Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
TP N°03
Dosage l’urée plasmatique
Réalisée par:
• GHERMI Mohamed.
• BETTAYEB Mohamed Amine.
• TAHRI Mahmoud.
• CHAREF KHODJA Meriem.
L'urée est le composé azoté le plus abondant de l'urine humaine. Son dosage dans
l'urine est un témoin du métabolisme protidique permettant de comparer les
pertes quotidiennes l'azote aux apports.
Le dosage de l'urée dans le sang est généralement pratiqué en faisant appel à une
méthode enzymatique (uréase).
I- Intérêt physiopathologique :
L'urée est une molécule très hydrosoluble, électriquement neutre. C'est la
forme principale d'élimination des déchets azotés du métabolisme des protéines
chez l'Homme. La plus grande partie de l'ammoniac (NH3), produit dans le foie
par la désamination des acides aminés, est transformée en urée (uréogenèse ou
cycle de Krebs-Henseleit), au niveau du foie et du cerveau.
L'urée est complètement filtrée par le glomérule et réabsorbée partiellement au
niveau du néphron, de façon inversement proportionnelle au débit urinaire.
L'urée est la première substance dont l'augmentation dans le plasma a été associée
au «mal de Bright». À ce titre, elle fut longtemps utilisée pour apprécier la fonction
rénale.
La concentration de l'urée sanguine (ou urémie), correspond à un équilibre entre
sa production, le volume de diffusion (correspond à l'eau totale, soit environ 60%
du poids corporel), et son excrétion urinaire.
Étant donné tous les facteurs extrarénaux susceptibles d'influencer l'urémie, pour
évaluer la fonction rénale, le dosage de la créatinine dans le sang et dans l'urine lui
a été préféré.
De même, le calcul de la clairance de l'urée a été remplacé par celui de la clairance
de la créatinine.
L'urée est le composé azoté le plus abondant de l'urine humaine. Son dosage
contribue à l'exploration de la fonction rénale, et chez le sujet sans affection
hépatique ou rénale, il est un témoin du métabolisme protidique permettant de
comparer les pertes quotidiennes d'azote aux apports prescrits et ainsi de suspecter
une mauvaise observance à un régime ou un état hypercatabolique si l'excrétion
d'azote est supérieure aux entrées.
1 RAFUNIT © - UDL - Pharmacie
TP N 3 DOSAGE DE L’UREE PLASMATIQUE
SMATIQUE (AZOTEMIE)
II-
II- Métabolisme de l’urée (Cycle de l’urée) :
III-
III- Dosages de l’urée dans l’organisme :
1- Etape pré-
pré-analytique :
a- Urée sanguine :
L'urée étant très diffusible, sa concentration est identique dans le
plasma et les globules rouges. Les résultats obtenus à partir du plasma,
du sérum, ou du sang sont équivalents.
Le prélèvement est de préférence effectué chez le sujet à jeun.
Le sang est recueilli dans des tubes avec ou sans anticoagulant.
Le fluorure de sodium est à éviter car il inhibe l'uréase utilisée dans les
techniques enzymatiques contrairement à l'iodoacétate qui ne l'affecte
pas.
b- Urée urinaire :
Le dosage est effectué, soit sur un échantillon des urines de 24 heures,
soit sur une miction.
Étant donné la consommation possible de l'urée par des germes
possédant une uréase, les urines peuvent être conservées pendant 7
jours à+4°C ou 1 mois à -20°C.
2- Techniques de dosages :
a- Techniques chimiques :
Méthode à l’hypobromite de Na: Na:
L'urée est traitée par une solution alcaline d'hypobromite de sodium,
ce qui donne un dégagement d'azote qui est mesuré dans l'uréomètre
et comparé à l'azote dégagé, dans les mêmes conditions, par une
solution d'urée de titre connu.
La défécation du sérum est effectuée par une solution d'acide
trichloracétique.
L'appareillage était représenté par l'uréomètre d'Yvon et une cuve à
mercure. Cette technique, applicable aussi bien au sérum qu'à l'urine
n'est plus utilisée depuis longtemps, mais c'est elle qui a donné le
nom d'azotémie au taux d'urée dans le sang.
b- Techniques enzymatiques :
L'urée est principalement dosée par des méthodes basées
basées sur l'action
préliminaire de l'uréase suivie de réactions auxiliaires différentes.
Les techniques enzymatiques utilisées par moins de 20% des
laboratoires
aboratoires il y a 30 ans sont aujourd'hui très largement majoritaires.
Technique électrochimique :
L'uréase dégrade l'urée en NH4+ qui fait varier la conductivité. On
mesure la cinétique de la variation de la conductivité avec une
électrode sélective de conductivité.
Technique réflectométrique :
Les plaques sont constituées de plusieurs couches réactionnelles sur
un support en polyester. La méthode analytique est basée sur
l'hydrolyse de l'urée en présence d'uréase pour donner de
l'ammoniac et du gaz carbonique. Une réaction colorimétrique
permet de déterminer par réflectométrie la concentration en
ammoniac produit.
Cette méthode analytique à l'avantage d'être spécifique, rapide et
d'éviter l'utilisation de produits corrosifs ainsi que la
déprotéinisation.
Méthode colorimétrique
colorimétrique de Berthelot :
Les ions ammonium produits par l'action de l'uréase réagissent en
milieu alcalin avec l'hypochlorite de Na, en présence de
nitroprussiate de Na, pour former une monochloramine qui dans un
2ème temps réagit avec deux phénols pour former un indophénol
responsable du développement de la coloration verte mesurée à
580nm.
Technique de référence :
Une technique utilisant le couple uréase/glutamate-déshydrogénase
a été proposée par le Center for Disease Control (CDC) comme
technique de référence pour le dosage de l'urée sanguine.
IV-
IV- Application au TP (Echantillon N°105) :
1- Réactif :
R1 : Nitroprussiate de Na (catalyeur) + Uréase.
R2 : Hypochlorite de Na + NaOH.
[Etalon] = 0,5 g/l.
g/l
2- Echantillon :
Sérum (N°105
N°105).
N°105
Faire une dilution au 1/3.
1/3
4- Résultats :
Les résultats obtenus sont les suivants :
ETALON ECHANTILLON
DO 0,450 0,670
[Urée] = (dilution)-1
é
,
[Urée] = 0,5 3
,
Urémie N Urémie N
(mmol/l) (g/l)
Nouveau-
Nouveau-né (< 4 jours) 1,5 - 8,0 0,09 - 0,48
Nouveau-
Nouveau-né (> 4 jours) 1,0 - 4,2 0,06 - 0,25
Nourrisson et enfant jusqu'à 1,6 - 6,5 0,10 - 0,40
5-6 ans
Enfant de plus de 7 ans et 2,5 - 7,5 0,15 - 0,45
adulte
• Remarque :
Dans les pays anglo-saxons, le dosage de l'urée dans les liquides
biologiques est exprimé non par molécule d'urée mais par
concentration d'azote uréique exprimée en g/L, qu'il faut multiplier par
deux pour obtenir l'urée plasmatique en g/L.
Interprétation :
Les valeurs obtenues (16,67 mmol/l – 1g/l) sont supérieurs à (2x) les valeurs
usuelles ce qui pourrait résulter de deux mécanismes essentielles que sont :
Par défaut d'excrétion rénale :
L'hyperurémie est alors nette, souvent supérieure à 16 mmol/L.
Elle est accompagnée d'une baisse de l'élimination urinaire de l'urée.
Ce défaut d'excrétion (insuffisance rénale) peut avoir plusieurs
origines :
- Origine prérénale : il peut s'agir d'une oligurie que l'on rencontre
dans les insuffisances cardiaques ou les cirrhoses ascitiques, ou d'une
déshydratation extracellulaire due à une fuite hydrosodée consécutive à
une diarrhée et/ou des vomissements.
- Origine rénale : les néphropathies aiguës (glomérulonéphrites,
pyélonéphrites), ou chroniques entraînent l'installation d'une
insuffisance rénale de façon brutale ou progressive.
- Origine post-rénale : l'insuffisance rénale est liée à la présence d'une
obstruction au niveau de l'appareil urinaire (c'est le cas, par exemple,
d'un cancer ou d'un adénome prostatique).
Autres variations :
Variations physiologiques :
• Les variations de l'urée dans les liquides biologiques sont très
dépendantes des apports alimentaires.
• Les nouveau-nés de plus de 4 jours et les nourrissons présentent
des concentrations d'urée plasmatiques inférieures d'environ
40% par rapport aux concentrations observées chez les adultes.
• Les valeurs élevées observées à la naissance correspondent à
l'épisode d'insuffisance rénale néonatale.
• La concentration d'urée dans le sang augmente avec l'âge. Ainsi,
après 50 ans une urémie à 8 mmol/L n'est pas considérée comme
pathologique.
• Chez la femme, l'urémie est inférieure de 25% à celle de
l'homme.Elle est abaissée au cours de la grossesse, du fait de
l'augmentation de l'espace liquidien.
Diminution de l’urémie :
Elle ne s'observe que rarement :
• Dans les carences importantes en protéines alimentaires (ou les
malabsorptions digestives).
• Dans les insuffisances hépatiques graves avec un effondrement •
de l'uréogenèse.
• En cas de déficit enzymatique au niveau du cycle de
l'uréogenèse.
V- Applications pratiques :
1- Intérêt de la mesure conjointe de l'urée et la créatinine
sanguine :