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FACULTE DE MEDECINE
CLINIQUES UNIVERSITAIRES
CONTEXTE
OBJECTIFS
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I. HEMOGRAMME ou NUMERATION FORMULE SANGUINE(NFS)
Définition : c’est l’étude des éléments figurés du sang en
suspension dans le plasma, de l’hémoglobine et des
constantes érythrocytaires. Cet examen est effectué sur
du sang veineux prélevé sur un anticoagulant sec,
EDTA ou Titriplex , le plus souvent. A défaut d'EDTA,
on peut utiliser l'Oxalate de K ou de Na, sans fluorure.
Quant à la formule sanguine, le sang est prélevé
directement, en piquant le bout d'un doigt et en
déposant une goutte de ce sang sur une lame porte-
objet.
Prélèvement
Technique
a) Méthodes Automatiques
b) Méthodes Manuelles
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*Intérêt Clinique
- détermination de l’anémie ;
- caractérisation de l’anémie, dans ce dernier cas, on a besoin
du taux de l’hémoglobine, de l’hématocrite et du nombre des GR.
a) anémie normocytaire :
Ht = Hb X 3+2 ; dans ce cas, la formule se maintient mais l’Ht et
l'Hb sont parallèlement diminuées. L'anémie est quantitative, par
perte sanguine : hématémèse récente, hémolyse, mélaena, ulcère
gastrique, hémorragie traumatique récente.
b) anémie macrocytaire :
Ht > Hb X 3+2 ; ici, l’anémie est causée par une baisse de l’Hb.
L’anémie est qualitative par diminution préférentielle de l’Hb ; en
cas de malnutrition, manque de fer, immaturité du GR, brûlure.
c) anémie microcytaire :
Ht < Hb X 3+2 ; ici, l’anémie est caractérisée par la baisse du
volume globulaire (sphérocytose, microcytose avec hémolyse,
hémodilution).
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1. DOSAGE DE L’HEMOGLOBINE (Hb)
*Définition
*Principe
*Matériel et Réactifs
-Tube à essai
-Micropipette ou pipette de Sahli
-Pipette graduée
-Poire d'aspiration
-Spectrophotomètre
-Courbe d’étalonnage
-Réactif : Solution de DRABKIN (1g de HCOˉ3 ; 0,2g de KCN ; 0,2g
de K3Fe(CN)6 ; 1vol. d’ H2O distillée);à conserver dans un flacon
en verre blanc bouché à l’émeri.
-Echantillon de sang veineux prélevé sur EDTA ou sang capillaire.
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*Mode opératoire
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2. MESURE DE L’ HEMATOCRITE (Ht)
*Définition
*Principe
*Matériels
*Mode opératoire
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- Boucher l’extrémité du tube par laquelle on a prélevé, avec
de la plasticine ou du mastic.
- Placer le tube sur le plateau de la micro centrifugeuse
avec le bout bouché du coté externe, en assurant l’équilibre avec
un autre tube en regard du tube contenant l’échantillon.
- Centrifuger pendant 5 min à 3000 tours/min.
- Dans le Service, nous centrifugions à 5000 tours/min pendant 5
min.
- Faire la lecture à l’aide de l’abaque en mesurant la hauteur du
culot globulaire par rapport à la hauteur totale.
Homme : 38 - 52%
Femme : 32 - 42%
Enfant (1 à 10ans) : 35 – 37%
Nouveau né : 44 – 62
Principe
Le sang est dilué au 1/20ème dans la solution de Türk. L’acide
acétique glacial contenu dans celui-ci lyse les GR et les plaquettes,
tandis que le violet de gentiane ou le bleu de méthylène colore le
noyau des GB.
Matériels
-Solution de Türk (liquide de dilution)
-Pipette de 2 ml en verre: pipette pasteur
-Poire d'aspiration
-Chambre à numération
-Compteur (manuel, électricité)
-Tube à essai
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-Microscope optique
-lamelle couvre-objet spéciale ( un peu dure),pas ordinaire.
Mode opératoire
Justification du Calcul
a) Cellule de Neubauer :
Formule pratique :
-le groupe de 16 carrés du coin = 0,1 mm3
-compter dans le 4 groupes du coin = 0,1 x 4 = 0,4 mm3
-pour avoir 1mm3 = 0,4 x 2,5
-la dilution étant de 1/20, la formule devient :
2,5 x 20 = 50, soit N x 50.
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b) Cellules de Bûrker :
N X 100 = GB/mm3
Le volume correspondant à 50 grands carrés, la profondeur de la
cellule étant de 0,1mm, peut se calculer comme suit :
50 x 1/5 x 1/5 x 1/10 = 1/5 mm 3
Valeurs de références
Valeurs pathologiques
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4. DETERMINATION DE LA FORMULE LEUCOCYTAIRE (FL)
OU NUMERATION-FORMULE LEUCOCYTAIRE (NFL)
*Définition
*Principe
La technique de May-Grünwald et Giemsa consiste en la coloration
d'un étalement mince sur une lame d’une goutte de sang.
L’étalement est séché et ensuite coloré au MGG puis la lecture est
faite au microscope.
*Matériels
-lancette/ aiguille
-lame porte-objet
-lame rodée sur le bord
-compteur (manuel/ électrique)
-microscope optique
-réactifs : solution de May-Grünwald et solution de Giemsa
-bacs pour lavage
*Mode opératoire
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sous un angle d’environ 45°.
-déplacer la lame rodée de gauche à droite jusqu’à ce qu’elle entre
en contact avec la goutte. Immédiatement, la goutte s’étale le long
de l’arrête de la lame rodée. Eviter de faire pénétrer directement
la lame dans la goutte, car risque de provoquer la destruction
d’un grand nombre de cellules.
-Le sang qui adhère à la lame rodée est tiré et étalé de droite vers
la gauche, d'un mouvement rapide.
-sécher le sang étalé
-colorer le frottis en déposant quelques gouttes de May Grünwald
sur la préparation.
-au bout de 2min, ajouter le même nombre de gouttes, mais cette
fois-ci d’eau tamponnée sur la préparation pendant 1min.
-renverser le mélange de MG-H20 tamponnée.
-colorer ensuite avec le Giemsa pendant 8 à 10min.
-laver à l’eau courante et laisser sécher la lame
-faire la lecture au microscope optique à l’objectif X100, du côté
de la queue d’étalement là où les cellules sont séparées les unes
des autres.
Compter jusqu’à 100 à 200 cellules de la lignée blanche tout en
les catégorisant(différencient).
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*Description des cellules sanguines
*Intérêt clinique
Principe
Le sang est dilué au 1/200ème dans le liquide de Hayem (1 volume
de formol commercial à 40% + 99 volumes de citrate de sodium à
3%). Ce liquide a la particularité de conserver les globules rouges
et lyser les autres éléments figurés du sang.
Matériels
Mode opératoire
Homme : 4 à 6 millions/mm3
Définition:
Explication du phénomène
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Lorsque l'on place du sang avec anticoagulant dans un tube en
position verticale ou inclinée, les GR tendent à tomber au fond du
tube , car leur poids spécifique est supérieur à celui du plasma.
MATERIEL ET REACTIFS
- Statif de Westergreen
- Poire d'aspiration.
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- Solution stérile de Citrate de sodium à 3,8g%(Na2O6H5O7.2H20)
MODE OPERATOIRE
PRECAUTIONS
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- Si la limite de GR-plasma est imprécise, car progressive, le
signaler dans le rendu des résultats.
Homme: 1 à 16 mm ⁄h
Femme: 2 à 22 mm ⁄h
VALEURS PATHOLOGIQUES
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II. BIOCHIMIE CLINIQUE
1. LE TEST DE RIVALTA
*Définition
C’est une méthode qualitative qui consiste à mettre en évidence la
présence ou l’absence des protéines dans un liquide
d’épanchement en vue d’en déterminer la nature : Exsudative ou
Transsudative; afin d'affirmer si ce liquide est un Exsudat ou un
Transsudat.
*Principe
La dénaturation et la précipitation des protéines par l’action d’un
acide fort (Acide acétique glacial).
*Matériels
-verre à pied (Erlenmeyer, éprouvette graduée),
-pipettes Pasteur,
-eau distillée (100ml),
-Acide acétique glacial,
-liquide d’épanchement.
*Mode opératoire
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*Intérêt clinique
TRANSSUDAT EXSUDAT
Aspect limpide trouble/opaque
*Définition
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a) Méthode à ébullition
*Principe
C’est la dénaturation et précipitation des protéines par la chaleur.
*Matériels
-tube à essai
-pipette pasteur ou compte goutte
-source de chaleur
-portoir
-gants stériles
-porte tube (pince en bois)
*Mode Opératoire
-à l’aide d’une pipette pasteur, remplir le tube à essai avec des urines
jusqu’au 1/3.
-porter le tout à l’ébullition
-observer la réaction.
-si apparition d’un trouble, ajouter 3 à 5gouttes d’acide fort et
observer la réaction.
-si persistance du trouble : Protéinurie Positive
-si disparition du trouble : Protéinurie Négative
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NB : la protéine de BENCE-JONES est une protéine spécifique que
l’on retrouve dans l’urine en cas de Myélome Multiple(Kahler),
leucémie.
Elle a la caractéristique d’être thermosoluble c.à.d. tendance à la
floculation à 60°C (précipitation) et se solubilise à 100°C. Cette
protéine thermosoluble apparait à 60°C et disparait à 100°C.
b) Méthode d’acidification
*Principe
C’est la dénaturation et précipitation des protéines par un acide fort.
*Matériels
-tube à essai
-pipette pasteur
-portoir
-gants stériles
-acide fort, acide trichloro-acétique
*Mode opératoire
*Définition
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*Matériels
*Mode Opératoire
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3. RECHERCHE DU GLUCOSE DANS LES URINES
*Définition
*Principe
*Matériels
-Tube à essai
-Porte-tube ou pinces en bois pour tube à essai
-Bécher
-Lampe à alcool (Bec de Bunsen) ou autre source de chaleur
-Pipettes pasteur
-Solution de Fehling A = Sulfate de cuivre 5 fois hydraté
(CuSO4.5H2O); de couleur bleu ciel
-Solution de Fehling B = Tartrate de sodium et de potassium;
incolore.
*Mode Opératoire
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Avec une autre pipette Pasteur prendre un volume équivalent de
Fehling B et ajouter dans le tube à essai qui contient le Fehling
A. Il se forme un mélange de couleur bleu foncé, ensuite porter
le tout à ébullition et voir si persistance de la couleur bleu
foncé; conclure que le réactif est de bonne qualité. Sinon,
changer des réactifs.
*Intérêt clinique
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*Diagnostic différentiel des diabètes
*Définitions :
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*Principe :
Le densimètre plongé dans l’urine, donne un chiffre qui sera corrigé
en fonction de la température.
*Matériels :
-densimètre ou urinomètre
-thermomètre (0° à 50°C)
-éprouvette (50ml) ou cylindre de 500ml ou plus
-échantillon d’urine
*Mode opératoire
Calcul :
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retirera une unité à la troisième décimale pour chaque 3g%.
>si volume urinaire insuffisant : diluer le petit volume
urinaire obtenu avec un même volume d’eau distillée et on
multiplie la fraction décimale de la densité trouvée par 2.
Exemple 1:
-densimètre étalonné à 20°C
-température de l’urine : 26°C
-densité lue : 1,021
La température de l’urine est supérieure de 6°C à la température
d’étalonnage. Il faut donc ajouter au chiffre de densité : 0,002
c.à.d.: 6/3 x 0,001 = 2 x 0,001 = 0,002
La densité réelle de l’urine est donc : 1,021 + 0,002 = 1,023
Exemple 2:
-densimètre étalonné à 15°C
-température de l’urine : 24°C
-densité lue : 1,020
La température de l’urine est supérieure de 9°C à la température
d’étalonnage. Il faut donc ajouter au chiffre de densité : 0,002
c.à.d.: 9/3 x 0,001 = 3 x 0,001 = 0,003
La densité réelle de l’urine est donc : 1,020 + 0,003 = 1,023
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