°c pendant une semaine.

Pour chaque tube on fait deux répétitions.

 5- Calculs et résultats :

1- la concentration du sol en germes :

Le comptage :
Nome internationale : 300 > nombre de colonie >30
Dilution Echantillon 1 Echantillon 2
10 1
164 colonies >300 éliminé
10 2
<30 éliminé >300 éliminé
10 3
<30 éliminé >300 éliminé
10 4
<30 éliminé >300 éliminé
10 5
<30 éliminé >300 éliminé
10 6
<30 éliminé >300 éliminé
10 7
<30 éliminé >300 éliminé
10 8
<30 éliminé 262 colonies

Calcul de la concentration :
Echantillon 1 :
0.1ml 164 colonies
10ml X1 colonies
10  164
X1 = 0.1
= 16400 colonies dans la dilution 10 1
Il y a 16400 colonies dans 1g de sol.
16400  10 6 = 164  10 8 germes dans 1g de sol.

Donc il y a 164  10 8 germes dans 1g de sol (164  10 8 germes/1g de

sol).
Echantillon 2 :
0.1ml 262 colonies
10ml X2 colonies
10  262
X2 = 0.1
= 26200 colonies dans la dilution 10 8
26200 colonies 10 8
Y colonies 10 1
10 1  26200
Y= = 262  10 9 colonies
10 8
Il y a 262  10 9 colonies dans 1g de sol.
262  10 9  10 6 = 262  10 15 germes dans 1g de sol.

Donc il y a 262  10 15 germes dans 1g de sol (262  10 15 germes/1g de

sol).
2 – La description macromorphologique :

Critères La couleur La forme L’aspect La taille L’élévation

Colonie
N° : 01 Blanc cassé circulaire lisse 0.65cm convexe
N° : 02 Jaune clair irrégulière A centre 0.9cm Plate
plissée 0.7cm
N° : 03 Blanc cassé En dent de A bord 1cm Cartes
pus plissée 0.7cm forme
N° : 04 Vert dartre Irrégulière plissée 0.2cm Crates
0.5cm forme

6- Interprétation :

Lorsqu’on observer les boites de pétri après une semaine on a trouve que :
 Les deux échantillons sont riches en micro-organismes.
 Les différents dilutions divers au nombre des colonies (germes).
 Les bactéries se développent plus que les champignons.
 Le sol nu contient des micro-organismes beaucoup plus que le sol
cultivé.

7- Conclusion :

Malgré les deux échantillons ayant une activité biologique mais le sol nu est le
plus riche en micro-organismes que le sol cultivé c'est-à-dire qu’il y a une
fertilité du sol au sol nu par contre le sol cultivé est moins fertile c’est qu’on doit
conclue qu’il y a une utilisation des engrais qui influes au vie du micro-
organismes et au biologie du sol .