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Proprits physicochimiques des acides

amins

Introduction :
Les aa sont des molcules
organiques possdant un squelette
carbon et deux fonctions: une
amine NH2 et une acide carboxylique
COOH , constituant les units
structurales de base des protines
Les aa ont des proprits physico
chimiques dont linteret majeur
detude est leur evaluation
qualitative et quantitative

Proprits physiques:

Isomerie optique
Notion de carbone asymetrique C*
Les aa lexception du glycocolle sont
dous dactivit optique appele
galement pourvoir rotatoire
Devient la lumiere droite ou a
gauche du plan de la lumiere polarise
Le pouvoir rotatoire est de signe et de
valeur absolue

Il est mesur dans les conditions


exprimentales 20 C et
longueur donde dans la raie D
du sodium soit 546,1 nm
Cette activit optique signe la
prsence dans la molcule daa
sauf pour le glycocolle dau
moins un atome de carbone
substitu asymtriquement
Chaque aa possde 2 isomres
optiques

Ces deux molcules d'alanine sont l'image l'une de l'autre


dans un miroir et ne sont pas identiques car non
superposables: ce sont des nantiomres

Reprsentation de Fischer
On applique aux aa la
reprsentation de Fischer
comme pour les oses , le
groupement NH2 jouant le
rle de groupement OH

En fonction du groupement NH2


port par le C on dfinit deux
sries daa
Serie L: NH2 gauche
Serie D: NH2 droite
Sachant que lappartenance la
srie ne dfinit pas le sens du
pouvoir rotatoire indiqu par + pour
dviation droite et pour
dviation a gauche

Certains de ces aa comme la


thronine possde un 2eme
carbone asymtrique dans ce
cas le compos naturel est
appel L ,les deux autres stroisomres dont les positions
relatives des substituants sont
diffrents sont appels Allo

Les aa L reprsentent la
grande majorit des aa qui se
trouvent dans les protines
Les aa D se rencontrent dans
certaines protines produites
par les organismes exotiques
(ex: mollusques) ce sont des
composs abondants des parois
cellulaires des bactries

Dans le sang ,lisomere le plus


frquent est allo-isoleucine
Racemisation: cest la
transformation de laa de la
serie D la serie L ou le
contraire par des isomerarses

Aucun aa nabsorbe dans le spectre


visible
Tous les aa absorbent dans lUV lointain
Le dimre de cystine, cystine absorbe
240 nm
Phnylalanine absorbe 260 nm
Tyrosine et tryptophane ont un
maximum dabsorption dans lUV 280
nm du fait de la prsence de leur noyau
aromatique , cette proprit
intressante est utilise pour une
valuation quantitative des protines au
spectrophotomtre dans la bande des
280 nm

Solubilit et point de
fusion:
Les aa sont trs solubles dans les solvants
polaires ,ex: eau , alcool
A moindre degr dans les solvants
apolaires
Cette solubilit est dpendante des
proprits de la chaine latrale R
Elle diminue avec le nbe datomes de C du
radical
Augmente si ce radical est porteur de
fonctions polaires NH2 COOH ou hydrophile
OH
Point de fusion est lev > 200 c

Ionisation:
Composs amphotres: les acides amins
contiennent un groupement COOH acide et un
groupement amine NH2 basique
En solution , ces groupement existent sous 2
formes ,lune charge et lautre neutre
R-COOH
R-COO- + H+
\ R-NH3
R-NH2 + H+
Ces aa sont appels pour cette structure di
ioniques

amphoteres

Lionisation varie avec le pH:


En milieu acide: la fonction amine sionise
en captant un proton, laa se trouve sous
forme de cation
En milieu basique: la fonction acide
sionise en librant un proton ,laa se
trouve sous forme danion
Le pH: par le quel les deux dissociation
seffectuent est appel point isolectrique
pHi
Definition du pHi: cest le pH pour lequel
on a un ion dipolaire ou zwitterion de

De part et dautre du pHi ,on definit


des pH , qui correspondent une
demi dissociation de COOH et NH3+
ainsi que pour le groupement R
ionisable , ce sont les pK
pK1: pour COOH
pK2: pour NH3+
pKR: pour radical
pHi des aa: tableau

titration des aa
les aa ont des courbes de titration
caracteristiques
la titration implique laddition ou
lelimination graduelle de protons

aa neutre
les aa avec un seul
groupement
amin ,un
seul groupement
carboxylique et un
groupement R qui ne sionise
pas possdent des courbes de
titration proches celle de la
glycine

Equilibre dionisation glycine ( suivre au tableau)

ce groupe daa neutres est


caractris par le fait quils ont
des valeurs Pk1 du groupement
COOH et Pk2 du groupement
NH3+
la reprsentation comporte 2
tapes distinctes, chacune
correspondant lelimination dun
H+ de la glycine

au point median du 1er stade de titration dans le


quel le grpment COOH perd son H+,et des
concentrations equimolaires de donneurs de
protons NH3+-CH2-COOH et accepteur de H+
NH3+-CH2-COO- sont presents pH =Pk1 du
groupement COOH = 2,34
lorsque la titration est poursuivie ,un autre point
est atteint pH = 5,97
point dinflexion,lelimination du 1er proton est
pratiquement complete, ce pH la glycine est sous
forme dion dipolaire pHi
le second stade de titration correspond
lelimination dun proton partir NH3+ un
pH=pk2=9,6 ou existe un equilibre entre les deux
formes NH3+-CH2-COO-/ NH2-CH2-COOla titration est complete un pH=12 , ce point la
forme predominante est NH2-CH2-COO-

les aa avec un

groupement

ionisable
ont des courbes de titration plus
complexes avec 3 etapes
correspondant aux 3 possibilts
detapes dionisation,ils possedent
ainsi 3 valeurs de pK: PK1 ,PK2 ,PKR
aa dicarboxylique
exemple glutamate
relation et courbe de titration
aa basique
exemple: histidine

Conclusion 1ere partie (ppte


physiques des aa):
Les aa sont des molcules organiques
constituant lunit de base des
protines ,sont solubles dans les solvants
polaires , dous dactivit optique
,absorbent dans lUV et possdant un
caractre amphotre , chaque aa
possde une courbe de titration qui le
caractrise en fonction de la fonction
amine, carboxylique et du radical R

Proprits chimiques

Groupements chimiques fonctionnels dun acide amin

Proprits lies la prsence de


la fonction carboxylique ( COOH)

Amidification (amidation)
Formation de sels
Estrification
dcarboxylation

Mmes ractions quun acide


organique ordinaire
Peu ractif au pH
physiologique ,car fortement
stabilis par rsonnance

Amidification

Application/interet :
Asparagine
Glutamine
Liaison peptidique : synthse
des protines

Formation de sels

Action dune base dont le pH doit


tre suprieur au pHi de lAA (en
raison de la faible dissociation du
carboxyle)

Application/ intrt :
Titration des acides amins

Estrification par un alcool

APP; intrt
Protection temporaire de la fonction
COOH : synthse protique
Sparation des AA en phase gazeuse
et liquide, en produisant des drivs
esters butyliques, qui sont des
liquides distillables

Dcarboxylation

Possible par voie chimique ou


enzymatique :
Chimique : en prsence de Barithe :
chauffage
Ba (OH)2
Enzymatique : catalyse par les
carboxylases qui ncessitent le
phosphate de pyridoxal comme
coenzyme

Intrt

:
Formation de corps proprits
particulires :
Histidine : histamine (vasodilatateur)
Tyrosine : tyramine
Dosage des aa par la mesure de CO2
dgag (ancien procd)

Proprits lies la
prsence de fonction
amine (-NH2)
Ce sont des ractions gnrales damines
primaires
Trs ractifs : le doublet lectronique de
lazote est un puissant nuclophile
Cette ractivit a t utilise dans
lidentification des AA et llucidation des

Amidification
Formation de sels
N-Alkylation et N-Arylation
Raction avec les aldhydes
Carbamylation
Formations de composs fluorescent

Dansylation
Action de la fluorescamine

Dsamination

Amidification :idem COOH

Formation de sels

Application/interet :
In vitro ,cette proprit est
utilise pour bloquer la fonction
amine : blocage de la synthse
protique

Alkylation et N-Arylation (Raction de Sa

Les H peuvent tre remplacs par des


radicaux
Aliphatiques, obtention des drivs Nmthyls , N-dimethyls et Ntrimethyls
Aromatiques ,tels que les drivs
dinitrophnyls (DNP)

1-Fluoro-2,4-dinitrobenzne (FDNB)

La substitution dun H de la fonction NH2


par un groupement aryle (aromatique)
conduit une fonction amine secondaire
Le 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzne
(FDNB)=ractif de SANGER ragit en
milieu alcalin et chaud avec les
fonctions amines par substitution
nuclophile,
Le N-2,4-dinitrophenyl est un
Compos jaune
Absorbe en UV (365 nm)

Application/ interet
Dosage des AA
Identification de lN de lAA
terminal dans les proteines
Elle a permis FREDERICK SANGER
(1953) dlucider la structure I aire de
linsuline

Raction avec les


aldhydes (formation
dimines: base de schiff)

Les fonctions amines ragissent


rversiblement avec les aldhydes
pour donner des bases de Schiff
qui sont labiles
La proline qui contient une
fonction amine secondaire ne
ragit pas avec les aldhydes
Reaction avec un ose : Raction de
Maillard

App/interet :
In vitro : dtection des AA

Carbamylation ( action de
PITC : ractif dEDMAN )

PITC
+
PTH AA

AA

-----------------

(PITC: phnylisothiocyanate

Elle a lieu avec un isocyanate


(PITC: phnylisothiocyanate)
En milieu alcalin on obtient un
driv N-phnyl thiocarbamyl
En milieu acide ce dernier se
cyclise en donnant un phnylthiohydantoine amine acide (PTHAA)

Le PTH-AA rsultant est un :


Composs caractristique de
chaque aa (nature du R)
Stable
Dtectable dans lUV ( 245254nm)

App/interet :
PTH est identifiable par HPLC
-dosage des aa
le PITC est spcifiquement utilis
pour dterminer lenchainement
des aa dans les chaines
peptidiques (squenage)

Formation de composs
fluorescents

Dansylation

Le chlorure de dansyle= 1dimthylamino-naphtalene-5sulphonique ragit facilement


avec les fonctions amines
---- drivs sulfonamides
dansyls fluorescents

chlorure de dabsyle les mmes proprits

App/ intrt :
Identification de lN de laa
terminal dans les protines
A supplant la mthode de
SANGER car plus sensible

Action de la fluorescamine
La fluorescamine ragit en milieu
aqueux et pH = 8-9 pour former
des substances fortement

App /intrt :
Technique trs sensible car permet la
dtection de quantits daa de
lordre de ng
Analyse squentielle des peptides uss
pour la rvlation des aa en
chromatographie sur couche mince

samination par lacide nitreux :

ormation dun deriv diazoique instable

La mesure de lazote dgag dans


un appareil gazomtrique permet
le dosage des aa mthode

Van Slyke

Proprits lies la
prsence simultane des
fonctions carboxylique et
amine

arboxylation et dsamination oxyda

tion avec la NINHYDRINE

La ninhydrine :
Compos aromatique
Oxydant

Rvlateur des aa
Chauff en exces avec les aa ,il
conduit un chromophore= pourpe de
RUHEMANN (bleu-violet)
Tous les acides amins sont colors en
pourpre de ruhenmann , sauf la
proline,en jaune

Proprits lies la prsence


des chaines latrales

Seules les proprits


caractristiques de la chaine
latrale rgissent la ractivit des
AA incorpors dans les protines
3raisons justifient letude de ces
ractivits :

Les protines peuvent tre


chimiquement modifies en tenant
compte de la ractivit de
certaines chaines latrales
La dtection et la quantification
des AA dpendent de ractions
spcifiques 1 ou plusieurs AA
Les fonctions biologiques des
protines dpendent de la nature
et de la ractivit des chaines

Les chaines latrales non


ractives :
Les AA concerns sont : Ala ,
Val (aliphatique) et Phe

Chaines latrales carboxyle


Les aa acides ,ASPARTATE , GLUTAMATE
sont transforms en amides
,ASPARAGINE ,GLUTAMINE

Les chaines latrales amines :


Le groupement amin de la LYSINE ,par
sa ractivit et son accessibilit
lextremit de la chaine latrale, est
lorigine de :
Condensation des aldoses et ctoses
sur les protines: glycation des
protines (Raction de MAILLARD)
La fixation des coenzymes
prosthtiques sur leurs apoprotines
Letablissement de liaisons
covalentes entre molcules de

Les chaines latrales


Soufres :
a. Le groupement Thiol (SH) de la
cysteine
b. Le groupement Thioester de la
methionine

a.Le groupement Thiol (SH) de


la cystine
. Nuclophile apte ragir comme
groupement amine : alkylation,
acylation et sulfonylation
. Son oxydation permet la formation
de ponts disulfure (Protines)
-CH2-SH + SH-CH2 -- CH2-S-S-CH2

b. Le groupement Thioester de la
mthionine :
In vitro, le bromure de cyanogne
(CNBr) ragit avec le soufre dune
mthionine et coupe la chaine
polypeptidique cet endroit

Les chaines latrales alcools et


amides :
Peu ractifs
La serine intervient dans des
mcanismes de catalyse
enzymatique
La ser , la thr et la tyr sont des
sites potentiels de phosphorylation
La ser ,la thr et lAsn sont des sites
potentiels de N- et O-glycosylation
Lhydroxyle de la tyrosine donne au
noyau phnyle une ractivit assez

Les chaines latrales


Aromatiques :
Le gpt phnolique comporte un
oxygne trs ractif
,il peut tre :
Aryl, acyl, sulfonyl
Il peut subir egalement des reactions
de :
Nitration
Phosphorylation
Iodation enzymatique : etape
importante de la biosynthese des

Conclusion :

La ractivit chimique des AA est en


relation directe avec la ractivit chimique
de ces diffrents gpts fonctionnels
5 ractions fondamentales, directement
dpendantes des proprits chimiques de
NH2 (4dentre elles) et du COOH
(ninhydrine) sont fondamentales pour
lanalyse quantitative des AA , il sagit de
l'action de FDNB, DNS-Cl ,PITC,
Fluorescamine , ninhydrine
Les chaines latrales (R) et leur
fonctionnalit associe dterminent les
proprits biochimiques des AA a linterieur