Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.

gov/pmc/articles/PMC5687727/

PLoS One. 2017 ; 12(11) : e0188232. PMCID : PMC5687727

Publié en ligne le 15 novembre 2017. doi: 10.1371/journal.pone.0188232 PMID : 29141025

Suppression des ré ponses inflammatoires et infectieuses dans les macrophages

pulmonaires par l'huile d'eucalyptus et son constituant 1,8-ciné ole : rô le des
ré cepteurs de reconnaissance de formes TREM-1 et NLRP3, du ré gulateur de
MAP kinase MKP-1 et de NFκB
Niket Yadav , Conceptualisation , données , Analyse formelle , Enquête , Méthodologie , Rédaction - ébauche
originale , Rédaction - révision et édition et Harish Chandra , Conceptualisation , données , Analyse formelle ,
Acquisition de financement , Enquête , Méthodologie , Administration de projet , Ressources , Supervision ,
Rédaction – révision & édition *

M. Firoze Khan, rédacteur

Ré sumé

L'huile d'eucalyptus (HE) utilisé e en mé decine traditionnelle continue de s'avé rer utile pour
l'aromathé rapie dans les affections respiratoires ; cependant, il y a peu d'informations sur
son mé canisme d'action et ses composants actifs. Dans cette direction, nous avons é tudié l'OE
et son constituant dominant, le 1,8–ciné ole (eucalyptol), à l'aide de la ligné e cellulaire de
macrophages alvé olaires pulmonaires murins MH-S. Dans un modè le d'in lammation AM in-
duite par le LPS, le pré traitement à l'OE a ré duit de maniè re signi icative (P ≤ 0, 01 ou 0, 05)
les mé diateurs pro-in lammatoires TNF-α, IL-1 (α et β) et NO, bien qu'à un taux variable et Le
degré ; Le 1,8-ciné ole a diminué l'IL-1 et l'IL-6. Dans un modè le AM d'infection mycobacté ri-
enne, le pré traitement ou le post-traitement à l'OE a considé rablement amé lioré (P ≤ 0, 01)
l'activité phagocytaire et la clairance des agents pathogè nes. Le 1,8-ciné ole a é galement
amé lioré de maniè re signi icative la clairance des agents pathogè nes bien que l'activité
phagocytaire n'ait pas é té signi icativement alté ré e. L'HE ou le pré traitement au 1,8-ciné ole
ont atté nué les voies de signalisation in lammatoire induites par le LPS à diffé rents niveaux,
accompagné es d'une ré ponse in lammatoire diminué e. Parmi les ré cepteurs de reconnais-
sance de formes (PRR) impliqué s dans la signalisation LPS, le ré cepteur de surface de la voie
TREM (TREM-1) é tait signi icativement ré gulé à la baisse. Il est important de noter que les
pré traitements ont signi icativement ré gulé né gativement (P ≤ 0, 01) le ré cepteur PRR intra-
cellulaire NLRP3 de l'in lammasome, ce qui est cohé rent avec la diminution de la sé cré tion
d'IL-1β. De la cascade de signalisation en aval partagé e pour ces voies PRR, il y avait une at-
té nuation signi icative de la phosphorylation du facteur de transcription NF-κB et p38 (mais
une augmentation de la phosphorylation des deux autres MAP kinases, ERK1/2 et JNK1/2).
Le 1,8-ciné ole a montré une tendance gé né rale similaire à l'exception d'un effet opposé sur
NF-κB et JNK1/2. Dans ce contexte, l'un ou l'autre des pré traitements a provoqué une ré gula-
tion né gative signi icative de la MKP-1 phosphatase, un ré gulateur né gatif des MAPK.

1 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

Ensemble, nos ré sultats dé montrent que l'activité anti-in lammatoire de l'HE et du 1,8-
ciné ole est modulé e via une ré gulation né gative sé lective des voies PRR, y compris les ré cep-
teurs PRR (TREM-1 et NLRP3) et les partenaires communs de la cascade de signalisation en
aval (NF-κB, MAPK, MKP-1). A notre connaissance, il s'agit du premier rapport sur le rô le
modulateur des voies de l'in lammasome TREM-1 et NLRP3 et du ré gulateur né gatif MAPK
MKP-1 dans le contexte du potentiel anti-in lammatoire de l'HE et de son constituant 1,8-
ciné ole.

Introduction

La pré valence croissante des affections et maladies in lammatoires associé es aux infections
et autres dans les soins de santé modernes né cessite de nouvelles interventions thé rapeu-
tiques. Les anti-in lammatoires synthé tiques sté roı̈diens et non sté roı̈diens et les antibio-
tiques couramment utilisé s pour traiter les in lammations et les infections entraı̂nent sou-
vent des effets secondaires indé sirables et des consé quences sur la santé [ 1 ]. Cela a suscité
un regain d'inté rê t mondial pour des thé rapies alternatives sû res à partir de sources na-
turelles. Les produits naturels continuent d'inspirer la conception de nouveaux traitements
pour diverses maladies ; cependant, on sait peu de choses sur leur mode d'action et leurs
composants actifs.

Diffé rents systè mes mé dicinaux traditionnels tels que les mé decines indiennes Ayurveda et
Yunani utilisent des huiles naturelles et des extraits de plantes pour soigner les infections et
autres maux [ 2 - 4 ]. L'un des produits vé gé taux mé dicinaux importants est l'huile d'eucalyp-
tus (HE) dé rivé e d' Eucalyptus globulus appartenant à la famille des Myrtacé es, dont plusieurs
espè ces sont aujourd'hui pré sentes à travers le monde [ 5 ]. L'OE a é té largement utilisé e dans
le traitement des affections des voies respiratoires supé rieures [ 5 ] et d'autres affections
telles que la gastrite, le diabè te et la douleur associé e à une arthroplastie totale du genou [ 6 -
7 ]. Des é tudes indé pendantes ont rapporté des proprié té s analgé siques et anti-
in lammatoires de l'HE et de son principal composant 1, 8-ciné ole, qui repré sente jusqu'à
plus de 70 % de la teneur en huile d'eucalyptus selon l'espè ce source d'eucalyptus [ 8 - 11 ].

Des é tudes in vitro mené es par nous [ 12 ] et d'autres ont montré que l'HE é tait antimicrobi-
enne, notamment ef icace contre les agents pathogè nes respiratoires [ 13 ]. L'un des exemples
frappants est l'utilisation des HE en aromathé rapie pour soigner les infections pulmonaires
telles que la tuberculose en mé decine traditionnelle en Afrique et sur d'autres continents [ 2 ,
14 ]. De plus, il a é té rapporté que l'HE é tait ef icace contre les souches multiré sistantes telles
que Staphylococcus aureus [ 15 formant un bio ilm Staphylococcus aureus et de pseudomonas
aeruginosa [ 16 ].

A la lumiè re des activité s anti-in lammatoires et antimicrobiennes in vitro extraordinaire-

ment é tendues de l'HE et de son utilisation traditionnelle en aromathé rapie, nous avons
voulu é tudier la base mé caniste de ces effets thé rapeutiques à l'aide d'un modè le de cellules
immunitaires pulmonaires. Les macrophages alvé olaires (MA) sont l'une des premiè res
lignes de dé fense inné es dans les poumons et sont connus pour jouer un rô le important dans
l'in lammation et les infections respiratoires, y compris les infections mycobacté riennes
telles que la tuberculose [ 17 - 18 ]. Par consé quent, les MA sont des cellules cibles appro-
prié es pour é tudier l'effet de l'huile d'eucalyptus sur les poumons. La pré sente é tude a utilisé

2 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

la ligné e cellulaire de macrophages alvé olaires de souris MH-S comme modè le de

macrophage pulmonaire, le LPS comme inducteur de la ré ponse in lammatoire (un facteur de
virulence bacté rienne dans les conditions d'infection à Gram né gatif telles que la septicé mie)
M. et smegmatis modè le de Mycobacterium espèce capable d'infecter les macrophages alvé o-
laires, pour é tudier les effets immunomodulateurs et le mode d'action de l'HE et de son con-
stituant 1,8-ciné ole. Les aspects mé canistes de l'é tude se sont concentré s sur l'é tude de la
modulation des voies de signalisation de l'in lammation induite par le LPS en mesurant la
modi ication transcriptionnelle ou post-traductionnelle de plusieurs ré cepteurs et cascades
de signalisation clé s en amont et en aval, donnant de nouvelles informations sur les modes
d'action de l'OE et de son constituant 1,8 -ciné ole.

maté riaux et mé thodes

Produits naturels, produits chimiques, ré actifs et kits

L'huile d'eucalyptus (EO) dé rivé e à l'origine d' Eucalyptus globulus et a é té fournie par
Ashwin Pharma, MH, Inde, acheté e via le vendeur local Bombay Grocers, Cincinnati, OH,
USA ; la pâ te de travail (2% vol/vol) a é té pré paré e dans 10% de mé thanol (vé hicule). Le con-
stituant EO puri ié 1,8-ciné ole (eucalyptol) a é té obtenu dans le commerce (Alfa Aesar,
Reston, VA, USA); la pâ te de travail (2% vol/vol soit 0,119 M) a é té pré paré e dans 10% de
mé thanol (MeOH). Le lipopolysaccharide bacté rien (LPS) a é té obtenu dans le commerce
(Sigma, St. Louis, MO, USA) et les stocks de travail (1 mg/ml et 0,2 mg/ml) ont é té pré paré s
par dissolution dans de l'eau exempte d'endotoxines. Anticorps anti-MAPK, anticorps totaux
et phospho é levé s chez le lapin (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, Etats-Unis), anti-
corps de chè vre conjugué s à la peroxydase de raifort secondaire (HRP) (Sigma, Etats-Unis) et
anticorps monoclonaux de souris anti-β-actine ( Sigma, USA) ont é té obtenus dans le com-
merce. Les kits ELISA de cytokine ont é té obtenus auprè s d'Affymetrix Inc. eBioscience San
Diego, Californie, Etats-Unis. Toutes les amorces ont é té commandé es auprè s de Integrated
DNA technologies (Coralville, IA, Etats-Unis) et sont ré pertorié es dans Tableau 1. Kit RT-PCR
quantitatif Le kit QRT-PCR Brilliant III Ultra-fast SYBR ® green master mix a é té obtenu
auprè s d'Agilent Technologies, USA.

3 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

Tableau 1

Amorces spéci iques au gène pour l'analyse qRT-PCR dans cette étude.

Gène cible Noms des amorces Séquences d'amorce Références

MKP-1 Vers l'avant 5’TAACCACTTTGAGGGTCACTACC- 3’ [ 34 ]

Inverse 5’- TTCACAAACTCAAAGGCCTCG- 3’ [ 34 ]

mTRAIN-1 Vers l'avant 5’- CCAGAAGGCTTGGCAGAGACT- 3’ [ 35 ]

Inverse: 5’-ACTTCCCCATGTGGACTTCACT-3’ [ 35 ]

GAPDH Vers l'avant 5’- ATTGTGGAAGGGCTCATGACC-3’ [ 34 ]

Inverse 5’-ATACTTGGCAGGTTTCTCCAGG-3’ [ 34 ]

CD-14 Vers l'avant 5’-AGAATCTACCGACCATGGAGC-3’ Cette é tude

Inverse 5’-TGAAAGCGCTGGACCAATCT-3’ Cette é tude

TLR4 Vers l'avant 5’-TCCCTGCATAGAGGTAGTTCC-3’ Cette é tude

Inverse 5’-TCCAGCCACTGAAGTTCTGA-3’ Cette é tude

PSL Vers l'avant 5’-TCCAGACTCTGCCAGTCACA-3’ Cette é tude

Inverse 5’-CTCAGGTAGGCTCATGGTCG-3’ Cette é tude

Souches, ligné es cellulaires et conditions de culture

Pour les é tudes d'infection, la souche mycobacté rienne non tuberculeuse modè le à crois-
sance rapide Mycobacterium smegmatis mc 2 155 obtenue auprè s de l'American Type Culture
Collection (ATCC), Manassas, VA, USA a é té utilisé e. Il a é té cultivé dans du milieu de Sauton
contenant de la L-asparagine (26 mM), de l'acide citrique (10 mM), du K 2 HPO 4 (2 mM), du
MgSO 4 .7H 2 O (2 mM), du citrate ferrique d'ammonium (0,18 mM), du tween 80 ( 0,05 %) et
du glycé rol (0,2 %), à 37 °C dans un incubateur agitateur (200 tpm). Les cellules mycobacté ri-
ennes en croissance active ont é té ré colté es par centrifugation, lavé es et remises en suspen-
sion dans du milieu RPMI (1 x 107 UFC/ml) pour ê tre utilisé es comme inoculum pour toutes
les expé riences d'infection. Une ligné e cellulaire de macrophages alvé olaires murins MH-S
(CRL-2019) de l'ATCC (Manassas, VA) a é té utilisé e. Les cellules MH-S ont é té cultivé es à 37 °C
dans un incubateur humidi ié à 5 % de CO 2 dans un milieu RPMI 1640 complet additionné de
10 % de sé rum bovin fœtal Hyclone (Logan, UT, Etats-Unis) et d'une solution antibiotique
streptomycine-pé nicilline-glutamate (Gibco , NY, USA) ou milieu RPMI incomplet sans antibi-
otique à des ins d'expé riences de phagocytose. Les cellules MH-S ont é té ré colté es à l'aide
d'un grattoir à cellules sté rile dans du milieu RPMI frais et ont é té compté es à l'aide d'un hé -
mocytomè tre et la concentration cellulaire a é té ajusté e (1 x 10 6 cellules/ml) dans le milieu
RPMI.

Sé lection de la concentration optimale d'huile d'eucalyptus (HE) et de son constituant 1,8-
ciné ole

4 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

Des cellules MH-S ensemencé es à une densité de 1 x 10 6 cellules/ml de milieu de culture ont
é té distribué es en volumes de 5 ml dans plusieurs lacons T25 (Corning, NY, USA). Des con-
centrations variables d'OE ou de 1,8-ciné ole (0,0, 0,015, 0,020, 0,050 et 0,100 % vol/vol) ont
é té ajouté es aux lacons pour é tudier la dose-ré ponse en termes de viabilité des
macrophages. La quantité de vé hicule (10% de mé thanol) n'a pas dé passé les niveaux non in-
hibiteurs (10μl/ml de culture soit 0,1% vol/vol). Trois traitements indé pendants ont é té ré al-
isé s et analysé s.

dé fi SPL

Les cellules MH-S ont é té ensemencé es à une densité de 1 × 10 6 cellules/ml/puits et traité es
à 37 °C pendant diffé rents moments (6, 12 et 24 heures) dans des puits en triple dans des
plaques de cluster de culture à 24 puits. Les puits té moins n'ont reçu que le vé hicule (0,1 %
MeOH). Dans les puits de traitement, les cellules ont é té traité es avec de l'HE seule (0,02 %
vol/vol) ou du LPS seul (2 µg/ml) ou une combinaison d'HE (0,02 %) et de LPS (2 µg/ml). Le
traitement combiné (OE + LPS) impliquait un pré traitement avec de l'OE pendant les 3 pre-
miè res heures suivi de l'ajout de LPS à 2 μg/ml et d'une incubation supplé mentaire pendant
un certain temps (total 6, 12 et 24 heures). Dans l'ensemble au LPS seul, le traitement au LPS
des cellules a commencé à 3 heures pour le faire correspondre au traitement combiné . Pour
les expé riences de 1,8-ciné ole, la mê me conception de traitement que celle dé crite ci-dessus
pour l'OE a é té ré pé té e. Les surnageants acellulaires de toutes les expé riences ont é té collec-
té s et analysé s pour les mé diateurs in lammatoires solubles (cytokines et oxyde nitrique).
Pour comprendre la ré gulation pré coce des voies in lammatoires induites par le LPS, le
traitement au LPS a duré 30 minutes pour toutes les cibles de signalisation à l'exception de
NLRP3 (4 heures) aprè s le pré traitement initial de 3 heures avec de l'HE ou du 1, 8-ciné ole.

Activité de phagocytose et analyse de la charge pathogè ne intracellulaire

Des cellules MH-S adhé rant pendant 4 heures dans des lacons T-25 ont é té infecté es par M .
smegmatis à 10 multiplicité d'infection (MOI) en utilisant 1x10 7 bacté ries pour infecter 1x10
6
macrophages par ml de culture. Trois ensembles de traitement (2 sous-ensembles chacun)
ont é té pré paré s : traitement par vé hicule avant infection ("ensemble vé hicule"), traitement à
0,02 % d'OE avant infection (ensemble "pré -traitement"), traitement à 0,02 % d'OE aprè s
phagocytose (ensemble "post-traitement"). ). Les mé langes macrophages-bacté ries ont é té
incubé s pendant 1 heure pour permettre à la phagocytose de se produire. Le premier sous-
ensemble de lacons de « l'ensemble traité avec le vé hicule » (té moin) et de « l'ensemble de
pré traitement » a é té analysé pour l'activité de phagocytose comme suit. Les cellules ont é té
recueillies par centrifugation, dé barrassé es des bacté ries externes à l'aide de gentamycine
(10 μg/ml) et soumises à une lyse cellulaire (à l'aide d'eau distillé e suivie d'un ajout de SDS à
0,25 % et d'une neutralisation avec de l'albumine à 0,1 %). Le lysat a é té gé losé pour estimer
le nombre de bacté ries inté riorisé es par analyse des unité s formant colonies (UFC) en util-
isant la mé thode de gé lose. Le deuxiè me sous-ensemble de lacons de l'« ensemble traité par
le vé hicule » (té moin), de l'« ensemble de pré traitement » à l'OE et de l'« ensemble de post-
traitement » à l'OE a é té laissé incuber pendant 24 heures et a é té soumis à une analyse in-
terne des UFC (à l'aide le mê me test que pour la phagocytose) pour é valuer l'accumulation
bacté rienne dans les macrophages en pré sence et en l'absence d'OE. Pour les expé riences sur
le 1,8-ciné ole, la mê me conception de traitement que celle dé crite ci-dessus pour l'OE a é té

5 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

utilisé e. Le lysat a é té dilué en sé rie et é talé sur de la gé lose trypsique de soja (TSA) pour la
dé termination des unité s formant colonies (UFC).

Analyses

Viabilité cellulaire Les cellules traité es avec le vé hicule et traité es à l'EO ou au 1,8-ciné ole
ont é té coloré es avec 0, 4% de bleu Trypan (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Les cellules vi-
vantes (non coloré es) versus les cellules mortes (coloré es en bleu) ont é té compté es par hé -
mocytomè tre à l'aide d'un microscope inversé . Le nombre moyen de cellules compté es dans
les 4 zones quadrillé es (16 grands carré s) de l'hé mocytomè tre a é té multiplié par 10 4 et le
facteur de dilution pour obtenir le nombre de cellules par ml.

Oxyde nitrique (NO) Le NO en termes de nitrite a é té estimé à partir des surnageants de cul-
ture en utilisant le systè me de ré actif Griess commercial conformé ment aux instructions du
fabricant (Promega, Madison, WI, USA).

Cytokines (ELISA) Diverses cytokines ont é té analysé es dans les surnageants de cultures de
macrophages traité s et non traité s de diffé rents groupes de traitement comme dé crit ci-
dessus en utilisant les kits ELISA commerciaux spé ci iques aux cytokines selon le protocole
du fabricant (Affymetrix Inc. eBioscience San Diego, CA, USA) ; les niveaux intracellulaires
d'IL-α et d'IL-β ont é galement é té analysé s à l'aide de lysats cellulaires. Les concentrations
des cytokines ont é té estimé es à partir des courbes standard qui ont é té gé né ré es en utilisant
des concentrations connues des cytokines recombinantes puri ié es correspondantes fournies
dans les kits ELISA respectifs.

Analyse Western blot Diverses cibles de signalisation (MAPK, NFκB, NLRP3) ont é té
analysé es à l'aide d'extraits proté iques totaux pré paré s à partir de cellules té moins (vé hicule
uniquement) et traité es [(EO seul ou LPS seul ou EO + LPS) ou (ciné ole seul ou ciné ole +
LPS)]. Les cellules ont é té lysé es (coı̈ncidant avec 30 minutes ou 4 heures aprè s l'ajout de LPS
comme dé crit ci-dessus) à l'aide d'un tampon de test de radio-immunopré cipitation (RIPA)
(tris.HCl 20 mM pH 7,5, EDTA 1 mM, 1 % nonidet P-40, 0,1 % dé soxycholate de sodium, py-
rophosphate de sodium 2,5 mM, NaCl 150 mM) additionné d'inhibiteurs de proté ase et de
phosphatase. Des extraits proté iques de diffé rents traitements ont é té ré solus sur un gel SDS-
PAGE à 12 % et analysé s par analyse Western blot en utilisant des anticorps totaux et
phospho- pour MAPK (p38, JNK, ERK) et NFκB et des anticorps pour NLRP3 en utilisant le kit
ECL (Pierce Chemical, Rockford, Illinois, Etats-Unis). Des anticorps primaires de lapin (Cell
Signaling Technology, Danvers, MA, USA) ont é té utilisé s à une dilution de 1:1000 pour toutes
les cibles de test, y compris les MAPK (p38 ou p-p38, SAPK/JNK ou p-SAPK/JNK, p44/42
/ERK/1/2), NFκB et NLRP3, tandis que l'anticorps β-Actin (Sigma, USA) a é té utilisé à une di-
lution de 1:4000. L'anticorps secondaire anti-IgG de lapin conjugué à la HRP (Sigma, USA) a
é té utilisé à une dilution de 1:4000. Les bandes ont é té visualisé es à l'aide du kit ECL (Pierce
Chemical, Rockford, IL, USA) et quanti ié es à l'aide du logiciel NIH Image J.

Analyse RT-PCR quantitative L'ARN total des cellules, pré traité avec de l'OE ou du 1,8-ciné ole
pendant 3 heures suivi d'un challenge LPS de 30 minutes, a é té isolé à l'aide de Tri-ré actif
selon le protocole du fabricant (MRC Inc., Cincinnati, OH, USA) . La RT-PCR quantitative a é té
effectué e à l'aide du mé lange maı̂tre Brilliant III Ultra-Fast SYBR ® Green QRT-PCR selon le

6 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

protocole du fabricant (Agilent Technologies, Etats-Unis) en utilisant des amorces spé ci iques
aux gè nes ré pertorié es dans le tableau 1. Le gè ne domestique GAPDH a é té utilisé comme
contrô le interne pour les normalisations. L'impact du pré traitement à l'OE ou au ciné ole sur
l'expression du transcrit du gè ne cible a é té pré senté en termes de facteur de variation des
niveaux d'ARNm, calculé en comparant avec les té moins non traité s et internes, selon la for-
mule suivante : (2 -ΔΔCT ), où ΔΔCT est la diffé rence entre la valeur ΔCT de la valeur expé ri-
mentale et la valeur ΔCT des contrô les pour le changement de pli, comme dé crit dans notre
rapport pré cé dent [ 19 ].

analyses statistiques Les donné es repré sentent les moyennes ± l'erreur standard des
moyennes (SEM) obtenues à partir de trois traitements indé pendants. L'analyse statistique a
é té ré alisé e à l'aide d'une ANOVA unidirectionnelle et les diffé rences entre plusieurs groupes
ont é té dé terminé es par le test post hoc de Bonferroni-Holm. La valeur P ≤ 0,05 a é té accep-
té e comme statistiquement signi icative.

Ré sultats

Optimisation des doses pour l'huile d'eucalyptus (HE) et le 1,8-ciné ole

Pour dé terminer une concentration non cytotoxique d'huile d'eucalyptus (HE) et de son con-
stituant 1,8-ciné ole, les cellules MH-S ont é té traité es avec des quantité s croissantes d'HE ou
de 1,8-ciné ole et ont é té comparé es pour la viabilité cellulaire avec le groupe traité par le
vé hicule . Les ré sultats ont montré que l'HE et le 1,8 ciné ole n'affectent pas né gativement la
viabilité des macrophages pulmonaires ( Fig 1) jusqu'à une concentration raisonnablement
é levé e (0,05 %) ; la concentration de 0,02 % semblait ê tre le niveau sû r à utiliser et a donc é té
utilisé e dans toutes les expé riences ulté rieures.

7 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

Fig. 1

Sélection de la concentration non cytotoxique d'huile d'eucalyptus (HE) pour le traitement des
macrophages alvéolaires.

La ligné e cellulaire de macrophages alvé olaires murins MH-S (1 × 10 6 cellules / puits) a é té cultivé e en
pré sence de concentrations variables d'OE (0, 01 à 0, 10%) pendant 24 heures et la viabilité cellulaire (%) a
é té é valué e à l'aide de la coloration au bleu Trypan. Les valeurs repré sentent la moyenne ± SEM sur la base
de trois expé riences indé pendantes. Les asté risques (**) indiquent une diffé rence statistiquement signi ica-
tive ( P ≤ 0,01, respectivement) par rapport au contrô le du vé hicule.

Inhibition de la ré ponse pro-inflammatoire par l'HE et son constituant

La concentration d'essai sé lectionné e (0,02 %) d'HE (ou de son constituant 1,8-ciné ole) n'a
provoqué à elle seule aucune induction de ré ponse in lammatoire par rapport au té moin con-
tenant uniquement le vé hicule (Figs ( 2and and3 3). Le traitement au LPS seul a induit une
ré ponse pro-in lammatoire signi icative dans les AM en culture en termes de cytokines pro-
in lammatoires (TNF-α, IL-1α, IL-1β et IL-6) et de NO, contrairement au vé hicule uniquement
et à l'EO uniquement. groupes traité s. Les mé diateurs in lammatoires individuels ont aug-
menté avec le temps d'incubation dans le ré gime de traitement de 24 heures. Cette ré ponse
pro-in lammatoire a é té signi icativement (P ≤ 0,01 ou P ≤ 0,05) ré duite lorsque les cellules
ont é té pré traité es à l'HE (0,02%) pendant 3 heures avant le challenge LPS, bien que l'effet ait
varié avec le mé diateur in lammatoire et le temps- point d'incubation ( Fig 2). L'IL-6 é tait une
exception qui n'a montré aucune modulation par le pré traitement à l'OE. Les taux de TNF-α
é taient impacté s à 12 et 24 heures (P ≤ 0,05) en cas de pré traitement à l'HE ( Fig 2). Les
niveaux intracellulaire et extracellulaire d'IL-1α ont é té signi icativement impacté s à 6 et 12
heures (P ≤ 0,01), respectivement et une ré duction signi icative du niveau total (intracellu-
laire + extracellulaire) d'IL-1α a é té observé e à 12 heures (P ≤ 0,01). Les niveaux intracellu-
laires d'IL-1β (forme pro IL-1β) ont é té signi icativement impacté s à 12 et 24 heures (P ≤
0,01) ( Fig 2) tandis que les niveaux extracellulaires d'IL-1β é taient signi icativement im-
pacté s à 24 heures ((P ≤ 0,01). Le niveau total d'IL-1β é tait signi icativement ré duit à 12 et 24
heures (P ≤ 0,01). ré duit l'induction LPS de NO à 12 et 24 heures (P ≤ 0,01 ( Fig 2).

8 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

Figure 2

Modulation de la réponse pro-in lammatoire induite par le LPS dans les cellules macrophages
alvéolaires par prétraitement à l'huile d'eucalyptus (HE).

Les cellules MH-S (1x10 6 cellules/ml de culture/puits) ont é té traité es avec (i) Vé hicule (0,1% MeOH), (ii) EO
uniquement (0,02% vol/vol), (iii) LPS uniquement (2 μg/ml ), et (iv) LPS (2 µg/ml) + HE (0,02 %) ; L'OE a
é té ajouté 3 heures avant l'ajout de LPS ("pré -traitement"). Le NO et les cytokines ont é té pé riodiquement
mesuré s dans le surnageant de culture sur 24 heures. Les valeurs sont pré senté es sous forme de moyenne ±
SEM sur la base de trois traitements indé pendants. Les asté risques (* et **) indiquent une diffé rence statis-
tiquement signi icative ( P ≤ 0,05 et P ≤ 0,01, respectivement) par rapport au contrô le positif (LPS unique-
ment).

9 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

Figure 3

Modulation de la réponse pro-in lammatoire induite par le LPS dans les cellules macrophages
alvéolaires par prétraitement au 1,8-cinéole (Cin).

Les cellules MH-S (1x10 6 cellules/ml de culture/puits) ont é té traité es avec i) vé hicule (0,1 % MeOH), (ii) Cin
uniquement (0,02 % vol/vol), (iii) LPS uniquement (2 μg/ml) , (iv) LPS (2 µg/ml) + Cin (0,02 %) ; Cin a é té
ajouté 3 heures avant l'ajout de LPS ("pré -traitement"). Le NO et les cytokines ont é té pé riodiquement
mesuré s dans le surnageant de culture jusqu'à 24 heures. Les valeurs sont pré senté es sous forme de
moyenne ± SEM sur la base de trois traitements indé pendants. Les asté risques (*) et (**) indiquent une dif-
fé rence statistiquement signi icative ( P ≤ 0,05 et P ≤ 0,01, respectivement) par rapport au contrô le positif
(LPS uniquement).

Par rapport à l'HE, le pré traitement au 1,8-ciné ole a montré un effet opposé ou divergent sur
certains mé diateurs in lammatoires tels qu'une ré duction du niveau d'IL-6 (6 heures) et au-
cun effet sur le TNF-α et le NO ( Fig 3). Le pré traitement au 1,8-ciné ole a signi icativement ré -
duit (P ≤ 0,01) les niveaux intracellulaires d'IL-1α à 6 et 24 heures et d'IL-1β à 12 heures.
Aucune ré duction signi icative des taux extracellulaires d'IL-1α et d'IL-1β n'a é té observé e (
Fig 3). Le taux global d'IL-1α a donc montré une diminution signi icative à 6 et 24 heures (P ≤
0,05) et celui d'IL-1β à 12 heures (P ≤ 0,01).

Modulation de l'activité de phagocytose et de la charge pathogè ne intracellulaire dans un

modè le d'infection mycobacté rienne

Dans le modè le d'infection murine AM destiné à imiter les infections mycobacté riennes dans
les macrophages alvé olaires, le pré traitement à l'OE a provoqué une amé lioration signi ica-
tive de l'activité de phagocytose ( Fig 4A) et une augmentation considé rable de la clairance
bacté rienne (P ≤ 0,01) (ré duction de l'accumulation bacté rienne intracellulaire ) de cette es-
pè ce mycobacté rienne ( Fig 4B). Pour le 1,8-ciné ole, bien que le pré traitement n'ait pas
amé lioré l'activité phagocytaire de maniè re signi icative par rapport au groupe non traité (
Fig 4C), il y a eu une augmentation signi icative de la clairance bacté rienne à la fois en pré -
traitement (P ≤ 0,05) et en post-traitement. groupes de traitement (P ≤ 0,01) ( Fig 4D). Cela a
coı̈ncidé avec une lé gè re augmentation parallè le, bien que non signi icative (P> 0, 05), des

10 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

taux de cytokine anti-mycobacté rienne TNF-α dans les macrophages pré traité s à l'OE (don-
né es non pré senté es). Le traitement post-phagocytose avec l'OE a montré une ré ponse rela-
tivement plus importante par rapport au pré -traitement.

Figure 4

Effet de l'huile d'eucalyptus (HE) et du 1,8-cinéole sur la phagocytose de Mycobacterium smegmatis

et sa clairance lors de l'infection des macrophages alvéolaires.

Panels A et C : effet de l'HE et du ciné ole sur l'activité de phagocytose (1h) ; Panneaux B et D : effet de l'HE et
du ciné ole sur la clairance bacté rienne (24 h). Les cellules MH-S (1x10^6 cellules/ml de culture/puits) ont
é té traité es avec de l'HE (0,02 % v/v) ou du ciné ole soit 3 h avant la phagocytose ("pré -traitement") ou juste
aprè s la phagocytose ("post-traitement") lors d'une infection par M . smegmatis . Le comptage bacté rien (an-
alyse des UFC) a é té effectué sur les lysats de cellules macrophages à 1 heure (phagocytose) ou 24 heures
(charge pathogè ne) aprè s l'infection. Les valeurs sont pré senté es sous forme de moyenne ± SEM sur la base
de trois traitements indé pendants. Les asté risques (*) et (**) indiquent une diffé rence statistiquement signi-
icative ( P ≤ 0,05 et P ≤ 0,01, respectivement) par rapport au vé hicule té moin.

Modulation de la signalisation immunitaire inné e pro-inflammatoire par l'HE et le 1,8-

ciné ole

Phosphoactivation des MAPK, NFκB et NLRP3 Comme pré vu, le LPS a induit de maniè re signi-
icative la phosphorylation des MAPK qui sont connues pour activer la cascade de signalisa-
tion en aval, y compris les facteurs de transcription et les molé cules effectrices (mé diateurs
solubles) lors de la ré ponse in lammatoire induite par le LPS. Dans le groupe pré traité à l'OE
ou au 1,8-ciné ole, il y a eu une augmentation signi icative des ERK phosphorylé es (ERK1/2)
et une ré duction signi icative de la p38 phosphorylé e. Les formes phosphorylé es de JNK1/2
ont é té augmenté es par l'OE et diminué es par le 1,8-ciné ole, tandis que le phospho-NFκB
(P65) a é té diminué par l'OE et augmenté par le 1,8-ciné ole ( Fig 5). En termes de contenu to-
tal, les niveaux de ERK1/2 ont é galement augmenté de maniè re signi icative tandis que les
niveaux totaux de p38 et de JNK1/2 kinase ont é té ré duits dans le groupe pré traité à l'OE.
D'autre part, le pré traitement au 1,8-ciné ole a entraı̂né une augmentation de la p38 totale

11 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

mais aucun changement dans les niveaux totaux de ERK1/2 et JNK1/2 par rapport au groupe
traité uniquement au LPS ( Fig 5).

Figure 5

Modulation de l'activation LPS des MAPK dans les macrophages alvéolaires par prétraitement avec
de l'huile d'eucalyptus (HE) ou du 1,8-cinéole (Cin).

(AD) transferts de pré traitement EO ; (EH) Transferts de pré traitement Cin pour p38, SAPK/JNK, ERK1/2 et
NF-kB. MAPK, respectivement. L'activation a é té é valué e en termes d'augmentation à la fois de la teneur to-
tale et de la forme phosphorylé e ; L'activation de NF-kB a é té é valué e en termes d'augmentation de sa forme
phosphorylé e. L'analyse densitomé trie des transferts Western a é té effectué e à l'aide de l'image du logiciel
NIH J. Lanes1-4 repré sente le contrô le du vé hicule (VC), EO uniquement, LPS uniquement et EO + LPS pour
le groupe de pré traitement EO ou VC, Cin, LPS et Cin + LPS pour le groupe de pré traitement Cin, respective-
ment. Les dé tails sur les traitements et les anticorps pour les MAPK totales et phospho- et la β-actine sont
dé crits dans la section Maté riels et mé thodes. Les valeurs repré sentent des moyennes ± SEM basé es sur trois
traitements indé pendants. Les asté risques (*) et (**) indiquent une diffé rence statistiquement signi icative (
P ≤ 0,05 et P ≤ 0,01, respectivement) par rapport aux traitements LPS tandis que le signe diè se (#) indique
une signi ication statistique par rapport au contrô le du vé hicule. Voir ichier S1 pour les images Western blot
originales.

Le LPS induit l'activation de l'in lammasome NLRP3 qui joue un rô le vital dans la sé cré tion
d'IL-1 et la ré ponse in lammatoire. L'OE et le pré traitement au 1,8-ciné ole (P ≤ 0, 01) ont ré -
duit de maniè re signi icative l'activation de NLRP3 induite par le LPS, une é tape critique dans
l'activation de l'in lammasome ( Fig 6).

12 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

Figure 6

Modulation de l'activation LPS de l'in lammasome NLRP3 dans les macrophages alvéolaires par
prétraitement avec de l'huile d'eucalyptus (EO) ou du 1,8-cinéole (Cin).

L'expression de la proté ine NLRP3 a é té é valué e dans les lysats cellulaires des groupes de pré traitement EO
et Cin (pré traitement de 3 heures avec EO ou Cin à une concentration de 0, 02% suivi d'une induction avec 2
μg / ml de LPS pendant 4 heures). Les lysats cellulaires ont é té analysé s par Western blot en utilisant des an-
ticorps anti-NLRP3. L'analyse densitomé trie des Western blots a é té effectué e à l'aide de l'image du logiciel
NIH J. Lanes1-6 repré sente respectivement VC, EO, Cin, LPS et EO + LPS, Cin + LPS. Les valeurs repré sentent
des moyennes ± SEM basé es sur trois traitements indé pendants. Les asté risques (*) et (**) indiquent une dif-
fé rence statistiquement signi icative ( P ≤ 0,05 et P ≤ 0,01, respectivement) par rapport au traitement LPS
seul, tandis que le signe diè se (#) indique une signi ication statistique par rapport au vé hicule té moin. Voir
ichier S1 pour les images Western blot originales.

Ré gulation transcriptionnelle d'autres cibles clé s de signalisation immunitaire inné e L'expres-
sion gé nique des cibles clé s de la signalisation LPS, y compris les ré cepteurs de surface TLR4
(et ses partenaires de liaison LBP et CD14) et TREM-1, et la phosphatase MKP-1 de MAPK, a
é té surveillé e aprè s 30 minutes de traitement LPS sur la base d'une RT-PCR quantitative (
igure 7). Les niveaux d'expression de TLR4, LBP et CD14 dans les é chantillons pré traité s
n'é taient pas signi icativement diffé rents par rapport au LPS seul. En revanche, les niveaux
d'ARNm MKP-1 et TREM-1 dans les groupes de pré traitement EO ou 1,8-ciné ole ont é té signi-
icativement ré duits par rapport au groupe LPS uniquement.

13 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

Figure 7

Modulation de l'expression de l'A RNm des gènes cibles clés de la voie de signalisation du LPS par
prétraitement avec de l'huile d'eucalyptus (HE) et du 1,8-cinéole.

(AE) Gè nes cibles codant MKP-1, TREM-1, LBP, TLR4 et CD14, respectivement. L'expression de l'ARNm a é té
analysé e par RT-PCR quantitative en utilisant l'ARN total isolé de diffé rents groupes de traitement, comme
dé taillé dans la igure 6lé gende Le gè ne domestique GAPDH a é té utilisé comme contrô le interne pour les
normalisations et la diffé rence d'expression en tant que changement de pli a é té dé terminé e en utilisant la
mé thode de la formule (2 -ΔΔCt ). Les valeurs sont pré senté es sous forme de moyenne ± SEM sur la base de
trois groupes de traitement indé pendants. Les asté risques (*) et (**) indiquent une diffé rence statistique-
ment signi icative ( P ≤ 0,05 et P ≤ 0,01, respectivement) par rapport au traitement au LPS seul.

Discussion

Malgré un rô le reconnu de l'HE dans l'aromathé rapie pour les affections pulmonaires, y com-
pris les affections in lammatoires et infectieuses, il existe peu de donné es signi icatives sur le
mode d'action mé caniste de ce produit dans les modè les pulmonaires ( in vitro et in vivo ).
Etant donné que les HE provenant de diffé rentes sources/fournisseurs peuvent varier quanti-
tativement dans la ré ponse biologique en raison des proportions variables des constituants,
le test des constituants individuels pourrait fournir des informations mé canistes vitales. Dans
cette direction, en utilisant un in vitro modè le de macrophage alvé olaire pulmonaire murin
20 ], ainsi que l'OE et son principal constituant, le 1,8-ciné ole, nous avons observé une inhibi-
tion des ré ponses in lammatoires et infectieuses ; les ré ponses ont é té mesuré es en termes de
mé diateurs pro-in lammatoires, de phagocytose et d'é limination de l'infection, et d'activa-
tion des ré cepteurs et transducteurs clé s de la voie de signalisation de l'in lammation induite
par le LPS.

14 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

Atté nuation de la ré ponse inflammatoire

L'in lammation est une ré ponse immunitaire inné e importante dé clenché e par des stimuli ex-
ternes tels que des agents pathogè nes et des produits pathogè nes (par exemple LPS) ou une
blessure physique pour combattre la cause initiale de la menace et ré tablir l'homé ostasie.
Cependant, une in lammation incontrô lé e est dé lé tè re pour les tissus et peut entraı̂ner di-
verses conditions in lammatoires et des lé sions cellulaires/tissulaires [ 21 ]. Alors que dif-
fé rents types de cellules immunitaires telles que les neutrophiles, les macrophages, les
é osinophiles, les lymphocytes peuvent ê tre impacté s lors de l'in lammation [ 22 - 23 ], cette
é tude s'est concentré e sur les macrophages qui sont connus pour jouer un rô le clé dans les in-
fections et l'in lammation. Les macrophages activé s par des stimuli in lammatoires tels que
le LPS dans les infections bacté riennes sé crè tent des cytokines pro-in lammatoires telles que
le TNF-α, l'IL-1, l'IL-6 et d'autres mé diateurs solubles tels que l'oxyde nitrique (NO), qui
jouent un rô le crucial dans l'induction et la progression de la ré ponse in lammatoire. L'acti-
vation continue des macrophages peut conduire à des niveaux é levé s de ces mé diateurs qui
peuvent conduire à des conditions in lammatoires aiguë s ou chroniques telles que le syn-
drome de type choc septique entraı̂nant des lé sions tissulaires et une dé faillance des organes.
21 ]. Par consé quent, l'é valuation de nouveaux candidats pour leur ef icacité anti-
in lammatoire à l'aide de ce paradigme de ré ponse in lammatoire modè le dans les
macrophages peut aider à identi ier des thé rapies alternatives ou complé mentaires promet-
teuses.

Dans cette é tude, le pré traitement des macrophages alvé olaires avec de l'OE avant la provo-
cation au LPS a entraı̂né une ré duction des mé diateurs solubles pro-in lammatoires, y com-
pris des cytokines telles que TNF-α, IL-1β, IL-1α et NO ( Fig 2). En comparaison, le 1,8-ciné ole
a é galement montré un effet anti-in lammatoire, mais seulement pour certains mé diateurs
(IL-1α et IL-1β intracellulaires ; sé cré tion d'IL-6), et les effets variaient en fonction du mo-
ment de l'incubation ( Fig 3). Bien que cette é tude ait montré un effet atté nuant signi icatif à
un niveau de 0,02 % d'OE ou de 1,8-ciné ole, l'é tendue peut dé pendre de la concentration et
augmenter à des concentrations plus é levé es. Fait inté ressant, des effets anti-in lammatoires
de l'OE ont é galement é té rapporté s chez les MDM humains [ 24 ] et les AM isolé s de patients
atteints de MPOC [ 25 ]. Pris ensemble, nous avons observé une diminution signi icative des
puissants mé diateurs pro-in lammatoires (cytokines et NO) par l'OE et le 1,8-ciné ole dans les
macrophages pulmonaires exposé s, ce qui explique la nature et la base scienti ique de leur
potentiel anti-in lammatoire en aromathé rapie.

Elimination amé lioré e des agents pathogè nes

La derniè re dé cennie a é té té moin d'une é mergence sans pré cé dent de souches ré sistantes
aux mé dicaments d'agents pathogè nes humains prioritaires tels que Mycobacterium tubercu-
losis et Staphylococcus aureus (MRSA) [ 26 - 27 ]. Les mé dicaments de synthè se et les antibio-
tiques disponibles s'avè rent moins ef icaces pour relever les dé is posé s par les souches ré sis-
tantes aux mé dicaments. L'identi ication de composé s d'origine naturelle pourrait fournir
des agents alternatifs pour lutter contre le problè me de ré sistance en raison de leur mode
d'action divergent. Dans ce contexte, nos ré sultats utilisant un modè le d'infection mycobac-
té rienne sont signi icatifs en ce que le pré traitement ou le post-traitement des macrophages
avec de l'HE ou du 1,8-ciné ole a considé rablement amé lioré la clairance intracellulaire des

15 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

agents pathogè nes ( Fig 4B et 4D). De mê me, le pré traitement à l'OE a amé lioré de maniè re
signi icative la phagocytose tandis que le pré traitement au 1,8-ciné ole a eu peu d'effet, bien
que non signi icatif ( Fig 4A et 4C). L'amé lioration de la phagocytose par l'EO est cohé rente
avec celle observé e dans les macrophages humains dé rivé s de monocytes (MDM) [ 24 ]. Une
é tude sur les neutrophiles humains a rapporté une diminution de l'activité de phagocytose
par les extraits de laurier noble (BL) et de cajuput (CA) contenant du 1,8-ciné ole comme
composant principal, mais la contribution d'autres composants de ces extraits à cette inhibi-
tion ne peut ê tre exclue [ 28 ]. Une plus grande clairance bacté rienne dans le post-traitement
de l'OE pourrait ê tre due à un effet additif dû à un contact prolongé et é ventuellement à une
action antimicrobienne directe des molé cules d'OE, comme dé montré dans notre pré cé dente
é tude in vitro [ 12 ]. Collectivement, ces ré sultats impliquent que l'HE et ses constituants ont
le potentiel d'ê tre un agent anti-infectieux alternatif ou complé mentaire pour lutter contre
les infections mycobacté riennes d'importance clinique.

Orchestration des voies de signalisation pro-inflammatoires via des modifications

transcriptionnelles et post-traductionnelles

En ré ponse à des stimuli in lammatoires et infectieux, les macrophages expriment diffé rents
ré cepteurs de reconnaissance de formes (PRR), y compris des ré cepteurs de surface tels que
les ré cepteurs de type pé age (TLR) et des ré cepteurs dé clencheurs exprimé s sur les cellules
myé loı̈des 1 (TREM-1) et des ré cepteurs cytosoliques tels que Nod -like receptors (NLR), qui
peuvent fonctionner de concert pour activer des cascades de signalisation inné es communes
en aval composé es de MAP kinases et de facteurs de transcription [ 29 ]. L'activation des MAP
kinases (MAPK) conduit inalement à l'activation des facteurs de transcription NF-κB et AP-1
[ 30 - 31 ] entraı̂nant l'expression de gè nes pro-in lammatoires codant pour diverses cy-
tokines telles que TNF-α, IL-1α, IL -6 et des enzymes catalysant la gé né ration d'espè ces ré ac-
tives de l'oxygè ne ou d'espè ces ré actives de l'azote (par exemple NO) dans les macrophages
activé s en ré ponse à des stimuli externes.

Nous avons é tudié l'effet de l'OE et du 1,8-ciné ole sur les PRR de surface de la voie de signali-
sation de l'in lammation induite par le LPS. L'analyse transcriptionnelle (expression de
l'ARNm) du ré cepteur TLR4 et de ses partenaires (LBP et CD14) dans la voie de signalisation
du ré cepteur TLR4 induite par le LPS n'a montré aucun effet du pré traitement avec l'HE ou le
1,8-ciné ole, suggé rant que l'immuno-modulation par ces produits naturels au cours de l'in-
lammation induite par le LPS pourrait ê tre limité e aux cibles en aval du complexe de signali-
sation du ré cepteur TLR4. Un autre ré cepteur de surface, TREM-1, est connu pour ê tre ré gulé
positivement dans des conditions de type choc septique impliquant le LPS et est fortement
exprimé dans les monocytes des tissus humains infecté s par des bacté ries [ 32 - 33 ]. Il a é té
dé montré que l'expression de TREM-1 ampli ie la voie de l'in lammation mé dié e par le TLR [
32 - 33 ]. Dans notre é tude, le pré traitement à l'OE a signi icativement diminué l'expression
de l'ARNm de TREM-1 induite par le LPS ( Fig 7). Le pré traitement au 1,8-ciné ole a é galement
ré duit l'expression, mais la diffé rence n'é tait pas statistiquement signi icative. La ré duction
observé e de l'expression de TREM-1 par l'OE est une dé couverte importante car elle ouvre
de nouvelles voies pour des é tudes é largies sur l'atté nuation de l'in lammation par l'OE et ses
composants, en particulier dans les conditions de santé in lammatoires, où le rô le de la voie
TREM-1 est critique .

16 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

L'activation des ré cepteurs de type Nod (NLR), les ré cepteurs de reconnaissance de formes
cytosoliques (PRR), dans les macrophages est essentielle pour la ré ponse immunitaire inné e
aux stimuli in lammatoires et infectieux. Contrairement aux TLR, qui reconnaissent les mo-
tifs molé culaires associé s aux agents pathogè nes (PAMP) sur les surfaces, les NLR sont ac-
tivé s à l'inté rieur de la cellule et font partie de l'in lammasome [ 34 ]. Les in lammasomes
sont formé s par les complexes multiproté iques avec diffé rents NLR tels que NLRP1b, NLRP3
et NLRC4. Les in lammasomes actifs peuvent conduire à l'activation mé dié e par la caspase 1
des cytokines hautement in lammatoires IL-1β et IL18 [ 35 - 36 ]. Par consé quent, la ré gula-
tion de ce puissant complexe de signalisation in lammatoire est essentielle dans les condi-
tions in lammatoires. Le pré traitement avec de l'OE ou son composant 1,8-ciné ole a consid-
é rablement atté nué les niveaux d'IL-1β, ce qui a coı̈ncidé avec la ré gulation à la baisse du ré -
cepteur NLRP3 du complexe in lammasome ( Fig 6). Cette observation souligne en outre la
puissante activité anti-in lammatoire de l'HE et sa composante en tant que thé rapie alterna-
tive pour diverses maladies in lammatoires impliquant l'in lammasome. D'autres é tudes dans
ce sens pourraient é lucider des informations concernant la modulation d'autres composants
de l'in lammasome.

Dans les voies de signalisation pro-in lammatoires, les MAPK (p38, JNK1/2, ERK1/2) et NF-
κB sont activé s par phosphorylation au niveau des ré sidus thré onine ou tyrosine des formes
inactives (non phosphorylé es), vé hiculant le signal des membranes cellulaires vers le noyau
et contrô lant ainsi l'expression de diffé rents mé diateurs in lammatoires [ 21 ]. De plus, les
MAPK peuvent à leur tour phosphoryler d'autres proté ines kinases appelé es proté ines ki-
nases activé es par MAPK (MAPKAPK) [ 21 ]. Alternativement, les MAPK peuvent ê tre dé phos-
phorylé es par la MAP kinase phosphatase MKP-1 [ 37 - 38 ] pour maintenir l'homé ostasie im-
munitaire. Lorsqu'elles é taient pré traité es avec de l'OE, la phosphorylation induite par le LPS
des transducteurs de signal clé s NFκB et p38 é tait diminué e tandis que celle des autres MAPK
(ERK1/2 et JNK1/2) é tait augmenté e ( Fig 5). L'augmentation de la phosphorylation de
ERK1/2 indique é galement l'effet anti-in lammatoire de l'HE/ciné ole, comme dé montré pour
une wogonine lavonoı̈de dé rivé e d'une plante [ 39 ]. L'atté nuation de la phosphorylation de
NF-κB et p38 é tait en accord avec la diminution des principaux mé diateurs in lammatoires, y
compris les cytokines (TNF-α, IL-1α et IL-1β) et NO. Bien que le traitement au 1,8-ciné ole at-
té nue la phosphorylation de p38 (et de JNK1/2) et augmente la phosphorylation de ERK1/2 (
Fig 5), il n'a pas montré autant d'effet atté nuant que l'OE sur la production de mé diateurs in-
lammatoires. L'une des raisons de cette divergence peut ê tre que le 1,8-ciné ole a augmenté
le phospho-NFκB contrairement à l'OE, ce qui aurait pu inverser en partie l'effet atté nuant de
la modulation MAPK. Pris ensemble, l'OE et le 1,8-ciné ole pourraient agir sur diffé rentes
cibles pour moduler de maniè re diffé rentielle la phosphoactivation des MAPK et du NFκB,
contrô lant ainsi de maniè re divergente les ré ponses in lammatoires mé dié es par le LPS.

La production de NO est causé e par la surexpression de l'oxyde nitrique synthase inductible

(iNOS) [ 40 ] qui est notamment induite via la voie NF-κB [ 41 ] soit directement, soit par des
cytokines in lammatoires. Par exemple, l'inhibition de l'enzyme de conversion du TNF-α
(TACE) par silençage gé nique a ré duit l'in lammation locale dans un modè le animal de lapin
via une expression ré duite d'iNOS [ 42 ]; l'utilisation de l'inhibiteur iNOS a ré duit l'in lamma-
tion pulmonaire dans des modè les murins [ 43 ]. Dans ce contexte, il est donc signi icatif que
le pré traitement à l'OE ait provoqué une ré duction de la production de NO induite par le LPS
dans notre modè le, ce qui a coı̈ncidé avec une diminution de la forme activé e de NF-κB (Figs
( 2and and3 3). En revanche, le pré traitement au 1,8-ciné ole n'a ré duit ni les niveaux de NO ni

17 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

la forme phosphorylé e de NF-κB (qui é tait plutô t é levé e), suggé rant ainsi un mode de ré gula-
tion divergent par le 1,8-ciné ole.

Pour lutter contre l'effet dé lé tè re de la stimulation des PRR et des MAPK, la phosphatase
MKP-1 est induite lors de la signalisation LPS en tant que ré gulateur né gatif clé de la phos-
phorylation des MAPK. MKP-1 dé phosphoryle gé né ralement les MAPK, atté nuant ainsi la
ré ponse pro-in lammatoire des cytokines [ 44 ] en ré gulant né gativement les activité s des
MAPK [ 45 ]. D'autre part, il a é té dé montré que l'absence de cette proté ine, comme chez les
souris dé icientes en DUSP1 (DUSP1-/-), augmente l'activation de p38 et la production de cy-
tokines dans les macrophages dé rivé s de la moelle osseuse. De plus, les souris DUSP1-/- ont
montré une lé talité accrue et une surproduction de TNF-α et d'IL-6 lors d'une provocation au
LPS [ 46 ]. Alors que l'activité de la proté ine MKP-1 est connue pour ê tre ré gulé e aprè s la tra-
duction (phosphorylation et acé tylation) pour aider à interagir avec les MAPK [ 44 ], le niveau
initial d'induction de la MKP-1 par le LPS peut ê tre critique. Un pré traitement avec de l'OE ou
du 1,8-ciné ole a ré duit les niveaux d'ARNm de MKP-1 ( igure 7), suggé rant une ré gulation
né gative de la transcription de MKP-1 ; cela pourrait à son tour avoir conduit à des niveaux
é levé s d'ERK1/2 phosphorylé , favorisant ainsi une ré ponse in lammatoire diminué e.

conclusion

Dans l'ensemble, cette é tude dé montre la nature et la base mé caniste des puissantes pro-
prié té s anti-in lammatoires et anti-infectieuses de l'HE et de son constituant 1,8-ciné ole dans
les modè les d'in lammation et d'infection pulmonaires basé s sur les macrophages alvé o-
laires. De futures é tudes sur les macrophages humains et d'autres cellules immunitaires
pourraient fournir des informations plus complè tes sur ces proprié té s. En termes d'activité
anti-infectieuse in vivo, l'OE a stimulé la phagocytose et la clairance des pathogè nes des my-
cobacté ries dans les macrophages pulmonaires. De mê me, le 1,8-ciné ole é tait é galement ef i-
cace dans la clairance des mycobacté ries chez les MA infecté s. Pour l'activité anti-
in lammatoire, alors que l'HE semblait plus polyvalente que son constituant 1,8-ciné ole, les
deux cytokines IL-1 atté nuaient de maniè re signi icative. Ces effets immunomodulateurs ont
coı̈ncidé avec des alté rations dans les bras de signalisation en amont et en aval de la voie de
signalisation in lammatoire induite par le LPS ( Fig 8). En particulier, l'atté nuation de la
ré ponse IL-1 par l'OE et le 1,8-ciné ole a coı̈ncidé avec leur capacité commune à diminuer
l'activation de l'in lammasome NLRP3. La ré gulation à la baisse du ré cepteur de reconnais-
sance de formes de surface TREM-1 par EO é tait aligné e sur la modulation de l'activation en
aval de la cascade de signalisation (MAPK et NF-κB) et la diminution de la ré ponse pro-
in lammatoire globale au LPS. De plus, la MAP kinase phosphatase MKP-1, un ré gulateur né -
gatif clé des MAPK, a é galement é té alté ré e par l'OE et le 1,8-ciné ole. Collectivement, les
principales cibles de ré cepteurs en amont identi ié es et les é vé nements de signalisation en
aval spé ci iques impacté s par l'OE et son constituant 1,8-ciné ole pourraient fournir de nou-
velles avenues pour le dé veloppement futur de pistes thé rapeutiques alternatives ou complé -
mentaires dé rivé es de l'OE contre les conditions in lammatoires ou infectieuses d'impor-
tance clinique.

18 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

Figure 8

Représentation schématique du mode d'action immunomodulateur de l'huile d'eucalyptus et de son

constituant 1,8-cinéole sur différentes cibles des voies induites par le LPS/infection dans le
macrophage alvéolaire.

Abréviations : HE, huile d'eucalyptus ; Cin, 1,8-ciné ole; LPS, Lipopolysaccharide ; TLR, ré cepteur de type
Toll ; LBP, proté ine de liaison au LPS; CD14, Cluster de diffé renciation 14 ; TREM-1, ré cepteur dé clencheur
exprimé sur les cellules myé loı̈des 1 ; IRAK, kinases associé es au ré cepteur de l'IL-1 ; TRAF6, facteur 6 asso-
cié au ré cepteur du TNF ; MAPK, proté ines kinases activé es par les mitogè nes ; ERK, kinases ré gulé es par un
signal extracellulaire ; JNK : kinases c-Jun N-terminales ; MKP-1, MAP kinase phosphatase-1; NF-κB, activa-
teur de chaı̂ne lé gè re kappa du facteur nuclé aire des lymphocytes B activé s ; NLRP3, domaine pyrine de la
famille des ré cepteurs de type Nod contenant 3 ; NO, Oxyde nitrique : TF, Facteur de transcription.

Renseignements à l'appui

19 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

Fichier S1

Images Western blot pour 5et 6.

Pour Fig 5 : (AD) transferts de pré traitement EO ; (EH) Transferts de pré traitement Cin pour p38, SAPK/JNK,
ERK1/2 et NF-kB. MAPK, respectivement. La voie M repré sente l'é chelle de poids molé culaire des proté ines,
les voies 1 à 4 repré sentent le contrô le du vé hicule (VC), EO uniquement, LPS uniquement et EO + LPS pour
le groupe de pré traitement EO et VC, Cin, LPS et Cin + LPS pour le pré traitement Cin groupe, respectivement.
Pour igure 6 : la voie M repré sente l'é chelle de poids molé culaire des proté ines, les voies 1 à 6 repré sentent
VC, EO, Cin, LPS et EO + LPS, Cin + LPS, respectivement.

(PDF)

Cliquez ici pour un ichier de donné es supplé mentaire. (465K, pdf )

Remerciements

NY reconnaı̂t le Microbial Pathogenese and Immunotoxicology Laboratory pour avoir fourni

l'opportunité et le soutien à cette recherche.

Abré viations

20 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

UFC Des unité s formant des colonies

HE Huile d'eucalyptus

ERK Kinases extracellulaires ré gulé es par le signal

JNK c-Jun kinases N-terminales

SLP Lipopolysaccharide

MAPK Proté ines kinases activé es par les mitogè nes

MOI Multiplicité d'infection

NON L'oxyde nitrique

p38 la proté ine kinase activé e par le mitogè ne p38

Dé claration de financement

L'é tude a é té soutenue en partie par les fonds de l'Université de Cincinnati. NY reconnaı̂t le
Microbial Pathogenese and Immunotoxicology Laboratory pour son soutien à cette
recherche.

Disponibilité des donné es

Toutes les donné es pertinentes se trouvent dans l'article et son ichier d'informations à l'ap-
pui.

Ré fé rences

1. Sarkar S, Mazumder S, Saha SJ, Bandyopadhyay U. Gestion de l'in lammation par les polyphé nols naturels : Une
mise à jour mé caniste complè te . Curr Med Chem . 2016 ; 23 ( 16 ): 1657–1695. [ PubMed ] [ Google Scholar ]

2. Tabutia JRS, Kukundab CB, Waako PJ. Plantes mé dicinales utilisé es par les praticiens de la mé decine traditionnelle
dans le traitement de la tuberculose et des affections apparenté es en Ouganda . J Ethnopharmacol . 2010 ; 127 :
130–136. doi : 10.1016/j.jep.2009.09.035 [ PubMed ] [ Google Scholar ]

3. Tsai ML, Lin CC, Lin WC, Yang CH. Activité s antimicrobiennes, antioxydantes et anti-in lammatoires des huiles
essentielles de cinq herbes sé lectionné es . Biosci Biotechnol Biochem . 2011 ; 75 ( 10 ): 1977-1983. [ PubMed ] [
Google Scholar ]

21 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

4. Laird K, Phillips C. Phase vapeur : une future utilisation potentielle des huiles essentielles comme antimicrobiens .
Lettres en Appl Microbiol . 2012 ; 54 ( 3 ): 169–174. [ PubMed ] [ Google Scholar ]

5. Vuong QV, Chalmers AC, Jyoti Bhuyan D, Bowyer MC, Scarlett CJ. Proprié té s botaniques, phytochimiques et
anticancé reuses des espè ces d'Eucalyptus . Chem Biodivers . 2015 ; 12 ( 6 ): 907–924 doi : 10.1002/cbdv.201400327
[ PubMed ] [ Google Scholar ]

6. Kumar HD, Laxmidhar S. Une revue phytochimique et pharmacologique d' Eucalyptus globulus : un arbre polyvalent
. Int J Res Ayurveda Pharm . 2011 ; 2 ( 5 ): 1527-1530. [ Google Scholar ]

7. Jun YS, Kang P, Min SS, Lee JM, Kim HK, Seol GH. Effet de l'inhalation d'huile d'eucalyptus sur la douleur et les
ré ponses in lammatoires aprè s une arthroplastie totale du genou : un essai clinique randomisé . Complément basé sur
Evid alternat Med . 2013 ; 2013 : 502727 doi: 10.1155/2013/502727 [ PMC gratuit ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]

8. Silva J, Abebe W, Sousa SM, Duarte VG, Machado MIL, Matos FJA. Effets antalgiques et anti-in lammatoires des huiles
essentielles d'Eucalyptus . J Ethnopharmacol . 2003 ; 89 ( 2–3 ): 277–283. [ PubMed ] [ Google Scholar ]

9. Santos FA, Rao VS. Effets anti-in lammatoires et antinociceptifs du 1,8-ciné ole, un oxyde terpé noı̈de pré sent dans de
nombreuses huiles essentielles vé gé tales . Phytother Res . 2000 ; 14 ( 4 ): 240–244. [ PubMed ] [ Google Scholar ]

10. Juergens UR, Engelen T, Rack´e K, St¨ober M, Gillissen A, Vetter H. Activité inhibitrice du 1,8-ciné ol (eucalyptol) sur
la production de cytokines dans des lymphocytes et des monocytes humains en culture . Pulm Pharmacol Ther . 2004 ;
17 ( 5 ): 281-287. doi : 10.1016/j.pupt.2004.06.002 [ PubMed ] [ Google Scholar ]

11. Angela E, Sadlon ND, Lamson DW. Effets immunomodulateurs et antimicrobiens de l'huile d'eucalyptus et des
dispositifs simples d'inhalation . Altern Med Rev . 2010 ; 15 ( 1 ):33–47. [ PubMed ] [ Google Scholar ]

12. Yadav N, Yadav E, Yadav JS. Activité antimicrobienne de produits naturels sé lectionné s contre les pathogè nes
bacté riens Gram-positifs, Gram-né gatifs et acido-ré sistants . Études médicales alternatives . 2012 ; 2 ( 3 ): e13. [ Google
Scholar ]

13. Cermelli C, Fabio A, Fabio G, Quaglio P. Effet de l'huile essentielle d'eucalyptus sur les bacté ries et les virus
respiratoires . Curr Microbiol . 2008 ; 56 ( 1 ): 89–92. doi : 10.1007/s00284-007-9045-0 [ PubMed ] [ Google Scholar
]

14. Ramos Alvarenga RF, Wan B, Inui T, Franzblau SG, Pauli GF, Jackie BU. Activité antituberculeuse aé roporté e de
Eucalyptus citriodora l'huile essentielle . J Nat Prod . 2014 ; 77 ( 3 ): 603–610. doi : 10.1021/np400872m [ PubMed ]
[ Scholar Google

15. Mulyaningsih S, Sporer F, Reichling J, Wink M. Activité antibacté rienne des huiles essentielles d'eucalyptus et de
composants sé lectionné s contre les agents pathogè nes bacté riens multiré sistants . Pharma Biol . 2011 ; 49 ( 9 ):
893–899. doi : 10.3109/13880209.2011.553625 [ PubMed ] [ Google Scholar ]

16. Camporese A. Activité in vitro des huiles essentielles d' Eucalyptus smithii et Juniperus communis contre les bio ilms
bacté riens et perspectives d'ef icacité de la thé rapie inhalatoire complé mentaire dans les infections chroniques et
ré currentes des voies respiratoires supé rieures . Infez Med . 2013 ; 21 ( 2 ): 117-124. [ PubMed ] [ Google Scholar ]

17. Chandra H, Yadav E, Yadav JS. La ré ponse des macrophages alvé olaires à l'agent pathogè ne de la pneumopathie
d'hypersensibilité Mycobacterium immunogenum dé pend du gé notype et est mé dié e par les voies JNK et p38 MAPK .
PLoS One . 2013 ; 8 ( 12 ): e83172 doi: 10.1371/journal.pone.0083172 [ Article PMC gratuit ] [ PubMed ] [ Google
Scholar ]

18. Chandra H, Yadav JS. Antigè nes de cellules T de Mycobacterium immunogenum , agent é tiologique de la
pneumopathie d'hypersensibilité professionnelle . Mol Immunol . 2016 ; 75 : 168–177. doi :
10.1016/j.molimm.2016.05.020 [ PubMed ] [ Google Scholar ]

22 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

19. Frank EA, Carreira VS, Birch ME, Yadav JS. Les expositions aux nanotubes de carbone et à l'amiante induisent des
pro ils de pathologie pulmonaire qui se chevauchent mais distincts chez les souris CF-1 albinos non suisses . Toxicol
pathol . 2016 ; 44 ( 2 ): 211–225. doi: 10.1177/0192623315620587 [ PMC gratuit ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]

20. Yadav N, Chandra H. Modulation de la ré ponse inné e des macrophages alvé olaires dans les modè les pro-
in lammatoires, pro-oxydants et d'infection par l'extrait de menthe et les constituants chimiques : rô le des MAPK .
Immunobiol . 2017 ; https://doi.org/10.1016/j.imbio.2017.10.015 . [ PubMed ] [ Google Scholar ]

21. Moens U, Kostenko S, Sveinbjørnsson B. Le rô le des proté ines kinases activé es par la proté ine kinase activé e par les
mitogè nes (MAPKAPK) dans l'in lammation . Gènes . 2013 ; 4 : 101–133. doi : 10.3390/genes4020101 [ PMC gratuit ]
[ PubMed ] [ Google Scholar ]

22. Zhao C, Sun J, Fang C, Tang F. 1, 8-ciné ol atté nue l'in lammation pulmonaire aiguë induite par le LPS chez la souris .
In lammation . 2014 ; 37 : 566–572. doi : 10.1007/s10753-013-9770-4 [ PubMed ] [ Google Scholar ]

23. Bastos VP, Gomes AS, Lima FJ, Brito TS, Soares PM, Pinho JP et coll. Le 1,8-ciné ole inhalé ré duit les paramè tres
in lammatoires dans les voies respiratoires des cobayes soumis à un dé i à l'ovalbumine . Basic Clin Pharmacol Toxicol .
2011. 108 : 34–39. doi : 10.1111/j.1742-7843.2010.00622.x [ PubMed ] [ Google Scholar ]

24. Sera ino A, Sinibaldi Vallebona P, Andreola F, Zonfrillo M, Mercuri L, Federici M, et al. Effet stimulant de l'huile
essentielle d' eucalyptus sur la ré ponse immunitaire inné e à mé diation cellulaire . BMC Immunol 2008, 9 h 1 doi:
10.1186/1471-2172-9-17 PMC gratuit ] [ PubMed ] [ Google Scholar [

25. Rantzsch U, Vacca G, Duck R, Gillissen A. Effets anti-in lammatoires du myrtol standardisé et d'autres huiles
essentielles sur les macrophages alvé olaires de patients atteints de maladie pulmonaire obstructive chronique . Eur J
Med Res . 2009 ; 14 ( Suppl. IV ): 205–209. [ Article PMC gratuit ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]

26. Subramani R, Narayanasamy M, Feussner KD. Antimicrobiens d'origine vé gé tale pour lutter contre les agents
pathogè nes humains multiré sistants . 3 Biotechnologie . 2017 ; 7 ( 3 ): 172 doi : 10.1007/s13205-017-0848-9 [ PMC
gratuit ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]

27. Mé dine E, Pieper DH. S'attaquer aux menaces et aux problè mes futurs des bacté ries multiré sistantes . Curr Top
Microbiol Immunol . 2016 ; 398 : 3–33. doi : 10.1007/82_2016_492 [ PubMed ] [ Google Scholar ]

28. Pé rez-Rosé s R, Risco E, Vila R, Peñ alver P, Cañ igueral S. Effet de certaines huiles essentielles sur la phagocytose et
l'activité du systè me complé mentaire . J Agric Food Chem . 2015 ; 63 ( 5 ):1496–504. doi : 10.1021/jf504761m [
PubMed ] [ Google Scholar ]

29. Bode JG, Ehlting C, Haussinger D. La ré ponse des macrophages au LPS et son contrô le via l'axe p38(MAPK)-STAT3 .
Signal cellulaire . 2012 ; 24 : 1185–1194. doi : 10.1016/j.cellsig.2012.01.018 [ PubMed ] [ Google Scholar ]

30. Kim YH, Choi KH, Park JW, Kwon TK. LY294002 inhibe la production de NO induite par le LPS via une inhibition de
l'activation de NF-κB : mé canisme indé pendant de la phosphatidylinositol 3-kinase . Lettres immunitaires . 2005 ; 99 (
1 ): 45–50. [ PubMed ] [ Google Scholar ]

31. Luyendyk JP, Schabbauer GA, Tencati M, Holscher T, Pawlinski R, Mackman N. Analyse gé né tique du rô le de la voie
PI3K-Akt dans l'expression gé nique des cytokines et du facteur tissulaire induite par les lipopolysaccharides dans les
monocytes/macrophages . J Immunol . 2008 ; 180 ( 6 ): 4218–4226. [ Article PMC gratuit ] [ PubMed ] [ Google
Scholar ]

32. Bouchon A, Facchetti F, Weigand MA, Colonna M. TREM-1 ampli ie l'in lammation et est un mé diateur crucial du
choc septique . Nature . 2001 ; 410 ( 6832 ): 1103–1107. doi: 10.1038/35074114 [ PubMed ] [ Google Scholar ]

33. Murakami Y, Kohsaka H, Kitasato H, Akahoshi T. La ré gulation à la hausse induite par les lipopolysaccharides du
ré cepteur dé clencheur exprimé sur les cellules myé loı̈des-1 L'expression sur les macrophages est ré gulé e par la

23 sur 24 21/09/2022, 17:57

Suppression des réponses inflammatoires et infectieuses dans les ma... https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5687727/

prostaglandine endogè ne E2 . J Immunol . 2007 ; 178 ( 2 ): 1144–1150. [ PubMed ] [ Google Scholar ]

34. Gurung P, Li B, Subbarao Malireddi RK, Lamkan i M, Geige TL, Kanneganti TD. Chronic TLR stimulation controls
NLRP3 in lammasome activation through IL-10 mediated regulation of NLRP3 expression and Caspase-8 activation. Sci
Rep. 2015; 5: 14488 doi: 10.1038/srep14488 [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

35. Baroja-Mazo A, Martı́n-Sá nchez F, Gomez AI, Martı́nez CM, Amores-Iniesta J, Compan V, et al. The NLRP3
in lammasome is released as a particulate danger signal that ampli ies the in lammatory response. Nat Immunol. 2014;
15:738–748. doi: 10.1038/ni.2919 [PubMed] [Google Scholar]

36. Guo H, Callaway JB, Jenny Ting PY. In lammasomes: mechanism of action, role in disease, and therapeutics. Nat
med. 2015; 21(7): 671–887. [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

37. Lloberas J, Valverde-Estrella L, Tur J, Vico T, Celada A. Mitogen-activated protein kinases and mitogen kinase
phosphatase 1: A critical interplay in macrophage biology. Front Mol Biosci. 2016; 28(3): 28 doi:
10.3389/fmolb.2016.00028 [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]

38. Tucsek Z, Radnai B, Racz B, Debreceni B, Priber JK, Dolowschiak T, et al. Suppression de la transduction pré coce du
signal induite par le LPS dans les macrophages par un produit de dé gradation des polyphé nols : un rô le critique de
MKP-1 . J Leukoc Biol . 2011 ; 89 ( 1 ): 105–11. doi : 10.1189/jlb.0610355 [ PubMed ] [ Google Scholar ]

39. Khan NM, Haseeb A, Ansari MY, Devarapalli P, Sara HS, Haqqi TM. La wogonine, une petite molé cule dé rivé e de
plantes, exerce de puissants effets anti-in lammatoires et chondroprotecteurs grâ ce à l'activation des voies de
signalisation ROS/ERK/Nrf2 dans les chondrocytes humains de l'arthrose . Radic libre Biol Med . 2017 ; 106 :
288–301. doi : 10.1016/j.freeradbiomed.2017.02.041 [ PMC gratuit ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]

40. Linda M, Hayes A, Caprnda M, Petrovic D, Rodrigo L, Kruzliak P, et al. Monoxyde d'azote synthase inductible :
bonne ou mauvaise ? Pharmacologue Biomed . 2017 ; 93 : 370–375. doi : 10.1016/j.biopha.2017.06.036 [ PubMed ] [
Google Scholar ]

41. Gochman E, Mahajna J, Shenzer P, Dahan A, Blatt A, Eliakim R, et al. L'expression d'iNOS et de nitrotyrosine dans la
colite et le cancer du cô lon chez l'homme , Acta Histochem . 2012 ; 114 : 827–835. doi : 10.1016/j.acthis.2012.02.004
[ PubMed ] [ Scholar Google

42. Zhao X, Kong J, Zhao Y, Wang X, Bu P, Zhang C, et al. Le silençage gé nique de TACE amé liore la stabilité de la plaque
et amé liore le remodelage vasculaire dans un modè le d'athé rosclé rose chez le lapin . Sci. Rép . 2015 ; 5 : 1–13. [ Article
PMC gratuit ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]

43. Atochina-Vasserman EN, Beers MF, Kadire H, Tomer Y, Inch A, Scott P, et al. L'inhibition sé lective de l'activité
inductible de NO synthase in vivo inverse les anomalies in lammatoires chez les souris dé icientes en proté ine D de
surfactant . J. Immunol . 2007 ; 179 : 8090–8097. [ Article PMC gratuit ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]

44. Chi H, Flavell RA. Acé tylation de MKP-1 et contrô le de l'in lammation . Signal sci . 2008 ; 1 ( 41 ): pe44 doi :
10.1126/scisignal.141pe44 [ PMC gratuit ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]

45. Chi H, Barry SP, Roth RJ, Wu JJ, Jones EA, Bennett AM, et al. Ré gulation dynamique des cytokines pro- et anti-
in lammatoires par la MAPK phosphatase 1 (MKP-1) dans les ré ponses immunitaires inné es . Proc Natl Acad Sci USA .
2006 ; 103 ( 7 ): 2274–2279. doi : 10.1073/pnas.0510965103 [ PMC gratuit ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]

46. Marteau M, Mages J, Dietrich H, Servatius A, Howells N, Cato AC, et al. La phosphatase 1 à double spé ci icité
(DUSP1) ré gule un sous-ensemble de gè nes induits par le LPS et protè ge les souris du choc endotoxique mortel . J Exp
Méd . 2006 ; 203 ( 1 ): 15-20. doi : 10.1084/jem.20051753 [ PMC gratuit ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]

24 sur 24 21/09/2022, 17:57