LYMPHOCYTES NK Cellules cytotoxiques naturelles

Djidjik Rda Universit dAlger Benyoucef Benkhedda Facult de Mdecine dAlger Laboratoire dimmunologie

Introduction
Les cellules NK (naturelles-tueuses) sont des lymphocytes de grande taille et possdant de nombreuses granules. Elle proviennent de la moelle osseuse et font partie du systme immunitaire inn. Les cellules NK constituent le troisime type de lymphocytes Prcurseur mdullaire commun aux lymphocytes T et B. Les cellules NK nexpriment pas le rcepteur des lymphocytes T ni danticorps de surface comme les lymphocytes B. 5 15 % des lymphocytes sanguins) ainsi que dans les vaisseaux lymphatiques . Essentiellement circulantes et ne sont pas concentres dans les organes lymphodes secondaires.

Introduction
Ces cellules reconnaissent et tuent des cellules anormales (infectes par des virus, malades ou cancreuses) Les lymphocytes T sont galement capable de tuer ces cellules mais il ont besoin de temps pour tre activs Les cellules NK sont prtes protger le corps avec une rponse immunitaire rapide en attendant la dveloppement de la rponse immunitaire acquise

CD7 CD2

CD16

NK Origine hmatopotique
CD56

5-15% des cellules mononucles du sang circulant

Expriment CD7, CD2, CD56, CD16 Immunit inne = capables sans immunisation pralable et de faon trs rapide :
de cytotoxicit (do leur nom de NK) de prod de cytokines/chimiokines recrutant /activant cellules non spcifiques (PN, M) et les T

Trois grands rles, rponse aux :

cellules infectes par virus tumeurs allogreffes

Les lymphocytes NK sont dfinis par des critres morphologiques phnotypiques et fonctionnels. Morphologie

Grands lymphocytes contenant des granules riches en perforines et granzymes, libres lors de la phase effectrice de la cytotoxicit
Phnotype Ils nexpriment pas le rcepteur spcifique de lantigne des lymphocytes T (TCR/CD3), ni limmunoglobuline membranaire des lymphocytes B Ils sont dfinis phnotypiquement par une combinaison de marqueurs prsents leur surface dont les deux plus caractristiques, mais non spcifiques, le CD16 et le CD56

Les lymphocytes NK sont dfinis par des critres morphologiques phnotypiques et fonctionnels. Fonction Cellule cytotoxique : Cytotoxicit naturelle, capacit de tuer des cellules tumorales ou infectes par un virus en l'absence de stimulation pralable . Cette activit cytotoxique n'est pas restreinte par le CMH; les cellules NK sont au contraire inhibes par les molcules HLA de classe I . Autre activit cytotoxique des cellules NK: cyotoxicit dpendante des anticorps, dgranulation de molcules cytotoxiques (perforine, granzymes, etc.), induction de l'apoptose (voie Fas /Fas-ligand). Les cellules NK possdent galement une importante fonction de scrtion de cytokines, interfron g (IFNg)et (TNFalpha) en particulier .

Phnotype NK

CD3neg, TCRneg, CD2pos Deux sous-groupes : CD16lo/neg CD56hi - 5% ds sang, 75% ds ganglions (CCR7pos) - Pas cytotoxiques - Produisent cytokines CD16hi CD56lo - 95% ds sang (CXCR1pos) - Cytotoxiques (perforinepos ds granules prforms) - Rcepteurs aux chimiokines inflammatoires

Ontognie
La diffrenciation des cellules NK n'est pas encore clairement dfinie. Leur diffrenciation s'effectuerait dans la moelle osseuse partir dun progniteur hmatopotique au contact du micro-environement. Plusieurs cytokines sont impliques : - flt3-ligand et c-kit ligand un stade prcoce, - IL-15, et plus accessoirement lIL-21,pendant le dveloppement et la diffrenciation du compartiment NK.

Dveloppement des cellules NK

Drivent dun progniteur hmatopotique CD34+ et sont dpendants du microenvironnement moelle osseuse pour leur maturation IL-15, c-Kit ligand (KL) et flt-3 (FL) ligand essentiels au dveloppement des NK

KL, FL CD34+ IL-2 et IL-15R+ CD56IL13+ CD161+ NK progniteur Prcurseur Cellule NK immature

IL-15 IL21

IL-12 CD56+, IL13-, IFN+

CD94,KIR, NCR, CD16, PEN5 CD56 Cellules NK matures

Trail

Perforine

La diffrenciation NK

IL-15 primordiale pour maturation et maintien vie en priphrie.

INTRODUCTION TO NK LYMPHOCYTE BIOLOGY

NK
Activatory signals Inhibitory signals

NK

Inhibitory signals

Activatory signals

NO LYSE
TARGETS

LYSE
Production of cytokines

Tumor cells

Virus infected cells

Activation ou inhibition de la lyse : balance des signaux

Rcepteurs activateurs Rcepteurs inhibiteurs

- Signal activateur : motifs ITAM et des kinases (immune receptor tyrosine-based activation motif) - Signal inhibiteur recrute des phosphatases via les ITIM (immune receptor tyrosine-based inhibitory motif)

Signaling through KIRs in NK lymphocytes

KIR-L

KIR-S

P SHP1 P

ITIM ITIM

DAP12 (ITAM)

Lck/Fyn

Syk/ZAP-70

Substrat

Inactivation
P Substrat

Activation

Co-engagment of KIR-L and KIR-S resulted in an inhibitory signaling

Reconnaissance de la cible

T8

Cellules tueuses
R act CMH-I

NK
R inh CMH-I

cible

cible

Pas restreinte un complexe CMH-peptide

Balance entre : Rcepteurs inhibiteurs (tolrance au soi) KIR ligand = CMH-I Rcepteurs activateurs (lyse cible) ligand = non soi / soi altr

NK

Rpertoire NK : Chaque individu diffre dans nb et type de rcepteurs exprims par ses NK Chaque NK a une combi de R inh et R act, la plupart des NK a au moins 1 R inh Existence dune tolrance au soi = nos propres NK ne nous attaquent pas

Le Missing-self : la perte dexpression du CMH-I est reconnue par les NK

- La rponse cytotoxique par les T CD8 est CMH-I restreinte - Les cellules tumorales / infectes peuvent down-rguler lexpression du CMH-I pour viter dtre reconnues par les T8 cytotoxiques

T8 T8 NK NK DOES NOT KILL cible

KILLS

KILLS

cible

cible

NK = stratgie complmentaire aux T8 cytotoxiques pour lutter contre les cellules du non-soi ou soi altr

Une cellule du soi est protge de la lyse NK car le signal inhibiteur (CMH-I) lemporte toujours sur lactivateur !

Une cellule suspecte (qui nexprime pas de CMH-I) est lyse car aucun signal inhibiteur ne vient contrebalancer lactivateur

Une cellule allognique est lyse car le CMH-I du non-soi ne dclenche pas de signal inhibiteur

Les rcepteurs NK inhibiteurs

Les principaux rcepteurs inhibiteurs des cellules NK ont pour ligands des molcules HLA de classe I. Ce sont essentiellement :

les Killer Immunoglobulin-like Receptors (KIR) inhibiteurs le rcepteur CD94/NKG2A.

Human NK Inhibitory Receptors for MHC Class I

HLA-A,B,C E,F,G HLA-G ? HLA-Bw4 HLA-A ? HLA-E

Ligands

HLA-C (S77N80)

EC
TM IC

CD94/NKG2A

KIR2DL1 CD158a

KIR2DL2/3 CD158b

KIR2DL4 KIR2DL5A CD158d KIR2DL5B

KIR3DL1 CD158e1 allele of KIR3DS1

KIR3DL2 CD158k

KIR3DL3

ITIM

Igdomain

C-lectin domain

+ K/R
LILRB1 CD85j

Les rcepteurs NK activateurs

Les KIR activateurs CD94/NKG2C

De la mme faon qu'il existe pour les KIR des couples de rcepteurs homologues inhibiteurs et activateurs, le rcepteur inhibiteur CD94/NKG2A possde un homologue activateur : CD94/NKG2C, tout comme CD94/NKG2A, a pour ligand HLA-E.

NKG2D
NKG2D est galement un rcepteur activateur important des cellules NK. Les ligands de NKG2D sont les molcules MHC class I-related Chain A (MICA) et MICB, et les UL16-binding proteins (ULBP). Ces ligands sont surexprims en cas de stress cellulaire, en particulier lors d'une infection virale ou d'une transformation tumorale.

Human NK Activatory Receptors

Ligands

HLA-C (Weak)

HLA-C (Weak)

HLA-A,B,C E,F,G

MICA, MICB ULBP

HLA-E

EC
TM IC
Y x x M KIR2DS1 CD158h DAP12 KIR2DS2 CD158j DAP12 KIR2DS3 CD158i DAP12 KIR2DS4 CD158g DAP12 KIR2DS5 CD158c DAP12 Y x x M Y x x M Y x x M K D D K D D K D D K D D K D D K D D
D D R R D D K D D

KIR3DS1 DAP12

CD160 CD2?

NKG2D DAP10

CD94/NKG2C, E DAP12

ITAM

Y Binding x domain to x M p85 PI3K

Igdomain

C-lectin domain

GPI

Les rcepteurs NK activateurs

Les rcepteurs de la cytotoxicit naturelle (NCR)
Une autre famille importante de rcepteurs activateurs est constitue par les rcepteurs de la cytotoxicit naturelle (NCR) : NKp30, NKp44 et NKp46. Ces rcepteurs, qui appartiennent la superfamille des immunoglobulines, ne sont exprims que par les cellules NK, et NKp44 est dcrit comme spcifique des cellules NK actives. Les NCR sont capables d'enclencher la cytotoxicit ou la production de cytokines en l'absence d'autre stimulation.

Des ligands viraux ont t dcrits pour NKp44 et NKp46, mais les ligands cellulaires des NCR, dont l'existence est certaine, sont encore mal dfinis

Natural Cytotoxicity Receptors (NCR)

Rcepteurs spcifiques des cellules NK humaines
Toutes les NK Chromo 19 Cellules NK actives Chromo 6 Toutes les NK Chromo 6

Les Rcepteurs inhibiteurs

Les Rcepteurs activateurs

Complexes immuns

Molcules du stress : CMH-I

- MICA - MICB - ULBP

CD16 ADCC

KIR NKG2A CD94 NKG2D

ITIM

ITAM

NK

Certains KIR (Rcepteurs inhibiteurs) reconnaissent certains CMH-I

NK

KIR
KIR2DL1 KIR2DL2/3 KIR3DL1 KIR3DL2

Spcificit HLA Classe I

HLA-C groupe 2 HLA-C groupe 1 HLA-Bw4 HLA-A3, HLA-A11

R act

R inh = KIR

Toutes les combinaisons ne sont pas possibles !!!

cible

 Ce n'est pas l'absence de molcules du CMH de classe I qui dclenche l'activation des lymphocytes NK mais la prsence de ligands activateurs non compense par des signaux inhibiteurs suffisants

Notion dquilibre / balance des signaux act et inh

Ainsi, l'absence de molcules du CMH-I ne suffit pas rendre certaines cellules sensibles la lyse NK, par exemple :
- globules rouges - neurones - hpatocytes

NK

Mcanismes effecteurs
- Lyse de la cible selon 4 systmes :
- ADCC - Perforin-granzyme - Fas/FasL - TRAIL/TRAIL-R

- Synthse de cytokines : TNF-a, IFN-g, GM-CSF :

- Orientation Th1 - Activation M et des DC

- Synthse de chimiokines inflammatoires : CCL3, CCL4, CCL5 :

- Recrutement M - DC immatures - T activs

LADCC : cytotoxicit cellulaire dpendante des Ac

- La cible est reconnue par Ac - Complexe cellule cible / Ac reconnu via partie Fc par un Fc-R de la NK (FcgR-III=CD16) - Dclenchement de la lyse / dgranulation

Cytotoxicit NK

NK
Voie perforine/granzyme
Perforine FasL TRAIL TNF

Voie des rcepteurs de mort

Granzyme B

Fas DR4/5 TNFRI

Apoptose de la cible

Mcanismes dchappement
Tumeurs : - Synthse de TGFb qui diminue lexpression de NKG2D (R activateur) - Production de MICA/B solubles

NK

NK

MIC soluble empche la liaison a MIC membranaire qui est le seul capable de pleinement activer le R act = pas dactivation

Mcanismes dchappement
Virus - UL16 virale squestre ULBP dans cytoplasme = empche expression membranaire - Expression de MICA/B solubles nactivant pas NKG2D (R activateur)

MICA/B, ULBP : exprimes par C/ stresses (infectes par virus ou tumorales) et reconnues par les R activateurs !

ligands activateurs squestrs dans la cellule

NK

Plus de ligands activateurs = pas de lyse

NK

La cellule NK nest donc pas seulement un tueur du systme immunitaire, mais une cellule potentiellement capable par sa production de cytokines dorienter la rponse immunitaire adaptative. GMCSF, MIP1a,MIP1b TNFa

NK 2
IL-12, IL-15, IL-18, TNFb, IL1-b

T CD4+

INFg

Macrophage
Th1 Infection
Les cellules NK sont rgules par les cytokines et produisent des cytokines

Cintique de la rponse immunitaire

IFN de type I NK T gd

T8 cytotoxiques

Ac

CD56bright

CD56dim

CD16neg/di
m

CD16bright NKG2D CD56dim NKG2D

CD56bright

CCR7 KIR KIR

CD56dim

CXCR1

CD56bright

CD94/ NKG2A

NCR

CD94/ NKG2A

NCR

Forte production de cytrokine

Cytotoxicit basse

Faible production de cytokines

Cytotoxicit leve

CONCLUSION
Les cellules NK sont des lymphocytes ayant dimportantes proprits cytotoxiques et scrtoires. Leur exploration (phnotype et fonctions) est possible partir dun simple prlvement sanguin. Lactivit cytotoxique de ces cellules, ne ncessitant ni immunisation pralable ni prsentation antignique par le CMH-1, les rend complmentaires des lymphocytes T cytotoxiques. Les cellules NK participent la dfense anti-infectieuse et anti-tumorale de lorganisme, en premire ligne, mais aussi aprs llaboration de la rponse immunitaire spcifique de lantigne. Elles sont rgules par un quilibre dlicat entre des signaux activateurs et inhibiteurs venant de leurs rcepteurs membranaires. Lutilisation de cytokines (IL-2, IL-15 et interfron-alpha) modulant lactivit des cellules NK pourrait avoir des applications intressantes en thrapeutique anti-infectieuse et antitumorale.